Laporan Praktikum Mikrobiologi Modul v (1)

5/28/2018 Laporan Praktikum Mikrobiologi Modul v (1)

1/34

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI LAUT

MODUL IV

UJI SENSITIVITAS DAN PENGHITUNGAN JUMLAH MIKROBA

Disusun Oleh :

Dias Natasasmita

26020110130093

Asisten:

Didha Andini P

K2D 007 027

PROGRAM STUDI ILMU KELAUTAN

JURUSAN ILMU KELAUTAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS DIPONEGORO

SEMARANG

2011

BAB I


2/34

PENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangLaut dapat dijadikan sumber dalam bidang farmasi, bahan makanan,

kosmetik, dan enzim yang merupakan kekayaan sumber keanekaragaman biologi.

Banyak produk alam yang diisolasi dari lingkungan laut. Akan tetapi, meskipun

mikroorganisme laut sudah terkenal sebagai sumber dari molekul bioaktif yang

baru, pemanfaatannya masih sedikit. Banyak organisme dalam kehidupan laut

termasuk bakteri hidup pada daerah sedimen dan memproduksi antibakteri yang

diperoleh dari isolasi bakteri (Park et al, 2002).

Antibiotik merupakan zat kimia yang dihasilkan mikroorganisme yang dalam

jumlah amat kecil atau rendah bersifat merusak atau menghambat

mikroorganisme lain (Pelczar, 1988). Antibiotik mempunyai nilai ekonomi yang

tinggi terutama di bidang kesehatan, karena kegunaanya dalam mengobati

berbagai penyakit infeksi. Adanya penemuan antibiotik-antibiotik baru sangat

dibutuhkan dalam bidang kedokteran karena banyak kuman yang telah resisten

terhadap antibiotik-antibiotik yang sudah ada (Waaij, 1991). Untuk itu perlu

dilakukan penelitian eksplorasi untuk mendapatkan isolasi bakteri yang dapat

menghasilkan antibiotik. Antibiotik banyak dihasilkan oleh alga, lichen,

tumbuhan tingkat tinggi, hewan tingkat rendah, vertebrata dan mikroorganisme.

Kerentanan terhadap suatu zat antibiotik pada bakteri ditentukan oleh

bakteri itu sendiri. Untuk mengetahui hal itu dilakukan uji sensitivitas. Uji

sensitivitas merupakan cara untuk mengetahui dan mendapatkan produk alam

yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai kemampuan untuk

menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada konsentrasi yang rendah.Metode dalam uji sensitivitas dibedakan menjadi dua, yaitu metode difusi dan

metode dilusi. Metode yang paling sering digunakan adalah metode difusi dengan

cara Kirby-Bauer. Prinsip dari metode ini adalah penghambatan terhadap

pertumbuhan mikroorganisme, yaitu zona hambatan akan terlihat sebagai daerah

jernih di sekitar cakram kertas yang mengandung zat antibakteri. Diameter zona

hambatan pertumbuhan bakteri menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap zat


3/34

antibakteri. Selanjutnya dikatakan bahwa semakin lebar diameter zona hambatan

yang terbentuk bakteri tersebut semakin sensitif (Koeswartono, 1982).

Kekayaan hayati laut Indonesia dikenal sangat beragam, salah satu

diantaranya adalah invertebrata laut. Invertebrata laut dalam sistem rantai

makanan merupakan herbivora, predator dominan dan biota penentu dari sistem

piramida makanan (Murniasih, 2005). Berbagai jenis invertebrata laut yang

banyak dijumpai di daerah pesisir antara lain sponge, ubur- ubur, Nudibranchia

dan masih banyak lagi. Nudibranchia adalah Moluska tidak bercangkang yang

seringkali berwarna terang dan mencolok (Karuso dan Scheuer, 2002).

Keberadaan Nudibranchia sebagai salah satu kekayaan hayati Indonesia dan

memiliki peran dalam rantai makanan, telah menempatkan Nudibranchia sebagai

spesies yang harus dijaga kelestariannya. Salah satu upaya yang dapat dilakukan

untuk menjaga kelestarian Nudibranchia yaitu dengan membuat database

keanekaragamannya. Nudibranchia memiliki potensi sebagai antivirus dan

antikanker. Hal ini telah menarik para peneliti untuk mengeksplorasinya

(Murniasih, 2005). Saat ini di Indonesia, belum ada data pasti mengenai

keanekaragaman Nudibranchia dan penelitian mengenai Nudibranchia belum

banyak dilakukan. Maka penelitian mengenai Nudibranchia perlu lebih

banyak lagi dilakukan, supaya pengetahuan mengenai invertebrata laut ini

menjadi lebih baik (Ampou, 2006).

Keanekaragaman Nudibranchia dapat diketahui dengan melihat faktor-faktor

yang mempengaruhi keberadaannya di lautan, antara lain perbedaan habitat,

seperti tutupan karang, ketersediaan dan jenis makanan. Ketiga hal ini berkaitan

karena diketahui bahwa banyak Nudibranchia makan dan hidup dalam asosiasi

yang dekat dengan spesies karang (Godfrey, 2001). Nudibranchia pada umumnyamemakan algae, sponge, karang keras dan lunak, bryozoans dan hydroids (Allen

dan Steene, 1999).

Ada beberapa penyakit di dunia yang sudah resisten terhadap dua golongan

atau lebih antibiotik. Penyakit yang sudah resisten terhadap beberapa golongan

antibiotik ini disebabkan oleh bakteri Multi Drug Resistant (MDR). Sejalan

dengan waktu penyakit yang disebabkan oleh bakteri MDR ini berkembang cepat

di NegaraNegara berkembang. Namun, ironisnya penyakit ini merupakan yang


4/34

terlupakan oleh Negara Negara maju. Hal ini sangat penting dan perlu disoroti

lebih lanjut untuk dilakukan penanganan masalah tersebut. Penanganan bakteri

patogen di dalam bidang kesehatan serta pemanfaatan senyawa antibiotik yang

ramah lingkungan yang dihasilkan oleh bakteri yang bersimbiosis dengan

invertebrata laut telah menjadi pekerjaan rumah yang harus segera ditangani

secara multidisiplin dan serius (Hunt and Vincet, 2006).

Berdasarkan data tersebut maka sangat penting untuk segera mencari dan

menemukan antimikroba baru yang ramah lingkungan untuk malawan bakteri-

bakteri MDR. Menurut Burgess et al. (2003), bakteri yang bersimbiosis dengan

karang lunak dapat mensintesis senyawa metabolit sekunder yang sama seperti

inangnya. Hal ini memungkinkan bakteri simbion karang lunak dapat

menghasilkan senyawa antibakteri yang mampu melawan bakteri MDR.

Karang lunak telah diketahui sebagai sumber yang kaya akan produk senyawa

bioaktif yang mempunyai potensi bioteknologi dan juga mempunyai potensi

antiviral, antitumor, antimikroba dan lain-lain (Thiel and Imhoff, 2003; Radjasa,

2004; Radjasa et al., 2007). Namun, belum ada penelitian antibakteri dari karang

lunak jenis Lobophyton sp., sehingga kandungan senyawa bioaktifnya masih

belum diketahui. Selama ini penelitian mengenai antibakteri dari karang lunak

adalah dari jenis Sarcopyton sp., Sinularia sp., dan Xenia sp. (Radjasa et al.,

2007).

Menurut Kelecom (2001) bahwa mikroorganisme simbiotik biasanya

menghasilkan metabolit sekunder yang mirip dengan yang dihasilkan oleh

inangnya. Diperkirakan kurang dari 2% mikrobia baru berhasil diisolasi dari

lingkungan laut sebagai kultur murni. Dilaporkan bahwa terdapat asosiasi

mikroorganisme dengan organisme laut yang juga mensistesa metabolit sekunderseperti organisme inangnya (Burgess et al., 2003).

Bakteri relatif lebih mudah dikembangbiakkan, tidak memakan banyak

tempat dan pertumbuhannya cepat. Sehingga diharapkan bakteri yang

bersimbiosis dengan karang lunak dapat memberikan kontribusi sebagai sumber

alternatif baru senyawa bioaktif dari laut (Effendi, 2002).


