Hitungan Cawan & Teknik Sampling

8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling

1/12

LEMBAR KERJA PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI UMUM

TEKNIK ENUMERASI MIKROBA

Teknik Sampling & Hitungan Caan

Nama ! Lingga" Pu"i Galu# A$eng

NIM ! %'%((%(%%%%(%)

Kel*mp*k ! A+

Kela, ! AA,i,ten !

Ju"u,an Tekn*l*gi Ha,il Pe"tanian

-akulta, Tekn*l*gi Pe"tanian

Uni.e",ita, B"ai$a/a

0(%'

1


2/12

PRELAB

Tanggal Praktikum 23 Maret 2015

Praktikum 3.1 TEKNIK SAMPLING

1. Bagaimana cara pengambilan sampel sayuran seperti bayam, sawi yang akan dianalisis total

E.coli !elaskan ta"apannya#

Metode $ %&araswati, 200'( )

• Menyiapkan wada" erlenmeyer yang tela" diaseptis.

• Pisau yang akan digunakan diaseptiskan terlebi" da"ulu, dengan disemprot alko"ol

'0* dan dibakar pada bunsen.

• Menyiapkan sayur bayam, sawi yang tela" ditimbang seberat 5 gram, kemudian

dipotong+potong.

• Memasukkan potongan sayuran kedalam 5 ml pepton.

Metode $$ %Pasalu, 200-( )

• Menyiapkan wada" erlenmeyer yang tela" diaseptis.

• Pisau yang akan digunakan diaseptiskan terlebi" da"ulu, dengan disemprot alko"ol

'0* dan dibakar pada bunsen.

• Memotong sayuran sawi dan bayam dengan ukuran sebesar 5 5 cm.

• Menyiapkan cotton wool swab yang dicelupkan dalam larutan pengencer pepton.

• Permukaan sayuran dioles dengan menggunakan cotton wool swab sebanyak 3 kali.

2. !elaskan peranan teknik sampling dalam pengu/ian mikrobiologi !elaskan#

Peranan teknik sampling dalam pengu/ian mikrobiologi adala" untuk mendapatkan

"asil yang mewakili sampel yang akan digunakan dan untuk memuda"kan dalam

melakukan analisis /umla" mikroba sampel yaitu dengan mendapatkan "asil yang

mewakili populasi sampel yang digunakan. Teknik sampling mempunyai peranan yang

besar dalam menentukan keber"asilan riset untuk meng"asilkan kemampuan prediksi

yang kuat, serta generalisasi "asil riset kedalam populasi %mar, 2005(.

3. !elaskan perbedaan ta"apan pengambilan sampel cair dan padat untuk pengu/ian mikrobiologi

!elaskan ta"apannya #

&ampel air ) sebelum diambil sampel "arus diaduk %di"omogenkan(. emudian sampel diambil

sebanyak 100+500 ml, ditempatkan pada botol steril. alu dibawa ke laboratorium %4ibowo, 200(.

&ampel Padat ) digunakan pisau, sendok atau alat lain untuk mengambil sampel. Pengambilan

dilakukan pada permukaan maupun bagian dalam. emudian diamati beberapa bagian dari tempat

yang berbeda kira+kira 100 gram. alu ditulis tanggal pengambilan, nama sampel, dan lokasi. alu

dibawa ke laboratorium %4ibowo, 200(.

2


3/12

DIAGRAM ALIR

Sampel Padat

Dipotong secara aseptis sebanyak 5 gram

Dihancurkan

Dilarutkan dalam pepton 45 ml

(pengenceran 10-1)

HS!"

Dihitung #umlah koloni yang tumbuh pada media

Diinokulasikan pada ca$an petri dengan metode pour dan spread

% pengenceran terakhir (P&' *)

Diinkubasi pada suhu %+o& selama ,4 #am

%1 Pengambilan sampel padat

01 Pengambilan sampel cair

+1 Pengambilan sampel permukaan

&ampel cair

%susu, sirup, dan es krim(

di"omogenisasikan

6iambil sampel sebanyak 100+500 ml

6itempatkan di botol steril

6ibawa ke laboratorium

78&$

&ur9ace &lice

6icuci dan dibilas

6iusap %swab( dengan menggunakan cotton+wool swab

3


4/12

1 Pengambilan sampel anaerob

'1 Transportasi dan penyimpanan sampel

21 Penanganan sampel di laboratorium

8d"esi:e tape %ditempel dan ditanam ke media(

$mpression plates

Ba"an %daging bagian dalam(

6iusap %swab( dengan menggunakan cotton+wool swab

6icuci dan dibilas

8d"esi:e tape %ditempel dan ditanam ke media(

$mpression plates

&ampel

6ipeli"ara "ingga dilakukan tes laboratorium

Makanan yang bisa dibekukan disimpan dalam 9ree;er menggunakan


5/12

5


6/12

3A-TAR PUSTAKA

Pasalu, 6e:iyanti, &ai9uddin &ira/uddin, l9a" >a/amuddin. 200-. Analisis Total Mikroba

Dan Jenis Mikroba Patogen Pada Jajanan Anak . Makasar ) ni:ersitas 7asanuddin

Makassar.

