PENDAHULUAN

1. Pemeriksaan Angka Kuman

Prosedur Pemeriksaan

a. Siapkan 6 tabung susun pada rak tabung.

Masing – masing tabung secara berurutan diberi tanda 10-1 , 10-2,10-3,10-4,10- 5,10-6

sebagai kode pengenceran dan tanggal pemeriksaan.

b. Siapkan pula 7 petridish steril

Pada 6 petridish diberi tanda pada bagian belakangnya sesuai dengan kode

pengenceran dan tanggal pemeriksaan seperti pada butir a. Satu petridish lainnya

diberi tanda “Kontrol”

c. Pada tabung kedua sampai dengan keenam , di isi dengan 9ml air garam phisiologis

atau aquadest atau larutan garam phosphate.

d. Kocok bahan spesimen dengan pengenceran 10-1 dalam labu Erlenmeyer sebanyak

25kali sampai homogeny. Ambil 10ml masukan pada tabung ke satu.

e. Pemindahan 1ml bahan dari tabung ke satu dalam tabung ke dua dengan pipet,

cairan dibuat sampai homogen.

f. Pindahkan 1ml bahan dari tabung kedua dalam tabung ketiga dengan pipet, cairan di

buat sampai homogeny.

g. Demikina seterusnya dilakukan sampai tabung ke -6. Pengenceran yang diperoleh

pada keenam tabung adalah : 10-1 , 10-2,10-3,10-4,10-5,10-6 sesuai dengan kode

pengenceran yang telah tercantum sebelumnya.

h. Dari masing – masing tabung diatas dimulai dari tabung keenam dan menggunakan

pipet steril, diambil 1ml dimasukan ke dalam masing- masing petridish steril ,

sesuai dengan kode pengenceran yang sama.

i. Kemudian kedalam masing – masing petridish di tuang Plate Count Agar cair yang

telah dipanaskan pada waterbath ±45ºc sebanyak 15 – 20ml. masing – masing

petridish digoyang perlahan – lahan hingga tercampur merata dan dibiarkan hingga

dingin dan membeku.

j. Masukan dalam Inkubator 370c selama 2 x 24 jam dalam keadaan terbalik.

k. Kontrol terbuat dari cairan air garam phisiologis atau aquadest atau larutan garam

buffer phosphate , untuk pemeriksaan Bacillus cereus harus menggunakan larutan

garam buffer phosphate , dimasukan kedalam petridish “Kontrol” dan dituangi Plate

Count Agar cair tersebut diatas sebanyak 15-20ml.

l. Pembacaan dilakukan setelah 2x24 jam dengan cara menghitung jumlah koloni

yang tumbuh pada tiap petridish.

A. Test pendahuluan (presumtive test )

Media yang diperlukan : Lactose broth

Cara pemeriksaan dan pembacaan hasil :

a. Siapkan 7 tabung reaksi yang berisi media lactose broth dan disusun pada rak tabung reaksi yang

sebelumnya masing – masing tabung ddiberi tanda sebagai berikut :

- Nomor urut

- Volume / kode batang

- Tanggal pemeriksaan

b. Dengan pipet steril ambil bahan specimen dengan pengenceran 10-1 masukan pada :

- 5 tabung lactose broth masing –masing 10ml

- 1 tabung lactose broth sebanyak 1ml

- 1 tabung lactose broth sebanyak 0,1ml

Masing – masing tabung tersebut digoyang goyang agar specimen dan media tercampur rata.

c. Inkubasi pada suhu 350c – 370c selama 24 jam – 48 jam.

Pembacaan Hasil :

Setelah 24 jam tabung diperiksa adanya pembentukan gas pada tabung durham.

Catatan semua tabung yang menunjukkan peragian Lactose (membnetuk gas ) pembentukan gas pada

tabung durham pada tes pendahuluan dinyatakan test + (positif), dan dilanjutkn dengan test penegasan .

Apabila test dalam waktu 24 jam tidak membentuk gas test pendahuluan dinyatakan – (negatif) dan

dimasukkan di incubator kembali pada suhu 370c selama 24 jam. Bila terbentuk gas pada tabung durham

hasil menunjukkan + (positif) dan test dilanjutkan dengan test penegasan . Bila test negative berarti

coliform negative..

B. Test Penegasan ( confirmative test )

Media yang diperlukan ; brilliant Green Lactose Bile Broth 2% (BGLB broth 2%). Test ini untuk menegaskan

hasil positif dari test pendahuluan.

Cara pemeriksaan :

a. Pindahkan 1 – 2 ose cairan yang membentuk gas dari test pendahuluan ke 10 ml BGLB 2%

b. Inkubasi pada suhu 370c selama 48 jam.

Pembacaan hasil :

Setelah 48 jam catat tabung durham , test dinyatakan + (positif).

Test penegasan (ke dua ) : + (positif) menandakan test untuk bakteri golongan Coli tinja.

Test penegasan ini merupakan test yang minimal yang harus dilakukan untuk pemeriksaan bakteriologi

makanan / minuman.

Pelaporan :

Hasil yang didapatkan disesuaikan dengan tabel MPN untuk menunjukkan jumlah hasil coliform atau Coli

tinja.

Cara pemeriksaan:

a. Siapkan peralatan kerja dan bersihkan semua tempat kerja dengan

desinfektan.

b. Ambil bahan specimen pengenceran 10 -1 dalam labu erlenmeyer dengan

pipet steril sebanyak 10 ml, masukkan kedalam masing-masing enrichment

media.

c. Inkubasi pada suhu 350c – 370c

- Untuk E.coli dalam Alkaline Pepton di inkubasi pada suhu 370c selama

6-8 jam

- Untuk E.coli dalam BHIB diinkubasi pada suhu 440c selama 20 jam

- Untuk chlostridium dalam Cooked Meat Medium selama 15 menit dan

inkubasi pada suhu 370c selama 24 – 48 jam

- Siapkan media selektif yang akan digunakan.

- Apabila media tersebut sebelumnya disimpan pada lemari es, sebelum

digunakan harus dikeringkan sebentar pada incubator untuk

menghilangkan uap air pada media.

- Dengan menggunakan ose steril, ambil 1 ose specimen dari masing-

masing broth atau dari bahan specimen 10-1

- Goreskan oze pada petridish dengan cara Zigzag

- Inkubasi pada suhu 37o selama 24 jam

- Amati koloni yang tumbuh pada masing-masing media isolasi

- Lakukan pewarnaan gram pada koloni yang dicurigai, jika hasilnya

gram negative batang maka, koloni yang tumbuh dilanjutkan dengan

pemeriksaan biokimia sebagai berikut : Untuk bakteri

Enterobacteriaceae (Bakteri pathogen no.1-4)

- Dari masing-masing koloni tersangka ditanam pada KIAmiring dan

MIU agar, SIM, LYSIN, Simon Citrat.

- Untuk menentukan jenis kuman hasil pembacaan biokimia dicocokkan

dengan table.