5/34

1.2 Tujuan Praktikan memahami bermacam-macam teknik uji sensitivitas. Praktikan mempunyai ketrampilan melakukan uji sensitivitas. Praktikan dapat melakukan pengamatan mengenai morfologi bakteri.

1.3 ManfaatSetelah melaksanakan praktikum modul ini, maka praktikan dapat melakukan

tujuan praktikum dengan baik. Sehingga praktikan telah memperoleh bekal untuk

penelitian mereka tentang mikroorganisme. Praktikan dapat mengetahui tingkat

resistensi suatu bakteri terhadap antibiotik. Dengan mengetahui tingkat resistensi

suatu bakteri terhadap antibiotik, hal ini dapat bermanfaat dalam bidang kesehatan

atau kedokteran.


6/34

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uji SensitivitasSensitivitas menyatakan bahwa uji sentivitas bakteri merupakan suatu

metode untuk menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan

untuk mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Metode Uji

sensitivitas bakteri adalah metode cara bagaimana mengetahui dan mendapatkan

produk alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai

kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada

konsentrasi yang rendah. Uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk

menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan untuk

mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Seorang ilmuan

dari perancis menyatakan bahwa metode difusi agar dari prosedur Kirby-Bauer,

sering digunakan untuk mengetahui sensitivitas bakteri. Prinsip dari metode ini

adalah penghambatan terhadap pertumbuhan mikroorganisme, yaitu zona

hambatan akan terlihat sebagai daerah jernih di sekitar cakram kertas yang

mengandung zat antibakteri. Diameter zona hambatan pertumbuhan bakteri

menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap zat antibakteri. Selanjutnya dikatakan

bahwa semakin lebar diameter zona hambatan yang terbentuk bakteri tersebut

semakin sensitif (Koeswartono, 1982).

Pada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas bakteri

adalah metode Difusi Agar yaitu dengan cara mengamati daya hambat

pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitarkertas cakram (paper disk) yang tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme. Zona

hambatan pertumbuhan inilah yang menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap

bahan anti bakteri (Dwidjoseputro, 1998)

Tujuan dari proses uji sensitivitas ini ialah :

1. Untuk mengetahui obat-obat yang paling cocok (paling poten) untukkuman penyebab penyakit terutama pada kasus-kasus penyakit yang

kronis.


7/34

2. Mengetahui adanya resistensi terhadap berbagai macam antibiotik.Penyebab kuman resisten terhadap antibiotik :

1. Memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang diberikan.2. Akibat pemberian dosis dibawah dosis pengobatan.3. Akibat penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh

oleh antibiotik.

Ada dua macam metode untuk uji sensitivitas yaitu metode dilusi dan

metode difusi.

a) DilusiPada prinsipnya antibiotik diencerkan hingga diperoleh beberapa

konsentrasi. Metode yang dipakai ada dua macam, yaitu metode dilusi

kaldu disebut juga dengan dilusi cair dan metode dilusi agar atau

dilusi padat. Pada dilusi cair, masing-masing konsentrasi obat

ditambah suspensi kuman atau bakteri dalam media. Sedangkan dalam

dilusi padat, tiap konsentrasi obat dicampur dengan media agar, lalu

ditanami bakteri. Pertumbuhan bakteri ditandai oleh adanya kekeruhan

setelah 16-20 jam diinkubasi. Konsentrasi terendah yang menghambat

pertumbuhan bakteri ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan, dan

disebut dengan Konsentrasi Hambat Minimal (KHM). Masing-masing

konsentrasi antibiotik yang menunjukkan hambatan pertumbuhan

ditanam pada agar padat media pertumbuhan bakteri dan diinkubasi.

Konsentrasi terendah dari antibiotik yang membunuh 99,9% inokulum

bakteri disebut Konsentrasi Bakterisid Minimal (Brander et al., 1991).

b) DifusiMedia difusi menggunakan kertas disk yang berisi antibiotik dan telahdiketahui konsentrasinya. Pada metode difusi, media yang dipakai

adalah agar Mueller Hinton. Ada beberapa cara pada metode difusi

ini, yaitu :

Cara Kirby-BauerCara Kirby-Bauer merupakan suatu metode uji sensitivitas bakteri

yang dilakukan dengan membuat suspensi bakteri pada media

Brain Heart Infusion (BHI) cair dari koloni pertumbuhan kuman


8/34

24 jam, selanjutnya disuspensikan dalam 0,5 ml BHI cair

(diinkubasi 4-8 jam pada suhu 37C). Hasil inkubasi bakteri

diencerkan sampai sesuai dengan standar konsentrasi kuman 108

CFU/ml (CFU : Coloni Forming Unit). Suspensi bakteri diuji

sensitivitas dengan meratakan suspensi bakteri tersebut pada

permukaan media agar. Disk antibiotik diletakkan di atas media

tersebut dan kemudian diinkubasi pada suhu 37C selama 19-24

jam. Dibaca hasilnya :

1. Zona radicalSuatu daerah disekitar disk dimana sama sekali tidak ditemukan

adanya pertumbuhan bakteri. Potensi antibiotik diukur dengan

mengukur diameter dari zona radical (Jawetz et al., 2001).

2. Zona iradicalSuatu daerah disekitar disk yang menunjukkan pertumbuhan

bakteri dihambat oleh antibiotik tersebut, tapi tidak dimatikan.

Disini akan terlihat adanya pertumbuhan yang kurang subur atau

lebih jarang dibanding dengan daerah diluar pengaruh antibiotik

tersebut (Jawetz et al., 2001).

Cara sumuranSuspensi bakteri 108CFU/ml diratakan pada media agar,

kemudian agar tersebut dibuat sumuran dengan garis tengah

tertentu menurut kebutuhan. Larutan antibiotik yang digunakan

diteteskan kedalam sumuran. Diinkubasi pada suhu 37C selama

18-24 jam. Dibaca hasilnya, seperti pada cara Kirby-Bauer

(Jawetz et al., 2001).

Cara Pour PlateSetelah dibuat suspensi kuman dengan larutan BHI sampai

konsentrasi standar (108CFU/ml), lalu diambil satu mata ose dan

dimasukkan kedalam 4ml agar base 1,5% dengan temperatur

50C. Suspensi kuman tersebut dibuat homogen dan dituang pada

media agar Mueller Hinton. Setelah beku, kemudian dipasang

disk antibiotik (diinkubasi 15-20 jam pada suhu 37C) dibaca dan


9/34

disesuaikan dengan standar masing-masing antibiotik (Jawetz et

al., 2001).

Faktor-faktor yang mempengaruhi ukuran diameter zone hambatan :

1. Kekeruhan suspensi bakteri. Kurang keruh : diameter zone lebih lebar. Lebih keruh : Diameter zone makin sempit sehingga R dilaporkan

S atau sebaliknya.

2. Waktu pengeringan / peresapan suspensi bakteri ke dalam MH agar.idak boleh melebihi batas waktu karena dapat mempersempit diameter

zone hambatan sehingga jadi R.

3. Temperatur inkubasiPertumbuhan optimal : 35 C bila 35O C ada bakteri yang kurang

subur pertumbuhannya dan ada obat yang difusinya kurang baik.

4. Waktu inkubasi. Waktu : 1618 jam Bila Lebih 18 jam maka pertumbuhan lebih sempurna sehingga

zone hambat makin sempit.

5. Ketebalan agarKetebalan : 4 mm, bila kurang maka difusi obat lebih cepat dan bila

lebih maka difusi obat lambat.

6. Jarak antar disk obat Jarak cakram : 3 cm dan 2 cm dari pinggir petridish dengan meter

9-10m paling banyak 7 disk obat.

Petridish dengan diameter 15 cm untuk 9 disk.7. Potensi disk obat

Tiap jenis obat mempunyai diameter disk yang sama tetapi potensinya

berbeda. Yang harus diperhatikan :

Cara penyimpanan : obat yang labil seperti penisillin dll disimpanpada suhu 4O C.

ED nya dan setiap disk obat baru diterima harus dicek dengankontrol strain.