&araswati, =asti. 200'. Metode Analisa Biologi Tanah. Bogor ) Balai Besar Penelitian 6anPengembangan &umber 6aya Pertanian.

mar, 7usein. 2005. Teknik Sampling . !urnal Mikrobiologi. !akarta ) PT ?ramedia Pustaka

tama.

4ibowo, Marlia &inggi". 200. Prinsip Dan Pelaksanaan Pengambilan Sampel (Sampling).

Bandung ) $TB.

3A-TAR PUSTAKA TAMBAHAN

7armita. 200@. Bk Ajar !a"ati Ed # $. !akarta ) edokteran Agc

$rianto, oes. 200-. Mikrobiologi Jilid % . Bandung ) rama 4idya

Team Penyusun ab Biologi. 200@. Petnjk Praktikm Mikrobiologi Dasar . Cakultas

Matematika 6an $lmu Pengeta"uan 8lam ) ni:ersitas !endral &oedirman

-


7/12

PRELAB

Tanggal Praktikum 23 Maret 2015

Praktikum 3.3 HITUNGAN CA4AN

1. !elaskan prinsip dari metode "itungan cawan #

Prinsip dari metode "itungan cawan adala" /umla" mikroba yang masi" "idupditumbu"kan pada medium agar, mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk

koloni yang dapat dili"at langsung dan di"itung dengan mata tanpa menggunakan

mikroskop. Metode "itungan cawan merupakan cara yang paling sensiti9 untuk

meng"itung /umla" mikroba %8nggraini, 2010(.

2. 8paka" metode "itungan cawan dapat meng"itung /umla" sel Menurut anda mengapa demikian

!elaskan#

Tidak bisa, karena metode "itungan cawan merupakan cara yang paling sensiti9 untuk

menentukan /umla" mikroba, "al ini disebabkan ole" "al+"al berikut %$rianto, 200-( )1. 7anya sel yang masi" "idup sa/a yang dapat di"itung.

2. Bebebrapa /enis mikroba dapat di"itung sekaligus.

3. 6apat digunakan untuk isolasi dan identi9ikasi mikroba, karena koloni yang

terbentuk mungkin berasal dari suatu mikroba yang mempunyai penampakan

pertumbu"an secara spesi9ik.

3. 8paka" yang dimaksud dengan metode pour plate dan spread plate pada "itungan cawan

!elaskan#

Metode pour plate ) sampel yang suda" diencerkan dimasukkan ke dalam cawan petri,kemudian ditamba"kan agar cair steril yang tela" diinginkan %'+50o( sebanyak 15+20

ml dan digoyangkan supaya men/adi "omogen. Metode pour plate ini mempunyai

kekurangan yaitu membutu"kan waktu yang lama dan ba"an yang relati9 banyak tetapi

tidak memutu"kan keterampilan tinggi %Tim Penyusun ab Biologi, 200@(.

Metode spread plate ) dilakukan dengan menyemprotkan 0,1 ml suspensi yang tela"

diencerkan ke atas medium agar kemudian menyebarkannya secara merata dengan

spreader secara aseptis. 6engan ini di"arapkan bakteri terpisa" secara indi:idual,

kemudian dapat tumbu" men/adi koloni tunggal. eunggulan spread plate adala"memisa"kan mikroba yang aerob dengan mikrob yang lainnya dan mikroba yang tumbu"

dapat tersebar secara merata pada bagian permukaan media agar %4aluyo, 200'(.

. !elaskan prinsip pengu/ian biru metilen pada produk susu#

/i reduktase metilen biru pada produk susu digunakan untuk mengukur akti9itas bakteri

yang terdapat didalam susu, dan dapat pula digunakan untuk memperkirakan /umla"

bakteri dalam produk susu. /i reduktase ini didasarkan atas akti:itas mikroba dalam susu

se"ingga meng"asilkan senyawa pereduksi yang dapat menguba" warna biru pada metilen

biru men/adi warna puti" /erni". &emakin lama peruba"an warna dari biru men/adi puti" berarti akti:itas bakteri kecil atau /umla" bakteri sedikit dan susu mempunyai mutu yang

baik. &e"ingga dalam pengu/ian ini dikategorikan men/adi , yaitu )

'


8/12

1. Mutu sangat baik /ika lama reduktase lebi" dari @ /am dengan perkiraan /umla"

bakteri kurang dari 500 ribuDml.

2. Mutu susu baik /ika lama reduktase ter/adi antara - sampai @ /am dengan

perkiraan /umla" bakteri 1 sampai /utaDml.

3. Mutu susu cukup baik /ika lama reduktase ter/adi antara 2 sampai - /am dengan

perkiraan /umla" bakteri sampai 20 /utaDml.

. &usu bermutu renda" /ika lama reduktase kurang dari 2 /am dengan perkiraan

/umla" bakteri lebi" dari 2 /utaDml.

