laporan menghitung BAKTERI.doc
-
Upload
hernawan-tri-wahyudi -
Category
Documents
-
view
254 -
download
0
Transcript of laporan menghitung BAKTERI.doc
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
1/14
BAB VII
MENGHITUNG DAN MENGUKUR MIKROBA
Untuk mengidentifikasi mikroba secara kuantitatif di antaranya dengan mengitung
jumlah mikroba dan menentukan ukurannya. Ada 2 cara perhitungan jumlah mikroba,
yaitu perhitungan secara langsung (direct method) dan secara tidak langsung (indiriect
method). Sedangkan cara mengkur mikroba menggunakan mikrometer.
Menentukan Ukuran Mikroorganisme
Mikroba berukuran sangat kecil dan untuk mengetahuinya digunakan mikrometer.
Mikrometer merupakan kaca berskala dan dikenal 2 jenis micrometer yaitu mikrometer
okuler dan mikrometer objektif. Mikrometer okuler dipasang pada lensa okuler
mikroskop, sedangkan micrometer objektif berbentuk slide yang ditempatkan pada meja
preparat mikroskop. arak antar garis skala pada mikrometer okuler tergantung pada
perbesaran lensa objektif yang digunakan yang menentukan lapang pandang mikroskop.
arak ini dapat ditentukan dengan mengkalibrasi antara mikrometer okuler dan objektif.
Mikrometer objektif memiliki skala yang telah diketahui, menjadi tolak ukur untuk
menentukan ukuran skala micrometer okuler. ! skala micrometer objektif " #,#! mm $ !#
%m.
&alibrasi dilakukan dengan menghimpitkan skala mikrometer objektif dan okuler pada
perbesaran yang diinginkan. Skala ke nol (garis pertama) kedua mikrometer disimpulkan
menjadi ! garis kemudian dilihat pada skala ke berapa kedua jenis mikrometer tersebut
bertemu$berhimpit kembali. 'ari hasil tersebut dapat diketahui satu satuan panjang pada
skala mikrometer okuler itu berdasarkan beberapa jumlah skala kecil mikrometer objektif
yang berada di antara garis yang berhimpit tadi.
! Skala kuler " jarak yang diketahui antara 2 garis pada mikro obyektif
(OD = Okuler division) jarak skala pada micrometer okuler
" #,#! skala obyektif (mm)Skala kuler
" !# skala obyektif (m)Skala kuler
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
2/14
Misal * jika skala ke+# mikrometer okuler berhimpit dengan skala ke+# mikrometer
objektif lalu skala ke+! mikrometer okuler berhimpit dengan skala ke+2 mikrometer
objektif maka ! skala okuler ".#,#! 2$! " #,#2$! " #,##!- mm " !,- m
Cara Kerja
&alibrasi *
a. /etakkan mikrometer objektif pada meja benda dan pasang mikrometer okuler pada
tabung lensa okuler.
b. 0entukan perbesaran yang digunakan, (misalnya # !#) kemudian cari gambar
perbesaran dari skala mikrometer objektif.
c. Setelah fokus didapat, kemudian selanjutnya himpitkan skala ke nol mikrometer
objektif dan okuler.
d. 1ari dengan teliti skala ke berapa antara mikrometer objektif dan okuler yang
berhimpit lagi.
e. itung besarnya skala okuler dengan rumus di atas.
3ambar* 1ara kalibrasi cara mengukur mikroba
4enentuan ukuran mikroba
a. /epaskan mikrometer objektif dari meja benda.
b. 3anti dengan preparat ulas yang telah disiapkan
c. 1ari fokus dari preparat tersebut dengan perbesaran yang sama.
d. itung berapa panjang sel dengan menghitung skala mikrometer okuler.
e. ika diperlukan hitung lebar sel dengan cara yang sama. 0abung lensa okuler dapat
diputar dan dicari posisi yang pas.
f. itung panjang dan lebar sel sebenarnya *
http://lh4.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlCLcZpuI/AAAAAAAAAWE/3WrJxWoiJSk/image15.pnghttp://lh6.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKk-vhZoHI/AAAAAAAAAV8/aKI_ctQjGmU/image11.png -
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
3/14
itung panjang dan lebar sel sebenarnya *
5 skala okuler hasil kalibrasi
y skala okuler hasil kalibrasi
misal * - !,- " 6,6 %m
2 !,- " ,#7 %m
8Menentukan !umla" Mikroorganisme
Penghitungan Jumlah Bakteri Tidak Langsung
!. 4late 1ount (hitungan ca9an)
1ara ini yang paling umum digunakan untuk perhitungan mikroba.