10/34

8. Komposisi mediaSangat besar pengaruhnya terhadap pertumbuhan bakteri, difusi obat,

kativitas obat tersebut. Quality Control :

Upaya-upaya yang dilakukan untuk menetralisir faktor-faktoryang berpengaruh terhadap diameter zone hambatan.

Mengecek mutu media, disk obat dengan menggunakan bakteristandard : Staphylococcus aureus ATCC 25923, E. Coli ATCC

25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

2.2 Sejarah dan Perkembangan AntibiotikFenomena antagonisme di antara organism hidup sudah muncul sejak 1877,

pada saat Pasteur dan Joubert melaporkan bahwa suatu bakteri aerob mempunyai

sifat antagonis terhadap pertumbuhan Bacillus anthracis. Sifat antagonistic

disebabkan adanya sekresi substansi kimia yang bersifat menghambat

pertumbuhan. Sifat antagonis ini oleh Pasteur kemudian diterapkan secara in vivo.

Hasil percobaan anthrax pada binatang percobaan yang peka ternyata dapat

ditekan dengan menginokulasi secara simultan berbagai bakteri non patogenik (

Suwandi, 1993).

Beberapa tahun kemudian Boechard, Emmerich dan Low membuat ekstrak

Pseudomonas araginosa dan mereka menamakannya Pycocyanase. Dengan

pengenceran sangat tinggi, senyawa ini dapat menghambat pertumbuhan

Corynebacterium diphteriae, Salmonella typhii, Pasteurella pestis dan Cocci

patogenik. Maka mulailah aplikasi terapi dengan memanfaatkanfenomena

interaksi diantara spesies mikroba. Selama 20 tahun Pycocyanase telah digunakan

untuk terapi berbagai infeksi penyakit, tetapi karena alasan toksisitasnya,

kemudian tidak digunakan secara ekstensif. Selama periode ini banyak percobaan

dan tulisan mengenai efek penghambatan bakteri terhadap mikroba lain.

Tahun 1907, Nicolle melaporkan adanya aktivitas anti bakteri Bacillus

subtilis dan sejak itu mulai dikenal Bacilli pembentuk spora yang mempunyai

aktivitas antibiotic. Di belgia pada tahun 1925, Gratia membuat ekstrak agen litik

dari jaumr dan berhasil digunakan untuk mengobati infeksi kulit Staphylococcus.


11/34

Merekalah yang memulai screening mikroorganisme antagonistic secara

sistematis. Cara kerjanya cepat tersebar dan banyak mendapat perhatian para ahli

mikrobiologi tanah dan tanaman. Salah satunya yaitu percobaan yang dilakukan

oleh Fleming tahun 1928, mengenai mikroba yang berada di udara ( Suwandi,

1993).

Istilah antibiotic muncul pada literature mikrobiologi awal tahun 1928.

Menurut Selman Waksman, antibiotic adalah substansi kimia yang diperoleh dari

mikroorganisme, dalam larutan encer mereka mempunyai kemampuan

menghambat pertumbuhan dan membinasakan mikroba lain ( Usman, 1987 ).

Pada tahun 1929, Fleming mengamati substansi bakteriostatik yang

dihasilkan jamur Penicillium notatum dan diberi nama Penicillin. Sejak itu

penisilin dikenal dan diketahui dapat diproduksi oleh berbagai macam jamur.

Namun karena kurang stabil terutama bio-aktivitasnya akan hilang bila diuapkan

samapi kering, maka penisilin kemudian ditinggalkan. Sekitar tahun 1939, Florey

dan kawan kawan melakukan percobaan kembali terhadap kemungkinan

penggunaan penisilin Fleming untuk terapi ( Suwandi, 1993 ).

Tahun 1940, Chain dkk juga melakukan penelitian penisilin, mereka

membiakan organism Fleming dan pada waktu ekstraksi dikontrol pada

temperature rendah, akhirnya mereka mampu memekatkan penisilin sampai 1000

kali, serta dapat menghasilkan garam penisilin berbentuk bubuk kering yang

mempunyai stabilitas baik terutama bila disimpan. Hasil ini merupakan kemajuan

besar dalam perkembangan produksi antibiotic terutama penisilin dan merupakan

tonggak sejarah manusia dalam memerangi penyakit infeksi ( Suwandi, 1993 )

Pada waktu yang hampir sama di Rockefeller Institute for Medical Research

New York. Dubos menemukan antibiotic kompleks Tyrothricin yang diproduksioleh bakteri tanah Bacillus brevis. Selanjutnya Dubos, Waksman dan Woodruff

menemukan aktinomisin yang diperoleh dari biakan aktinomisetes. Pada tahun

1944 Selman Waksman menemukan strerptomisin yang merupakan salah satu

antibiotic yang dihasilkan oleh Streptomyces anggota dari aktinomisetes.

Strepstomisin merupakan anti tuberculosis yang ampuh. Perkembangan ini

merangsang penelitian lebih lanjut terhadap genus streptomises dalam usaha

mencari mikroorganisme panghasil antibiotic. Sejak itu aktinomisetes terutama


12/34

streptomises menjadi gudang utama untuk memperoleh antibiotic baru. Di

berbagai lembaga penelitian dilakukan pencarian antibiotic dari berbagai tipe

mikroorganisme terutama aktinomisetes dan telah berhasil mendapatkan antibiotic

baru ( Suwandi, 1993).

Pada tahun1945 telah ditemukan Basitrasin yang dihasilkan oleh Bacillus,

diikuti khloramfenikol oleh Streptomyces venezuelae dan polimiksin oleh B.

polymyxapada tahun 1947, khlortetrasiklin oleh S.aureofacienspada tahun 1948

dan neomisin oleh S. fradiae tahun 1949, oksitetrasiklin 1950 dan eritromisin

1952, keduanya dihasilkan oleh Streptomyces. Kanamisin ditemukan oleh

Umezawa dan koleganya tahun 1957 dari biakan Streptomyces. Semua ini

merupakan antibiotic yang sangat penting dan sampai saat ini masih

diperhitungkan sebagai salah satu antibiotic untuk melawan infeksi ( Suwandi,

1993 ).

Pada tahun 60-an, penemuan antibiotic agak berkurang tetapi usaha

penemuan dilakukan untuk aplikasi yang lebih luas yaitu untuk mencari

antifungal, anti mikoplasmal, anti spirochetal, anti protozoal, anti tumor, anti

virus, dan antibiotic untuk penggunaan non medis. Namun pada decade ini

problem resistensi bakteri terhadap antibiotic mulai muncul dan telah

berkembang, sehingga memacu mencari antibiotik atau derivate antibiotic yang

telah dikenal untuk menggantikan antibiotic yang sudah ada ( Suwandi, 1993 ).

Potensi antibiotic dapat ditentukan oleh cara kimia, fisika, dan biologi. Suatu

pengujian dilakukan untuk menentukan kesanggupan suatu antibiotic membunuh

atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme hidup. Pengujian secara biologi

merupakan metoda yang paling efektif untuk antibiotic ( Usman, 1987 ).

2.3 AntibiotikAntibiotika merupakan zat kimia yang dihasilkan oleh suatu

mikroorganismeyang menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain (Pelczar

dan Chan, 2005). Antibiotika juga dapat didefinisikan sebagai zat kimia yang

dihasilkan oleh suatumikroba yang mempunyai khasiat antimikrobial (Entjang,

2003). Pada awalnya, istilahyang digunakan adalah antibiosis, yang berarti

substansi yang dapat menghambatpertumbuhan organisme hidup yang lain,


13/34

berasal dari mikroorganisme. Namun pada perkembangannya, antibiosis disebut

sebagai antibiotik (Pratiwi, 2008).

Antibiotika yang ideal harus memenuhi syarat-syarat antara lain

mempunyaikemampuan untuk mematikan atau menghambat pertumbuhan

mikroorganisme yang luas (broad spectrum antibiotic), tidak menimbulkan

pengaruh samping (side effect) yang buruk pada host, tidak menimbulkan

terjadinya resistensi dari mikroorganisme patogen serta konsentrasi antibiotik

dalam jaringan harus mencapai taraf cukup tinggi sehingga mampu menghambat

atau mematikan penyebab infeksi (Pelczar dan Chan, 2005).

