ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE

Gestión Tecnológica Agropecuaria

Unidad 2. Técnicas moleculares básicas para el estudio de la Biotecnología

Octubre de 2016

Luzdary Salamanca Zúñiga – CC. 34.567.668Grupo 4

1. Hibridación de ácidos nucleicos (Secuenciación, Southern, Western y Northern-blot).  

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=hibridaci%C3%B3n&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKEwja97HBnobQAhUE6iYKHVOXBA0QsAQIVA&dpr=1.25

• Es la construcción artificial de ácidos nucleicos bicatenarios a partir de dos monocatenarios usando la complementariedad de bases.

• Se trata, por tanto, de un proceso de unión de dos cadenas complementarias de ADN, ARN o de ADN y ARN para formar una molécula de ácido nucleico de doble cadena.

• Es un método muy versátil que permite estudiar el grado de relación genética entre dos ácidos nucleicos.

Hibridación

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=hibridaci%C3%B3n&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKEwja97HBnobQAhUE6iYKHVOXBA0QsAQIVA&dpr=1.25

Complementariedad secuencia de bases):

Es útil para saber el contenido de las bases de un ADN o conocer a partir de una secuencia como será la cadena complementaria.

Imagen tomada de https://www.google.com.co/search?q=Complementariedad+(secuencia+de+bases):&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjXio_MmYbQAhUE7WMKHSSbDCcQsAQIIA#imgrc=shJD8g8sQIm_RM%3A

Moduladores de la Hibridación

Temperatura:

La temperatura elevada rompe los puentes de hidrógeno y separa las hebras del ADN (desnaturalización). Esto ocurre alrededor de los 90º (temperatura de fusión). Cuando una solución de DNA que ha sido calentada se enfría lentamente se produce la rehibridación dando lugar a la estructura inicial. Tal reasociación ocurre sólo si las secuencias de bases son complementarias. Por lo tanto, la hibridación permite la formación de complejos bicatenarios no naturales de DNA:DNA y ADN:ARN.

Imagen tomada de https://www.google.com.co/search?q=Complementariedad+(secuencia+de+bases):&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjXio_MmYbQAhUE7WMKHSSbDCcQsAQIIA#imgrc=shJD8g8sQIm_RM%3A

Moduladores de la Hibridación

pH y productos químicos:

El pH alto (pH>11) rompe los puentes de hidrógeno, por lo que se produce desnaturalización. Esto también pueden producirlo agentes químicos como la urea y la formamida e incluso el agua destilada, que impide la neutralización de los grupos fosfato de la molécula por sales de sodio y magnesio; al ser los grupos fosfato de marcado carácter negativo, su repulsión causa la separación física de las hebras y, por tanto, su desnaturalización.

Imagen tomada de https://www.google.com.co/search?q=Complementariedad+(secuencia+de+bases):&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjXio_MmYbQAhUE7WMKHSSbDCcQsAQIIA#imgrc=shJD8g8sQIm_RM%3A

Moduladores de la Hibridación

Técnicas basadas en

la Hibridación

I. Blotting

II. CGH (Hibridaci

ón genómica comparad

a)

III. Microarrays de ADN

IV. Hibridación in situ

TÉCNICAS BASADAS EN LA HIBRIDACIÓN

I. Blotting: Southern blot, Northern blot

1.1. Southern blot

Es un método de biología molecular

que permite detectar la

presencia de una secuencia de ADN

en una mezcla compleja de este ácido nucleico.

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=southern+blot&biw=1024&bih=530&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjXpqKTpobQAhWBUyYKHe9WAecQ_AUICCgB#imgrc=y8z0aPRo1ZYfWM%3A

I. Blotting: Southern blot, Northern blot

1.2. Northern blot

Es una técnica de separación de ARN.

Gracias a ella podemos a partir de una muestra biológica, de cualquier

organismo, podemos aislar un ARN en particular si conocemos al

menos parte de su secuencia. Además

permite separar los ARN dependiendo de su

tamaño.

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=Northern+blot&biw=1024&bih=530&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwil1fuXp4bQAhWHVyYKHbDlB3wQ_AUIBigB#imgrc=qXQk_spJuwv9yM%3A

II. CGH (hibridación genómica comparada):

CGH Es una técnica útil en la aproximación diagnóstica de

los niños con retraso global del desarrollo y del fenotipo

dismórfico y permite una mayor detección de alteraciones

comparada con el cariotipo.

Imagen tomada de: http://www.taper.es/hibridacion-genomica-comparada-cgh/

III. Microarrays de ADN Son una técnica que se emplea para compar la

expresión génica diferencial bajo dos

condiciones distintas, como puede ser comparar

la expresión génica en células normales con

células cancerígenas. Se basa en la capacidad de

hibridación entre moléculas de ADN

complementarias entre sí.

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=Microarrays+de+ADN&biw=1024&bih=530&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjykev1robQAhWF8CYKHQykDogQ_AUIBigB&dpr=1.25#imgrc=jNgwd6uukKuGqM%3A

IV. Hibridación in situ

Es una técnica de hibridación que se realiza directamente

sobre tejido, células o cromosomas localizados sobre

un soporte sólido, habitualmente un portaobjetos. Está basada en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridarse entre sí, es decir, la

existencia de determinada secuencia de ADN o ARN, que

resulta complementaria con otra secuencia.

Imagen tomada de: https://www.google.com.co/search?q=Hibridaci%C3%B3n+in+situ&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjskNvor4bQAhWG5CYKHYTKAEAQsAQIUQ#imgrc=MV3Gh4GiEkZlPM%3A

BIBLIOGRAFÍAhttps://www.google.com.co/search?q=Complementariedad+

(secuencia+de+bases):&biw=1024&bih=530&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0ahUKEwjXio_MmYbQAhUE7WMKHSSbDCcQsAQIIA#imgrc=shJD8g8sQIm_RM%3A

Contreras, Ramon. (2014). Técnicas en Biología. Recuperado de: http://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-biologia/northern-blot

, Clavijo Hurtado, Sergio Alejandro. (2013). Universidad del Rosario. Uso de la

hibridación genómica comparativa-array (hgc-a) en pacientes con retraso global del desarrollo y fenotipo. Recuperado de de: http://repository.urosario.edu.co/bitstream/handle/10336/4219/80873230-2013.pdf;jsessionid=0E476337358F83DE00B2CBC1EAEA7E22?sequence=1

Pedro L. Fernández Ruiz. Universidad de Barcelona . Hibridación de ácidos nucleicos (consultado el 21 de mayo de 2015). Recuperado de http://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=dd48aeb8-9e38-4541-bcfb-d75fd6b2ee9f

http://noticiasbiociencias.blogspot.com.co/2011/12/nociones-de-biologia-que-son-los.html