'asarnya ialah membuat suatu sen pengeceran !# : dari masing+masing
pengeceran diambil ! cc dan dibuat taburan dalam 4etridish (pour plate) dengan
medium agar yang macam+macam dan caranya tergantung pada macamnya
mikroba. Selelah diinokulasikan dihitung jumlah koloni tiap petridish dari masing+
masing pengenceran. 'ari jumlah koloni tiap petridish dapat ditentukan jumlah
bakteri tiap cc atau gram bahan, yaitu dengan mengalikan jumlah koloni dengan
kebalikan pengecerannya misalnya untuk pengeceran* !#+ terdapat - koloni
bakteri maka tiap cc atau gram bahan mengandung -#,### bakteri. Untuk
membantu menghitung jumlah koloni dalam petridish biasanya dilengkapi dengan
electronic register.
Syarat koloni yang ditentukan untuk dihitung adalah sebagai berikut*a. Satu koloni dihitung ! koloni.
b. 'ua koloni yang bertumpuk dihitung ! koloni.
http://lh5.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlJF-qTEI/AAAAAAAAAWU/fhuA_8JYHd0/clip_image0087.jpghttp://lh3.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlGYHzk-I/AAAAAAAAAWM/eHcm67rUF-g/clip_image0068.jpghttp://lh5.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlLuwQK1I/AAAAAAAAAWc/SiLAi_WiBHA/clip_image0127.jpg -
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
4/14
c. ;eberapa koloni yang berhubungan dihitung ! koloni.
d. 'ua koloni yang berhimpitan dan masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni.
e. &oloni yang terlalu besar (lebih besar dari setengah luas ca9an) , yang dikenal
sebagai spreader, tidah dihitung.
f. &oloni yang besarnya kurang dari setengah luas ca9an dihitung ! koloni.
4ada perhitungan dengan cara ini diperlukan beberapa syarat yang harus
dipenuhi sebagai berikut:!) umlah koloni tiap petridish antara #+## koloni, jika dipilih yang jumlahnya
mendekati ##.
2) umlah bakteri dari hasil pengeceran yang berturut+turut antara pengeceran
yang lebih besar dengan pengeceran sebelumnya, jika sama atau lebih kecil dari
2 hasilnya dirata+rata : tetapi jika lebih besar dari 2 yang dipakai jumlah
mikroba dari hasil pengeceran sebelumnya.) ika dengan ulangan selelah memenuhi syarat hasilnya dirata+rata.
) 1ontoh perhitungan dapat dilihat pada label sebagai berikut*
Suspensi 4engenceran umlah kaloni
ariasi, tergantung kebutuhan. 4enghitungan
akan lebih mudah bila memakai colony counter.
2.Most Probable Number(M4?)
Most 4rotable ?umber (M4?) didasarkan pada metode statistik (teori kemungkinan).
Metode M4? ini umumnya digunakan untuk menghitung jumlah bakteri pada air
khususnya untuk mendeteksi adanya bakteri koliform yang merupakan kontaminan utama
sumber air minum. 1iri+ciri utamanya yaitu bakteri gram negatif, batang pendek, tidak
membentuk spora, memfermentasi laktosa menjadi asam dan gas yang dideteksi dalam
9aktu 2 jam inkubasi pada 6@ 1. Sampel ditumbuhkan pada seri tabung sebanyak
atau - buah tabung untuk setiap kelompok. Apabila dipakai tabung maka disebut seri ,
dan jika dipakai - tabung maka disebut - seri. Media pada tabung adalahLactose Broth
yang diberi indikator perubahan p dan ditambah tabung durham. 4emberian sampel
pada tiap seri tabung berbeda+beda. Untuk sampel sebanyak !# ml ditumbuhkan pada
media /;'S (Lactose Broth Double Stregth) yang memiliki komposisi Beef extract (
gr), etone (- gr), lactose (!# gr) dan Bromthymol Blue (#,2 ) per liternya. Untuk
sampel ! ml dan #,! ml dimasukkan pada media /;SS (Lactose Broth Single Stregth)
yang berkomposisi sama tapi hanya kadar laktosa setengah dari /;'S yaitu - gr.
;erdasar sifat coliform, maka bakteri ini dapat memfermentasikan laktosa menjadi asam
dan gas yang dideteksi oleh berubahnya 9arna dan gas dalam tabung durham. ?ilai M4?
ditentukan dengan kombinasi jumlah tabung positif (asam dan gas) tiap serinya setelah
diinkubasi.