Antibiotik pada mulanya berupa zat yang dibentuk oleh mikroorganisme yang

dapat menghambat atau membunuh pertumbuhan mikroorganisme lain. Sejak

ditemukan penisilin sampai saat ini sudah beribu antibiotik yang ditemukan dan

hanya sebagian kecil yang dapat dipakai untuk terapeutik. Mekanisme kerja dari

antibiotik ini antara lain menghambat biosintesis dalam dinding sel (misal

penisilin), menaikkan permeabilitas membran sitoplasma (misal sefalosphorin),

mengganggu sintesis protein normal bakteri (tetrasiklin, aminoglikosida).

Bakterisid merupakan antibiotika yang mempengaruhi pembentukan dinding sel

atau permeabilitas membran, sedang bakteriostatik adalah antibiotik yang bekerja

pada sintesa protein (Mutschler, 1991).

Berdasarkan sifat toksisitas selektif, antibiotik dapat bersifat bakteriostatik

(menghambat pertumbuhan mikroba lain). Antimikroba tertentu dapat

meningkatkan aktivitasnya dari bakteriostatik ditingkatkan melebihi kadar hambat

minimal (Gran, 1983).

Menurut Franklin dan Snow (1985), antibiotik dibagi menjadi 5 kelompok

berdasar mekanisme kerjanya yaitu:1) Mengganggu metabolisme sel bakteri

2) Menghambat sintesis dinding sel mikroba

3) Merusak keutuhan membran sel mikroba

4) Menghambat sintesis protein mikroba

5) Menghambat atau merusak sintesis asam nukleat sel mikroba.

Prosedur difusi-kertas cakram-agar yang distandardisasikan (metode Kirby-

Bauer) merupakan cara untuk menentukan sensitivitas antibiotik untuk bakteri.


14/34

Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter zona

hambat yang terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat

pertumbuhannya, sehingga diperlukan standar acuan untuk menentukan apakah

bakteri itu resisten atau peka terhadap suatu antibiotik (Irianto, 2006). Menurut

Irianto (2006), faktor yang mempengaruhi metode Kirby-Bauer, yaitu:

Konsentrasi mikroba uji Konsentrasi antibiotik yang terdapat dalam cakram Jenis antibiotik pH medium

Cara kerja pengujian antibiotik dengan metode Kirby-Bauer:

Celupkan cotton bud (cotton swab) dalam biakan bakteri kemudian tekankapas ke sisi tabung agar air tiris.

Ulaskan pada seluruh permukaan cawan Mueller-Hinton Agar secaramerata.

Biarkan cawan selama 5 menit. Kertas cakram dicelupkan dalam larutan antibiotik dengan konsentrasi

tertentu.

Angkat, biarkan sejenak agar tiris, selanjutnya letakkan kertas cakram padapermukaan agar.

Kertas cakram ditekan menggunakan pinset supaya menempel sempurna dipermukaan agar.

Inkubasi pada suhu 37oC selama 24-48 jam. Ukur diameter zona hambat (mm) kemudian bandingkan dengan tabel.

sensitivitas antibiotik.

2.4 MDR (Multi-Drug Resistance) atau Resistensi MikrobaResistensi adalah suatu keadaan karena pengaruh obat antiinfeksi terhadap

kuman berkurang khasiatnya atau kuman tersebut tidak sensitif oleh perlakuan

obat anti infeksi. Resistensi merupakan kegagalan pengobatan dengan suatu

antibiotika dengan dosis terapi (Franklin dan Snow, 1985).

Brander et al., (1991) mengatakan bahwa mekanisme resistensi bakteri

terhadap antibiotik terjadi dengan cara penginaktifan obat, perubahan target atau


15/34

sirkulasi enzim, berkurangnyaakumulasi obat oleh adanya sel resisten, variasi

jalur metabolisme.

Brander et al., (1991), ada 3 macam tipe resistensi, yaitu non genetik, genetik

dan silang. Resistensi non genetik terdapat pada mikroba dalam keadaan inaktif

atau istirahat, resistensi genetik merupakan mutasi spontan karena terjadinya

tanpa dipengaruhi ada atau tidaknya antimikroba tersebut. Penghancuran

antibiotik secara enzimatik oleh enzim yang di hasilkan bakteri seperti laktamase

akan memecah cincin _- laktam dari penisilin dan derivatnya demikian juga

aminoglukosa menjadi terasetilasi atau terfosforilasi oleh asetilase atau

fosforilase. Dinding sel bakteri Gram negatif yang lebih kompleks membuat

bakteri kurang sensitif terhadap antibiotik _-laktam.

Reseptor tempat agen antimikroba bereaksi dapat berubah baik afinitas

reseptor terhadap antimikroba maupun respon reseptor yang dapat menaikkan

aktivitas sehingga dapat mengatasi obat tersebut. Berkurangnya akumulasi obat

oleh adanya sel resisten terjadi dengan adanya penurunan permeabilitas membran

sel terhadap antibiotik dan variasi jalur metabolisme tersebut oleh antimikroba.

Obat yang dapat menghambat pertumbuhan antagonis kompetitif metabolisme

normal,dapat menghasilkan metabolik yang berlebihan. Akibatnya obat tersebut

tidak efektif lagi bagi bakteri (Irianto, 2006).

Resistensi sel mikroba ialah suatu sifat tidak terganggunya kehidupan sel

mikroba. Sifat ini merupakan suatu mekanisme alamiah untuk bertahan hidup.

Beberapa bakteri mempunyai kemampuan alami untuk kebal atau resisten

terhadap efek pengobatan, misal dengan antibiotik, meskipun tidak berinteraksi

secara langsung. Hal ini dapat terjadi karena bakteri mempunyai enzim yang dapat

merusak obat. Bakteri yang resistensi tidak peka lagi terhadap antibiotik atau senganti mikrobial (Brander et al., 1991).

Resistensi sel mikroba atau alat sifat tidak tergantung kehidupan sel mikroba

oleh anti mikroba. Sifat ini merupakan suatu mekanisme alamiah untuk bertahan

hidup (Irianto, 2006). Sebab-sebab terjadinya resistensi dapat dibagi menjadi :

a) Non GenetikPenggunaan antimikroba yang tidak sesuai aturan menyebabkan tidak

seluruh mikroba dapat terbunuh. Beberapa mikroba yang masih bertahan


16/34

hidup kemungkinan akan mengalami resistensi saat digunakan

antimikroba yang sama. Proses ini dinamakan dengan seleksi (Jawetz et

al., 2001).

b) GenetikTerjadinya resistensi kuman terhadap antibiotika umumnya terjadi karena

perubahan genetik. Perubahan genetik bisa terjadi secara kromosomal

maupun ekstra kromosomal, dan perubahan genetik tersebut dapat

ditransfer atau dipindahkan dari satu spesies kuman kepada spesies

kuman lain melalui berbagai mekanisme (Anonim, 1994).

1. Resistensi kromosomalResistensi kuman terhadap antibiotik yang mempunyai sebab genetik

kromosomal terjadi misalnya karena terjadinya mutasi spontan pada

lokus DNA yang mengontrol susceptibility terhadap obat tertentu

(Anonim, 1994).

2. Resistensi ekstrakromosomalBakteri mengandung unsur-unsur genetik ekstrakromosomal yang

dinamakan plasmid (Sudarmono, 1993). Faktor R adalah kelompok

plasmid yang membawa gen resistensi terhadap satu atau beberapa

obat antimikrobia dan logam berat. Gen plasmid untuk resistensi

antimikrobia mengontrol pembentukan enzim yang mampu merusak

antimikrobia (Jawetz etal., 2001).

3. Resistensi silangSuatu populasi kuman yang resisten terhadap suatu obat tertentu

dapat pula resisten terhadap obat yang lain yang dapat mempunyai

mekanisme kerja obat yang mirip satu sama lain. Hal ini misalnyaterjadi pada obat-obatan yang komposisi kimianya hampir sama

misalnya antara polimiksin B dengan kolistin, eritromisin dengan

oleandromisin, meskipun demikian adakalanya terjadi pula resistensi

silang pada dua obat yang berlainan struktur kimianya sama sekali,

misalnya eritromisin dengan linkomisin (Anonim, 1994).