%>iemi, 200(.

Para9 8sisten

>ama)

@


9/12

DIAGRAM ALIR

1. &ampel 6agingD$kan

2. &ampel &ayuran

3. &ampel Telur

a. Perlakuan ba"an

Mikroba pada permukaan dagingDikan

6iswab sebanyak 3 kali

&wab direndam dalam pengencer

&wab diputar+putar dan diperas pada dinding tabung

6ilakukan pengenceran "ingga 10+5

6iinokulasikan pada cawan petri dengan metode pour dan spread

3 pengenceran terak"ir %&&8, >8(

6iinkubasi pada su"u 3'o selama 2 /am

6i"itung /umla" koloni yang tumbu" pada media

78&$

&ayuran

6ipotong secara aseptis seluas 2 2,5 cm

Potongan dicelupkan ke dalam erlenmeyer berisi 25 ml larutan

pengencer

6ikocok sebanyak 25 kali

6ilakukan pengenceran "ingga 10+

6iinokulasikan pada cawan petri dengan metode pour dan spread

3 pengenceran terak"ir %M=&8, >8(

6iinkubasi pada su"u 3'o selama 2 /am

6i"itung koloni yang tumbu" dan di"itung /umla" koloni mikroba per cm2 permukaan

sayur

78&$

Telur


10/12

Dilakukan penumbuhan duplo

Dituangkan media cair ke dalam ca$an dan digoyangkan supaya merata

gar memadat' diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu ,%-%,o& selama ,-% hari

Dihitung #umlah koloni yang tumbuh

Sampel Padat

Dipotong secara aseptis sebanyak 5 gram

Dihancurkan

Dilarutkan dalam pepton 45 ml

(pengenceran 10-1)

HS!"

Dihitung #umlah koloni yang tumbuh pada media

Diinokulasikan pada ca$an petri dengan metode pour dan spread

% pengenceran terakhir (P&' *)

Diinkubasi pada suhu %+o& selama ,4 #am

b. Pengenceran

c. Penumbu"an

. &ampel Padat

6icuci dengan air sabun sampai bersi", ditiriskan, dicelupkan ke dalam

alko"ol '0* selama 10 menit, ditiriskan lagi

6iletakkan diatas pinggan alumunium, dipi/arkan bagian u/ung yang runcing

6ilubangi bagian u/ung yang runcing, dilakukan diatas api sebentar, dan

dituangkan seluru" isinya ke dalam gelas piala steril

Telur

6ipeca"kan, dikocok dengan sendok atau spatula steril

Pipet 10 ml atau ditimbang 10 gram ke dalam 0 ml larutan pengencer berisi butiran

gelas, se"ingga diperole" pengenceran 10+1

6ikocok sebanyak 25 kali

6ibuat pengenceran 10+2

Telur

78&$

10


11/12

5. &ampel air %&usu, 8ir Mineral(

&ampel cair%susu, sirup, dan es krim(

6iencerkan "ingga 10+1

6imasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi ml akuadest yang tela"

disterilisasikan

6ikocok dengan :orte

6ibuat pengenceran 10+2, 10+3 dan dilakukan duplo

6iambil masing+masing 1 ml dan ditanam dalam cawan petri dengan media

P8 yang tela" disterilisasi

6iinkubasi pada su"u 30+32o selama 2+3 "ari

6i"itung koloni yang tumbu"

78&$

11


12/12

3A-TAR PUSTAKA

8nggraini, &ri. 2010. Poplasi dan Sampel . !urnal imia. !akarta ) Cakultas ese"atan

Masyarakat ni:ersitas $ndonesia. Eol ) 1.

$rianto, oes. 200-. Mikrobiologi Jilid % . Bandung ) rama 4idya.

>iemi, =.M dan &.$ >iemala. 200. Measrment &ncertaint" Microbiological 'ltiatin

Methods. Berlin ) ni:ersity Berlin.Tim Penyusun ab Biologi. 200@. Petnjk Praktikm Mikrobiologi Dasar . Purwokerto )

ni:ersitas !endral &oedirman.

4aluyo, . 200'. Mikrobiologi &mm. Malang ) MM Pers.

3A-TAR PUSTAKA TAMBAHAN

ay, Bibiana 4, 7astowo, &ugyo. 200-. Mikrobiologi Edisi % . !akarta ) =a/awali Press

Madigan, M. T, and Martinko, !. M. 200-. Biolog" o Microorganisms. >ew !ersey )

Prentice+7all,

Manurung, &oraya. 2011. Metode Perhitngan Mikrobiologi. ogyakarta ) ni:ersitas ?a/a"

Mada

Muk"lis. 200@. Mikrobiologi Pangan % . !akarta ) ?ramedia Pustaka tama.

Purwoko, T. 200'. *isiologi Mikroba. !akarta ) Penerbit PT Bumi 8ksara

Hitungan Cawan & Teknik Sampling

Documents

Transcript of Hitungan Cawan & Teknik Sampling