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
6/14
1ara kerja *
a. Sediakan tabung berisi /;'S (B ml tiap tabung) dan = tabung berisi /;SS (B ml tiap
tabung) lengkap dengan tabung durham. Atur kesembilan tabung menjadi seri (seperti
di gambar).
b. &ocok botol yang berisi air sampel.
c. 4indahkan suspensi air sample sebanyak !# ml ke masing+masing tabung seri pertama
( tabung /;'S), secara aseptis.
d. 4indahkan suspensi air sampel sebanyak ! ml ke masing+masing tabung seri kedua (
tabung /;SS), secara aseptis.
e. 4indahkan suspensi air sampel sebanyak ! ml ke masing+masing tabung seri ketiga (
tabung /;SS), secara aseptis.
f.
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
7/14
Misal *
didapatkan kombinasi jumlah tabung positif * 2! maka jumlah bakteri coliformadalah
!-# sel$!## ml.
Penghitungan Jumlah Bakteri Secara Langsung
http://lh5.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlU-RjlOI/AAAAAAAAAW0/1WBH5GE3QiE/clip_image0045.jpg -
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
8/14
!. Menggunakan couting chamber
4enghitungan secara langsung dapat dilakukan secara mikroskopis yaitu dengan
menghitung jumlah bakteri dalam satuan isi yang sangat kecil. Alat yang digunakan
adalah Petroff!"auser #hamber atau "aemocytometer. umlah cairan yang terdapatantara coverglass dan alat ini mempunyai >olume tertentu sehingga satuan isi yang
terdapat dalam satu bujur sangkar juga tertentu.
Cuang hitung terdiri dari B kotak besar dengan luas ! mmD. Satu kotak besar di tengah,
dibagi menjadi 2- kotak sedang dengan panjang #,2 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi
menjadi != kotak kecil. 'engan demikian satu kotak besar tersebut berisi ## kotak kecil.
0ebal dari ruang hitung ini adalah #,! mm. Sel nakteri yang tersuspensi akan memenuhi
>olume ruang hitung tersebut sehingga jumlah bakteri per satuan >olume dapat diketahui.
http://lh3.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlgb8XyhI/AAAAAAAAAXM/nP9_tin7fn4/clip_image01042.jpghttp://lh6.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKldOkzg3I/AAAAAAAAAXE/J7jOPS072aI/clip_image00842.jpg -
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
9/14
/uas kotak sedang *
" p 5 l
" #,2 5 #,2 " #,# mm2 jadi misalnya diperoleh*
Eolume kotak sedang * 2# sel dalam satu kotak sedang
" #,# mm2 5 #,! mm maka jumlah sel keseluruhan *" #,## mm " 2# 5 (!$) 5 !#=
&arena ! ml " !cm2 " - 5 !#= sel$ml
Maka *
" #,## mm
" #,##### cm
" 5!#+= ml
Sel$ml *
" jumlah sel$5!#+= ml
" (jumlah sel$) 5 !#=
" jumlah sel 5 (F) 5 !#=
" jumlah sel 5 2,- 5 !#-
http://lh5.ggpht.com/_kFz4vOoppxQ/SSKlkEqaXFI/AAAAAAAAAXU/uWco8r4984Q/clip_image01254.jpg -
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
10/14
&otak sedang *
umlah sel$ml " jumlah sel 5 2,- 5 !#-
'engan perhitungan yang sama maka diperoleh rumus untuk
kotak kecil *
umlah sel$ml " jumlah sel 5 5 !#=
a. 1ara kerja (digunakan kotak sedang) *
b. ;ersihkan 4etroff+auser 1ounting 1hamber atau aemocytometer dengan alkohol 6#
lalu
c. keringkan dengan tissue.
d. /etakkan co>er glass di atas alat hitung.
e. 0ambahkan G -# %l suspensi sel yeast (kira+kira ! tetes) dengan cara meneteskan pada
parit kaca pada alat hitung. Suspensi sel akan menyebar karena daya kapilaritas.
f. ;iarkan sejenak sehingga sel diam di tempat (tidak terkena aliran air dari efek
kapilaritas).
g. /etakkan alat hitung pada meja benda kemudian cari fokusnya pada perbesaran #5!#.
h. /akukan perhitungan secara kasar apakah diperlukan pengenceran atau tidak. ika
dalam satu kotak sedang terdapat sel+sel yang banyak dan bertumpuk maka perhitungan
akan tidak akurat dan diperlukan pengenceran dengan perbandingan !*- atau !*!#.
i. itung sampel, paling tidak sebanyak - kotak sedang (lebih banyak lebih baik). asil
perhitungan dirata+rata kemudian hasil rataan dimasukkan rumus untuk kotak sedang.
ika dilakukan pengenceran maka jumlah sel$ml dikalikan faktor pengenceran.