17/34

Mekanisme resistensi bakteri terhadap antibiotik diantaranya melalui

mekanisme mikroorganisme menghasilkan enzim dan merusak obat

yang aktif, mikroorganisme merubah permeabilitasnya terhadap

obat, mikroorganisme mengubah struktur target untuk obat,

mikroorganisme mengembangkan jalur metabolisme baru

menghindari jalur yang biasa dihambat oleh obat, dan

mikroorganisme mengembangkan enzim baru yang masih dapat

melakukan fungsi metaboliknya tapi sedikit dipengaruhi oleh obat

(Jawetz, et al., 2001).

Masalah resistensi bakteri terhadap antibiotik telah dapat dipecahkan dengan

ditemukan antibiotik golongan baru, seperti golongan aminoglikosida,

glikopeptida, dan makrolida, juga obat modifikasi kimiawi dari antibiotik yang

telah ada. Namun, tak ada jaminan bahwa pengembangan antibiotik baru dapat

mencegah kemampuan bakteri menjadi resisten Jawetz, et al., 2001).

2.5 Bakteri PatogenBerbagai macam penyakit ditularkan oleh bakteri patogen (khususnya bakteri

Gram negatif) dan dapat menginfeksi inang. Patogen adalah material maupun

organisme penyebab penyakit. Sebelum membicarakan patogen, perlu membahas

sistem pertahanan inang.Sistem pertahanan inang dimulai dari lapisan permukaan

kulit, saluran pencernaan, respirasi, dan urogenital. Patogen harus bersaing

dengan mikroflora (mikroba normal) agar bisa berkoloni di permukaan kulit dan

saluran pencernaan. Saluran pencernaan, pernapasan, dan urogenital memiliki

lapisan mukosa yang berupa polisakarida dan protein sebagai pelumas dan untuk

menahan patogen. Patogen yang terjerat dalam mukosa dapat dikeluarkan darisaluran pencernaan dengan gerak peristaltik atau di saluran pernapasan melalui

bersin (Campbell and Reece, 2005).

Jika patogen dapat menembus pertahanan permukaan, maka patogen akan

menuju jaringan yang lebih dalam dan sistem peredaran darah. Inang memiliki

sistem pertahanan non-spesifik seperti transferin, fagosit, komplemen, dan protein

pengikat manosa. Sistem pertahanan spesifik meliputi antibodi, makrofag

teraktivasi dan sel T.Faktor utama untuk meningkatkan sistem pertahanan inang


18/34

adalah nutrisi yang baik untk mendukung sel-sel aktif dari sistem kekebalan tubuh

yang terus membelah diri. Penurunan sistem kekbalan tubuh dapat dipengaruhi

oleh stress dan usia (usia rawan infeksi yaitu anak di bawah 3 tahun dan usia lebih

dari 50 tahun). Ekskresi dari organ tubuh yang terinfeksi selalu mengandung

mikrobia yang menyebabkan infeksi. Jalan keluar bagi mikroba penyebab

penyakit biasanya sama dengan jalan masuknya pada tubuh inang (Campbell and

Reece, 2005). Menurut Madigan (2010), mikroba patogen diketahui memasuki

inang melalui organ-organ tubuh antara lain :

a)Saluran pernapasan, melalui hidung dan mulut menyebabkan penyakitsaluran pernapasan seperti salesma, pneumonia, tuberculosis.

b)Saluran pencernaan melalui mulut menyebabkan penyakit tifus, paratifus,disentri, kolera, hepatitis, keracunan makanan.

c)Kulit dan selaput lendir. Adanya luka meskipun kecil memungkinkanmikroba seperti Staphylococcus yang menyebabkan bisul.

d)saluran urogenitale)darah

Banyak bakteri patogen yang dapat menyerang seluruh bagian tubuh

inang, meskipun pada akhirnya akan berkoloni di suatu tempat saja. Bakteri

mengeluarkan toksin berupa eksotoksin dan endotoksin. Eksotoksin merupakan

protein bakteri yang diproduksi dan dikeluarkan ke lingkungan selama

pertumbuhan bakteri patogen. Ada beberapa cara eksotoksin untuk dapat

menimbulkan penyakit. Pertama eksotoksin dikeluarkan ke makanan, akibatnya

manusia terserang penyakit asal makanan. Kedua, eksotoksin dikeluarkan ke

permukaan mukosa menyerang sel inang atau dapat terbawa ke sistem peredaran

darah untuk menyerang jaringan yang rentan. Ketiga, bakteri patogen membentukabses (luka) dan mengeluarkan eksotoksin untuk merusak jaringan sehingga

mempermudah pertumbuhan bakteri. Endotoksin merupakan lipid A sebagai

bagian dari lipoposakarida membran luar bakteri Gram negatif (Madigan, 2010).

Ketika bakteri patogen terbenam dalam permukaan sel inang, akan

menyebabkan pelepasan senyawa protein seperti komplemen dan sitokin berlebih

yang dapat ikut merusak sel atau jaringan inang di sekitarnya. Bakteri patogen

harus dapat menemukan tempat yang cocok untuk melekatkan diri ke sel inang


19/34

salah satunya dengan menggunakan pili. Pada Escherechia colimemiliki pili tipe

1 untuk dapat melekat pada lapisan mukosa saluran urogenital. Pseudomonas

aeruginosa memproduksi biofilm, juga memiliki flagel untuk bergerak

menghindari tangkapan mukosa. Pembentukan kapsul (polimer polisakarida) yang

membungkus permukaan bakteri patogen untuk melindungi diri dari sel-sel

fagosit inang (Prescott, 2002).

Menurut Campbell and Reece (2005), macam-macam bakteri patogen yang

sering kita kenal yaitu:

c) Bakteri penyebab penyakit pada manusia:Salmonella typhosa : tifus

Shigella dysenteriae : disentri basiler

Vibrio comma : kolera

Haemophilus influenza : influenza

Diplococcus pneumoniae : radang paruparu

Mycobacterium tuberculosis : TBC

Clostridium tetani : tetanus

Neiseria meningitis : radang selaput otak

Neiseria gonorrhoeae : gonorrhaeae (kencing nanah)

Treponema pallidum : sifilis

Mycobacterium leprae : lepra

Treponema pertenue : patek

b) Bakteri penyebab penyakit pada hewan:Brucella abortus : brucellosis pada sapi

Streptococcus agalactia : masitis pada sapiBacillus anthracis : antraks

Actinomyces bovis : bengkak rahang pada sapi

Cytophaga columnaris : penyakit pada ikan

c) Bakteri penyebab penyakit pada tumbuhan:Xanthomonas oryzae : penyakit pucuk batang padi

Xanthomonas campestris : menyerang pada tanaman kubis
http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Salmonella_typhosa&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Salmonella_typhosa&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Shigella_dysenteriae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Shigella_dysenteriae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Vibrio_comma&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Vibrio_comma&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Haemophilus_influenza&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Haemophilus_influenza&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Diplococcus_pneumoniae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Diplococcus_pneumoniae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosishttp://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Clostridium_tetani&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Clostridium_tetani&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_meningitis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_meningitis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_gonorrhoeae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_gonorrhoeae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Treponema_pallidumhttp://id.wikipedia.org/wiki/Treponema_pallidumhttp://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_lepraehttp://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_lepraehttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Treponema_pertenue&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Treponema_pertenue&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Brucella_abortus&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Brucella_abortus&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Streptococcus_agalactia&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Streptococcus_agalactia&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Bacillus_anthracishttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacillus_anthracishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Actinomyces_bovis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Actinomyces_bovis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Cytophaga_columnaris&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Cytophaga_columnaris&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Xanthomonas_oryzae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Xanthomonas_oryzae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Xanthomonas_campestrishttp://id.wikipedia.org/wiki/Xanthomonas_campestrishttp://id.wikipedia.org/wiki/Xanthomonas_campestrishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Xanthomonas_oryzae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Cytophaga_columnaris&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Actinomyces_bovis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Bacillus_anthracishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Streptococcus_agalactia&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Brucella_abortus&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Treponema_pertenue&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_lepraehttp://id.wikipedia.org/wiki/Treponema_pallidumhttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_gonorrhoeae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Neiseria_meningitis&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Clostridium_tetani&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Diplococcus_pneumoniae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Haemophilus_influenza&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Vibrio_comma&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Shigella_dysenteriae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Salmonella_typhosa&action=edit&redlink=1


20/34

Pseudomonas solanacaerum : penyakit layu pda terongterongan

Erwinia amylovora : penyakit bonyok pada buah

2.6 NP4 (Jorunna funebris)Seiring dengan berkembangnya penggunaan

antibiotik untuk pengobatan penyakit yang

disebabkan oleh infeksi bakteri serta penggunaan

antibiotik yang tidak rasional yang dilakukan

olehprescribers(para dokter penulis resep) atau

pasien itu sendiri telah menimbulkan masalah munculnya kuman yang resisten

terhadap antibiotik. Masalah resistensi bakteri telah menjadi masalah kesehatan di

dunia, yang dapat meningkatkan mortalitas, morbilitas (lamanya perawatan di

rumah sakit) dan biaya kesehatan. Beberapa penelitian telah melaporkan bakteri

resisten ini seperti multidrug-resistant gram-negative bacilli (MDR-GNBs),

ESBL-producing Klebsiella pneumonia, Vacomycin-reaistant entercocci (VRE)

dan pasien yang terinfeksi methicillin-resistant Staphyllococcus aureus (MRSA)

(Lay dan Hastowo, 1992).

Selain itu, bahaya bakteri yang telah resisten terhadap antibiotik yaitu

kemampuan genetiknya yang dapat menularkan resistensi kepada bakteri lain

yang hidup berdampingan di sekitarnya. Hal ini terjadi pada bakteri Shigella

flexneri danEscherichia coliyang hidup dalam satu populasi, mereka dilaporkan

mepunyai pola resistensi secara penotif yang sama yaitu terhadap tetracycline,

chloramphenicol, streptomycin dan sulfanomide. Dengan semakin banyaknya

penelitian yang melaporkan tentang resistensi mikroba, maka telah dikembangkan

juga beberapa cara untuk melawan masalah resistensi tersebut, di antaranyapenggunaan antibiotik secara rasional, monitoring dan evaluasi penggunaan

antibiotik secara sistematis, terstandar dan dilaksanakan secara teratur serta

dengan mengoptimalkan penggunaan antibiotik. Selain itu, kombinasi antara

kontrol penggunaan antibiotik dan kontrol penyebaran infeksi mikroorganisme

juga sangat penting, terutama untuk kasus multiple resistance Enterobacteriaceae

dan MRSA. Pengurangan penggunaan erythromycinterbukti menurunkan jumlah

resistensi Group A streptccoci terhadap makrolida antibiotik di Finlandia. Untuk
http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Pseudomonas_solanacaerum&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Pseudomonas_solanacaerum&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Erwinia_amylovora&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Erwinia_amylovora&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Erwinia_amylovora&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Pseudomonas_solanacaerum&action=edit&redlink=1


21/34

menanggulangi masalah resistensi di masa yang akan datang, maka perlu dicari

solusi yang tepat. Pencarian senyawa baru sebagai bahan antibakteri merupakan

salah satu solusinya, hal ini berhubung pengembangan pencarian obat baru

memerlukan waktu yang sangat lama (sekitar 14 tahun) dan biaya yang sangat

mahal (sekitar 900 US dollar) (Madigan, 2010).

Lautan merupakan sumber sebagian besar kelompok senyawa bioaktif yang

terakumulasi dalam invertebrata laut yang hidup di ekosistem terumbu karang

seperti sponge, karang lunak, nudibranch dan tunicate yang dapat mensintesis

senyawa bioaktif seperti antivirus, antimikroba, antitumor dan antikanker.

Sedangkan senyawa bioaktif ini terkandung dalam invertebrata laut dengan

pergerakan lambat atau hidup menempel di dasar perairan (sessile) yang tidak

mempunyai perlindungan fisik seperti duri atau cangkang. Dari hasil beberapa

penelitian, dilaporkan bahwa nudibranch dapat mensintesis senyawa bioaktif yang

diproduksi sendiri atau berasal dari sumber makanannya (de novo). Nudribranch

seperti Dendoris limbiatamensintesis senyawa sesquiterpenoid, diterpenoid dan

serterpen. Nudibranch Asteronotus cespitosus menghasilkan sesquiterpenes

dehidroherbadysidolide dan spirodysin, Acanthodoris nanaimoensis dengan

sesquiterpenoidnya, Limacia clavigeramenghasilkan limaciamine, Chromodoris

luteorosea dengan diterpenoids luteorosin dan macfarlandin-A dan banyak lagi

senyawa bioaktif yang dihasilkan nudibranchsebagai hasil dari interaksi dengan

lingkungan fisiknya (Lay dan Hastowo, 1992).

Baru-baru ini banyak penelitian yang melaporkan tentang bakteri simbion

invertebrata karang yang mampu menghasilkan senyawa antibakteri.

Ditemukannya bakteri yang hidup bersimbiosis dengan karang keras (hard coral),

karang lunak (soft coral) dan sponge yang menghambat bakteriE. coli, S. aureus,Streptococcus equi,zooepidemicus,Aeromonas hidrophyladan bakteri kelompok

vibrio penyebab penyakit vibriosis pada budidaya laut. Akan tetapi, penelitian

yang melaporkan tentang bakteri simbion nudibranch masih sangat sedikit. Selain

itu, diemukan juga ribuan simbiotik bakteri pada jaringan vestibular nudribranch

Dendrodoris nigradan massa telurnya. Namun fungsi dari bakteri tersebut belum

diketahui dengan jelas. Sedangkan di Skotlandia ditemukan bakteri simbion

nudibranch Archidoris pseudoargus yang dapat melawan bakteri Pseudomonas


22/34

aeruginosa. Belum banyak penelitian tentang bakteri simbion nudibranch yang

menghasilkan senyawa antibakteri, khususnya yang melawan bakteri MDR. Hal

ini memungkinkan bakteri simbion nudibranch dapat menghasilkan senyawa

antibakteri untuk melawan bakteri strain MDR berhubung banyaknya nudibranch

yang dapat menghasilkan senyawa bioaktif (Lay dan Hastowo, 1992).

2.7 E. ColiBakteri Escheria Coli merupakan kuman

dari kelompok gram negatif, berbentuk batang

dari pendek sampai kokus, saling terlepas

antara satu dengan yang lainnya tetapi ada juga

yang bergandeng dua dua (diplobasil) dan

ada juga yang bergandeng seperti rantai

pendek, tidak membentuk spora maupun kapsula, berdiameter 1,11,5 x 2,0

6,0 m, dapat bertahan hidup di medium sederhana dan memfermentasikan

laktosa menghasilkan asam dan gas, kandungan G+C DNA ialah 50 sampai 51

mol % (Pelczar dan Chan, 1988).

Escherichia coli dapat tumbuh di medium nutrien sederhana, dan dapat

memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan asam dan gas (Pelczar dan

Chan, 2005). Kecepatan berkembangbiak bakteri ini adalah pada interval 20 menit

jika faktor media, derajat keasaman dan suhu tetap sesuai. Selain tersebar di

banyak tempat dan kondisi, bakteri ini tahan terhadap suhu, bahkan pada suhu

ekstrim sekalipun. Suhu yang baik untuk pertumbuhan bakteri ini adalah antara

80C-460C, tetapi suhu optimumnya adalah 370C. Oleh karena itu, bakteri tersebut

dapat hidup pada tubuh manusia dan vertebrata lainnya (Dwidjoseputro, 1978).TaksonomiEscherichia colisebagai berikut (Dwidjoseputro, 1978) :

Divisi : Protophyta

Kelas : Schizomycetes

Ordo : Eubacteriales

Famili : Enterobacteriaceae

Genus : Escherichia

Spesies :Escherichia coli


23/34

Pelczar dan Chan (1988) mengatakanEscherichia colimerupakan bagian dari

mikrobiota normal saluran pencernaan.Escherichia colidipindahsebarkan dengan

kegiatan tangan ke mulut atau dengan pemindahan pasif lewat makanan atau

minuman. Morfologi dan ciri-ciri pembedaEscherichia coli, yaitu:

1. merupakan batang gram negatif2. terdapat tunggal, berpasangan, dan dalam rantai pendek3. biasanya tidak berkapsul4. tidak berspora5. motil atau tidak motil, peritrikus6. aerobik, anaerobik fakultatif7. penghuni normal usus, seringkali menyebabkan infeksi.