2. Menggunakan cara pengecatan dan pengamatan mikroskopik
Selelah preparat dicat, dihitung jumlah rata+rata sel mikroba tiap bidang pemandangan
mikroskop. /uas bidang pemandangan mikroskop dihitung dengan mengukur garis
tengahnya. adi jumlah mikroba yang terdapat pada gelas benda seluruhnya dapat
dihitung. 'engan perhitungan dapat diperoleh jumlah mikroba tiap cc bahan $ cairan yang
diperiksa.
1ara yang hampir sama yang biasanya dipakai untuk menghitung jumlah bakteri ialah
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
11/14
dengan mencampurkan ! cc biakan bakteri dengan ! cc darah manusia: selelah campur
homogen dibuat preparat mikroskopik. 'an bandingan umlah rata+rata sel bakteri dan
umlah sel darah merah dalam tiap bidang pemandangan, jumlah rata+rata sel bakteri dan
jumlah sel darah merah dalam tiap bidang pemandangan, jumlah bakteri tiap cc dapat
dihitung, sebab darah manusia yang normal rata+rata mengandung - juta sel darah merah
tiap cc.
3. Menggunakan filter membran (miliopore filter)
Mula+mula disaring sejumlah >olume tertentu suatu suspensi bahan atau biakan mikroba
kemudian disaring dengan filter membran yang telah disterilkan teriebih dahulu. 'engan
menghitung jumlah sel rata+rata tiap kesatuan luas pada filter membran dapat dihitung
jumlah sel dari >olume suspensi yang disaring. &alau perhitungan secara biasa sukar,
perlu dilakukan pengecatan pada filter membran, kemudian filter membran dipenuhi
dengan minyak imersi supaya dapat menjadi transparan.
Dalam praktikum ini kita gunakan cara plate count (hitungan cawan)
!. 4late 1ount (hitungan ca9an)
1ara ini yang paling umum digunakan untuk perhitungan mikroba.
'asarnya ialah membuat suatu sen pengeceran !# : dari masing+masing
pengeceran diambil ! cc dan dibuat taburan dalam 4etridish (pour plate) dengan
medium agar yang macam+macam dan caranya tergantung pada macamnya
mikroba. Selelah diinokulasikan dihitung jumlah koloni tiap petridish dari masing+
masing pengenceran. 'ari jumlah koloni tiap petridish dapat ditentukan jumlah
bakteri tiap cc atau gram bahan, yaitu dengan mengalikan jumlah koloni dengan
kebalikan pengecerannya misalnya untuk pengeceran* !#+ terdapat -6 koloni
bakteri maka tiap cc atau gram bahan mengandung -6#,### bakteri. Untuk
membantu menghitung jumlah koloni dalam petridish biasanya dilengkapi dengan
electronic register.
Syarat koloni yang ditentukan untuk dihitung adalah sebagai berikut*
g. Satu koloni dihitung ! koloni.h. 'ua koloni yang bertumpuk dihitung ! koloni.
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
12/14
i. ;eberapa koloni yang berhubungan dihitung ! koloni.
j. 'ua koloni yang berhimpitan dan masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni.
k. &oloni yang terlalu besar (lebih besar dari setengah luas ca9an) , yang dikenal
sebagai spreader, tidah dihitung.
l. &oloni yang besarnya kurang dari setengah luas ca9an dihitung ! koloni.
4ada perhitungan dengan cara ini diperlukan beberapa syarat yang harus
dipenuhi sebagai berikut:-) umlah koloni tiap petridish antara #+## koloni, jika dipilih yang jumlahnya
mendekati ##.
=) umlah bakteri dari hasil pengeceran yang berturut+turut antara pengeceran
yang lebih besar dengan pengeceran sebelumnya, jika sama atau lebih kecil dari
2 hasilnya dirata+rata : tetapi jika lebih besar dari 2 yang dipakai jumlah
mikroba dari hasil pengeceran sebelumnya.6) ika dengan ulangan selelah memenuhi syarat hasilnya dirata+rata.
7) 1ontoh perhitungan dapat dilihat pada label sebagai berikut*
Suspensi 4engenceran umlah kaloni
ariasi, tergantung kebutuhan. 4enghitungan
akan lebih mudah bila memakai colony counter.
#a$oran %ementara#ati"an V &engamatan Mikroorganisme
?ama 4raktikan* HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHH
?
-
7/25/2019 laporan menghitung BAKTERI.doc
14/14
Most Probable Number(M4?)
Sukoharjo,..........................................
Mengetahui 4raktikan,4engampu 4raktikum
IIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIIIIIIIIIIII
&ombinasi umlah tabung yang positif*
asil 4enghitungan secara langsung