Escherichia coli dalam usus besar bersifat patogen apabila melebihi dari

jumlah normalnya. Galur-galur tertentu mampu menyebabkan peradangan selaput

perut dan usus (gastroenteritis). Bakteri ini menjadi patogen yang berbahaya bila

hidup di luar usus seperti pada saluran kemih, yang dapat mengakibatkan

peradangan selaput lendir (sistitis) (Pelczar dan Chan, 1988).

Escherichia colidapat dipindahsebarkan melalui air yang tercemar tinja atau

air seni orang yang menderita infeksi pencernaan, sehingga dapat menular pada

orang lain. Infeksi yang timbul pada pencernaan akibat dari serangan bakteri

Escherichia coli pada dinding usus menimbulkan gerakan larutan dalam jumlah

besar dan merusak kesetimbangan elektrolit dalam membran mucus. Hal ini dapat

menyebabkan penyerapan air pada dinding usus berkurang dan terjadi diare

(Pelczar dan Chan, 1988).

2.8 Zat AntibakteriPertumbuhan mikroorganisme dapat dikendalikan melalui proses fisik dan

kimia. Pengendalian dapat berupa pembasmian dan penghambatan populasi

mikroorganisme. Menurut Pelczar dan Chan (1998), zat antimikrobial adalah zat

yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme melalui mekanisme

penghambatan pertumbuhan mikroorganisme. Zat antimikrobial terdiri dari

antijamur dan antibakterial. Zat antibakterial adalah zat yang mengganggu

pertumbuhan dan metabolisme melalui penghambatan pertumbuhan bakteri.


24/34

Beberapa hal yang perlu dipertimbangkan dalam memilih zat antimikrobial

kimiawi menurut Pelczar (1998) adalah :

1. Jenis zat dan mikroorganismeZat antimikrobial yang akan digunakan harus sesuai dengan jenis

mikroorganismenya karena memiliki kerentanan yang berbeda-beda.

2. Konsentrasi dan intensitas zat antimikrobialSemakin tinggi konsentrasi zat antimikrobial yang digunakan, maka

semakin tinggi pula daya kemampuannya dalam mengendalikan

mikroorganisme.

3. Jumlah organismeSemakin banyak mikroorganisme yang dihambat atau dibunuh, maka

semakin lama waktu yang diperlukan untuk mengendalikannya.

4. SuhuSuhu yang optimal dapat menaikkan efektivitas zat antimikrobial.

5. Bahan organikBahan organik asing dapat menurunkan efektivitas zat antimikrobial

dengan cara menginaktifkan bahan tersebut atau melindungi

mikroorganisme. Hal tersebut karena penggabungan zat dan bahan

organik asing membentuk zat antimikrobial yang berupa endapan

sehingga zat antimikrobial tidak lagi mengikat mikroorganisme.

Akumulasi bahan organik terjadi pada permukaan sel mikroorganisme

sehingga menjadi pelindung yang mengganggu kontak antara zat

antimikrobial dengan mikroorganisme.

Sejak 1935, sejumlah besar agen obat kimia telah dikembangkan. Senyawa

kimia tersebut pada umumnya dibuat secara sintesis di laboratorium, sedangkanyang lain dibuat dari hasil sampingan kegiatan metabolisme bakteri atau fungi.

Agen obat kimia diberi nama umum Antibiotika. (Volk and Wheeler, 1993).

Antibiotika adalah bahan-bahan bersumber hayati yang pada kadar rendah

sudah menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Jadi, antibiotika merupakan

salah satu jenis antibakterial. (Schlegel, 1994). Kriteria agen obat kimia yang

digunakan sebagai kemoterapi menurut Schlegel (1994) adalah sebagai berikut :


25/34

1. Toksisitas obat terhadap sel inang harus rendah sementaramemusnahkan atau menghambat agen penyakit. Dengan kata lain,

obat itu harus menunjukkan toksisitas selektif bagi agen penyakit.

2. Inang harus tidak menjadi alergi (sangat peka) terhadap obat.3. Organisme tidak boleh dengan mudah menjadi resisten terhadap obat

yang digunakan.

4. Obat itu harus mencapai tempat infeksi.


26/34

BAB III

MATERI DAN METODE

3.1 MateriHari / tanggal : Kamis, 8122011

Waktu : 13.0016.30

Tempat : Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Jurusan

Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas

Diponegoro

3.2 Alat dan Bahan3.2.1 Acara IUji Sensitivitas

Alat Keterangan

Pipet mikro Untuk memindahkan cairan yang bervolume

ukuran mikro

Cawan petri Sebagai wadah penyimpanan dan pembuatan

kultur media

Spreader Untuk penanaman kultur bakteri

Bunsen Untuk menciptakan daerah steril

Paper disk Untuk meletakkan bakteri laut yang ditanam ke

media

Inkubator Untuk menginkubasi mikroba yang diinginkan

pda suhu optimum pertumbuhannya

Tabung reaksi Untuk wadah media cair, dapat pula digunakan

sebaga tempat untuk menumbuhkan mikroba

Autoklaf Untuk mensterilisasi alat atau media pada suhu

121oC

Plastik wrap Untuk membungkus cawan petri saat akan

diinkubasi

Label Untuk menamakan jenis bakteri yang digunakan

sesuai kelompo praktikum


27/34

Bahan Keterangan

Jorunna funebris Bakteri laut yang bersimbiosis dengan

Nudibranch

Media Zobell 2216e

padat tawar

Digunakan untuk menanam bakteri

patogen di media

Media Zobell 2216e

cair laut

Digunakan untuk menanam bakteri isolat

di media

BakteriEscherichia

Coli

Bakteri yang digunakan untuk pengujian

sensitvitas

Alkohol 70% Untuk membersihkan alat, media, tangan,

dan area kerja

3.2.2 Acara IIPengamatanAlat Keterangan

Cawan petri Sebagai tempat untuk uji sensitivitas yang

diamati

Jangka sorong Untuk mengukur zona hambat

Bahan Keterangan

Jorunna funebris Bakteri laut yang bersimbiosis dengan

Nudibranch

Media padat Digunakan untuk menanam bakteri

3.3 MetodeUji Sensitivitas

1. Inokulasi bakteri isolat NP4 ke dalam Zobell cair laut.2. Diinkubasi selama 4 hari.3. Inokulasi bakteri patogen ke dalam media Zobell air tawar, lakukan

pada hari ketiga.

4. Pada hari keempat buat media Zobell padat tawar.5. Spread bakteri patogen pada media.


28/34

6. Diamkan selama 1 menit.7. Ambil pinset sterl untuk mengambil paper disk dan letakkan paper

disk pada media.

8. Bagian yang datar diletakkan pada media, bagian yang cembung dimenghadap ke atas agar bakteri laut bisa diserap paper disk.

9. Ambil bakteri dengan ukuran tip.10.Saat spread harus rata agar bisa melawan bakteri patogen.11.Bersihkan pipet mikro menggunakan kapas yang sudah diberi

alkohol.

12.Gunakan pipet untuk mengambil bakteri laut sebanyak 2 kaliambil.

13.Resus dahulu sebelum diteteskan agar bakteri homogen.14.Teteskan bakteri laut pada bagian tengah paper disk.


29/34

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

4.2 Pembahasan4.2.1 Acara IUji Sensitivitas

Pada praktikum ini menggunakan metode difusi yaitu dengan Cara

Kirby-Bauer. Metode ini sangat mudah dilakukan karena tidak rumit dalam

penegrjaannya dan efisien karena dalm satu perbenihan agar dapat menguju

maksimal 12 macam antimikroba.Tidak membutuhkan alat dan bahan yang

banyak sedangkan kerugiannya tidak dapat diketahui secara tepat tingkat

resistensi atau kepekaan bakteri terhadap antimikroba. Penggunaan metode

ini menunjukkan hasil tidak adanya zona hambat pada media tersebut. Hal ini

terjadi karena bakteri patogen resisten terhadap bakteri laut atau bakteri isolat.

Apabila terbentuk zona hambat maka bakteri patogen tidak resisten terhadap

bakteri laut dan bakteri tersebut tidak aktif. Ada atau terbentuk dan tidaknya

zona hambat menunjukan kultur bakteri patogen atau tidak terhadap bakteri

laut.

Saat pembuatan media menggunakan bakteri patogen dengankomposisi 50 mikron, sedangkan bakteri laut yang diteteskan pada paper disk

sebanyak 30 mikron. Tujuannya agar semakin besar ukuran zona hambatnya.

Zona hambat adalah zona dimana menunjukan aktif dan resisten tidaknya

suatu bakteri terhadap suatu senyawa atau zat. Dimana zona hambat

merupakan senyawa metabolisme sekunder yang dikeluarkan oleh bakteri

untuk bertahan hidup. Sedangkan semakin kecil konsentrasi bakteri laut,

maka semakin kecil atau bahkan tidak ada zona hambat yang terbentuk.


30/34

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan Teknik uji sensitivitas dibagi menjadi 2 metode, yaitu metode difusi dan

metode dilusi.

Uji sensitivitas dilakukan untuk mengetahui resistensi suatu bakteri. Bakteri adalah makhluk berukuran mikro yang jika sudah resisten bisa

menularkan resistensinya ke bakteri lainnya.

5.2 Saran Sebaiknya praktikum disesuaikan dengan modul. Sebaiknya praktikum dilakukan tepat waktu agar lebih efisien.


31/34

DAFTAR PUSTAKA

Allen, G.R. dan Steene, R. 1999. Indo-Pacific Coral Reef Guide. Tropical Reef

Research. Singapore.

Ampou, E.E. 2006. Similarity Distribution of Nudibranch (Chromodorididae,

Phyllidiidae, Facelinidae) in Siladen Island North Sulawesi-Indonesia.

Unsrat Online, Manado.

Anonim, 1994, Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran, edisi revisi, Binarupa

Aksara, Jakarta

Brander, G.C., D.M. Pugh., R.J. Bywater., R.J, dan W.L. Jenkins. 1991.

Veterinary Applied Pharmacology and Therapeutics. 5th Ed. ELBS,

Bailliere Tindall.

Burgess, e. w.,(1925). The growth of the City, in R. E. Park; E. W. Burgess and

R.D. McKenzie (eds), The City, University of Chicago Press, Chicago.

Campbell, N. A. Dan Reece, J. B., 2005. Biologi Jilid 2. Erlangga. Jakarta.

Dwidjoseputro. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan

Entjang, I.,2003, Mikrobiologi dan Parasitologi. Citra Aditya Bakti. Bandung

Franklin, T.J. dan Snow, G.W., 1985. Biochemistry of Antimicrobial Action. 3rded.

London, New York.

Godfrey, S. 2001. Factors Affecting Nudibranch Diversity in The Wakatobi

Marine National Park,

URL:http://www.opwall.com/.../Invertebrates/Godrey,%20S%20Factor

s%20affecting%20nudibranc8h%20distribution.pdf>.

Hunt, B., and A.C.J. Vincent. 2006. Scaleand sustainability of

marinebioprospecting for pharmaceuti-cals. Ambio, 35(2):57-64.Irianto, K.2006. Mikrobiologi.Yrama Widya : Bandung

Jawetz. 2001. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba Medika. Jakarta.

Karuso, P. dan Scheuer P.J. 2002. Natural Products from Three Nudibranchs:

Nembrotha kubaryana, Hypselodoris infucata and Chromodoris

petechialis. Molecules 7: 1-6.

Kelecom, A. 2002. Secondary metabolites from marine microorganisms. An.

Acad. Bras. Cienc. 74(1): 151170.


32/34

Koesmadji. 2002. Genetika Lanjutan. Jakarta: Penerbit Karunika Jakarta,

Universitas Terbuka.

Lay, B. W. dan Hastowo. 1982.Mikrobiologi. Rajawali Press Jakarta.

M. T. Madigan, and Brock, T. D. 2010. Biology of Microorganisms. 6th ed.

Prentice Hall. New Jersey. USA.

Murniasih, T. 2005. Substansi Kimia untuk Pertahanan Diri dari Hewan Laut

Tak Bertulang Belakang. Oseana, Volume XXX, Nomor 2 : 1927.

Mutschler, Ernest.1991.Dinamika Obat,ITB Press: Bandung

Park, Shin Hye. 2002. Morphological Diversity of Marine Miicroorganisms on

Different Isolation Media. Korea: Microbiology Laboratory Korea

Ocean Research & Development Institute

Pelczar, M., 1988. Dasardasar Mikrobiologi 2. UIPress, Jakarta.

Pelczar, M. J. dan Chan, E. C. S., 2005, Dasar-dasar Mikrobiologi 1, Alih

bahasa: Hadioetomo, R. S., Imas, T., Tjitrosomo, S.S. dan Angka, S. L.,

UI Press, Jakarta.

Pratiwi, dkk. 2008. Buku Penuntun Biologi SMA untuk Kelas X. Jakarta :

Erlangga

Prescott, J.F., Baggot, J.D. and Walker, D.R. 2002. Antimicrobial Therapy in

Veterinary Medicine, 3rd edn. pp. 1771. Ames: Iowa State University

Press.

Radjasa, O.K. and A.Sabdono. 2004.Screening of secondary metabolite-producing

bacteria associatedwith corals using 16S rDNA-basedapproach. J.

Coast. Dev., 7:11-19.

Radjasa, O.K., A. Sabdono, Junaidi, and E. Zocchi. 2007c. Richness of secondary

metabolite- producingmarine bacteria associated withsponge Haliclonasp. Int. J.Pharmacol., 3(3):275-279.

Schlegel, Hans dan Karin Scmidt. 1994. Mikrobiologi Umum. Diterjemahkan

oleh Tedjo Baskoro. Yogyakarta: UGM Press

Sudarmono, P., 1993, Genetika dan Resistensi, Buku Ajar Mikrobiologi

Kedokteran, Edisi Revisi, Binarupa Aksara, Jakarta.

Suwandi, U., 1993. Perkembangan Antibiotik. Cermin Dunia Kedokteran No. 83.

Pusat Penelitian dan Pengembangan PT. Kalbe Farma, Jakarta.


33/34

Thiel, V., and J.F. Imhoff, 2003: Phylogenetic identification of bacteria with

antimicrobial activitiesisolated from different Mediteranean sponges. J.

Biomolec. Engin., 20, 421-423. www.ifm-

geomar.de/fileadmin/ifm/jb/chapter3_10_microbio.pdf

Usman, R., 1987. Mikrobiologi Dasar. Universitas Padjajaran, Bandung.

Volk, W.A., 1993. Mikrobiologi Dasar. Edisi kelima. Erlangga, Jakarta.

Waaij, D. Vander. 1991. Hidup Bersama Kuman Apa Yang Kita Ketahui. Jakarta:

Penerbit Buku Kedokteran EGC


34/34

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI LAUT

MODUL IVUJI SENSITIVITAS

OLEH :

LUTHFI SINATRYA EKANANDA

26020110130086

Kelompok 13

ASISTEN:

DIDHA ANDINI P

K2D 007 027

PROGRAM STUDI ILMU KELAUTAN

JURUSAN ILMU KELAUTAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS DIPONEGORO

SEMARANG

2011

Laporan Praktikum Mikrobiologi Modul v (1)

Documents

Transcript of Laporan Praktikum Mikrobiologi Modul v (1)