Laporan Praktikum Mikrobiologi Pangan III

7/26/2019 Laporan Praktikum Mikrobiologi Pangan III

1/13

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PANGAN

PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN AEROB DAN SPORA BAKTERI

KELOMPOK A3 GIZI NONREGULER

ANGGOTA KELOMPOK:

1. DIAN EKA KURNIA

2. DEVI MELIANTI

3. INDAH SEPTIA

4. RIA SEPTIANA

POLTEKKES KEMENKES TANJUNG KARANG

JURUSAN GIZI

2013/2014


2/13

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kuantitasi mikroba menunjukan jumlah koloni yang mampu di bentuk oleh

mikroba tertentu. Beberapa koloni bakteri ini, bagi tubuh manusia akan

menyebabkan penyakit. Seteril dari bakteri untuk maknan terutama minuman,

sangat perlu di ketahui demi menjaga kesehatan. Air minum dari berbagai tempat

memepunyai jenis-jenis bakteri yang tidak sama untuk air minum hasilpenyulingan diharapkan sudah terbebas dari bakteri.

Menghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan

(makanan, minuman, dan lain-lain) dilakukan untuk mengetahui sampai seberapa

jauh bahan itu tercemar oleh mikroba. Dengan mengetahui jumlah mikroba, maka

dapat diketahui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut. Bahan yang dapat

dikatakan baik jika jumlah mikroba yang terkandung dalam bahan tersebut masih

di bawah jumlah standar yang ditentukan oleh suatu lambaga. Kandungan

mikroba pada suatu bahan juga sangat menentukan tingkat kerusakannya, serta

dapat ditentukan oleh tingkat kelayakan untuk dikonsumsi.

Uji angka lempeng total merupakan metode yang umum digunakan untuk

menghitung adanya bakteri yang terdapat dalam sediaan yang diperiksa. Uji angka

lempeng total dapat dilakukan dengan dua teknik, yaitu teknik cawan tuang (pour

plate) dan teknik sebaran (spread plate). Pada prinsipnya dilakukan pengenceran

terhadap sediaan yang diperiksa kemudian dilakukan penanaman pada media

lempeng agar. Jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada lempeng agar dihitung

setelah inkubasi pada suhu dan waktu yang sesuai. Perhitungan dilakukan

terhadap petri dengan jumlah koloni bakteri antara 30-300. Angka lempeng total

dinyatakan sebagai jumlah koloni bakteri hasil perhitungan dikalikan faktor

pengencer.

Angka kapang/khamir menunjukkan adanya cemaran kapang/khamir dalam

sediaan yang diperiksa. Setiap sediaan mensyaratkan batas angka kapang/khamir

tertentu yang masih dianggap aman. Perhitungan dilakukan terhadap petri dengan


3/13

jumlah koloni 40-50 buah. Angka kapang/khamir dinyatakan sebagai jumlah

koloni kapang/khamir hasil perhitungan dikalikan faktor pengenceran.

1.2

Tujuan

Menghitung koloni pada pengenceran media plate count agar(PCA) dengan

sampel tempe.


4/13

BAB II

METODOLOGI

2.1 Waktu dan Tempat

Hari, Tanggal : Selasa, 19 November 2013

Waktu : Pukul 08.00 s.d Selesai

Tempat : Laboratorium Terpadu

2.2 Alat dan Bahan2.2.1 Alat

Alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu : timabangan (kemampuan

sampai 300 gram), labu Erlenmeyer yang berskala, pipet takar, petridish, lampu

spiritus, dot karet (bulbl/spin), inkubator 37 0C dan 55 0C.

2.2.2 Bahan,

Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah : plate count agar/

glucose yeast axtract agar, quarter strength ringer solution, air garam 0,85%, dan

tempe.

2.3. Cara Kerja

2.3.1 Pengenceran Sampel Padat

Ditimbang labu Erlenmeyer steril yang berskala.

Diambil sampel secara steril, dan dimasukkan ke dalam Erlenmeyer steril

tersebut, dan ditimbang sebanyak 1 gram sampel.

Lakukan pengenceran dengan menanmbahkan 9 ml aquades ke dalam tabung

reaksi lalu homogenkan.


5/13

Diambil 1 ml dari hasil penceran masukkan ke dalam tabung ke 2, lalu

ditambahkan 9 ml aquades, lalu homogenkan.

Demikian seterusnya hingga pengenceran ke 6.

2.3.2 Penuangan Plate Count Agar

Diambil 1 cc dari pengenceran ke empat, lima, dan enam, lalu dimasukkan

masing-masing ke dalam petridish steril yang sudah diberi nomer sampel,

penenceran, dan tanggal pelaksanaan pemeriksaan.

Dibuat plate control (Petridish diisi pelarut sebanyak 1 cc), tujuanya untuk

mengetest sterilisasi alat, reagensia, ruangan, dan cara kerjanya.

Dituangi plate count agar suhu 45-50 0C sebanyak 15-20cc pada masing-masing

petridish yang sudah berisi sampel.

Diamkan diatas meja sampai agar-agar membeku.

Kumpulkan, dibalik, dan diinkubasi 37 0C selama 48 jam.


6/13

BAB III

HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Hasil Pengamatan

Tabel 1 Perhitungan koloni pada plate

Plate

Nomer

Pengenceran Gambar

1. 10 -

2. 10 -

3. 10 -6

Control 1x


7/13

3.2 Pembahasan

Pada praktikum pemeriksaan angka kuman aerob dan bakteri (total plate

count) dengan sampel tempe bertujuan untuk menghitung koloni pada

pengenceran media plate count agar(PCA).

Langkah pertama yang dilakukan adalah mensterilisasi alat-alat yang akan

digunakan, kemudian melakukan pengenceran sampel padat, yakni dengan

mengambil sampel secara steril sebanyak 1 gram, lalu menambahkan 9 ml

aquades, dan dihomogenkan. Selanjutnya, penuangan plate count agar ke dalam

petridish , yakni 1 cc sampel dan 15-20 cc plate count agar, diamkan hingga

membeku dan diinkubasi selama 48 jam.

Dan dari tabel 1 diatas, didapatkan jumlah koloni yang sangat banyak (tak

terhingga), hal ini dapat dilihat dari banyaknya koloni pada control, yakni lebih

dari 5 koloni, karena jumlah maksimal control 5 koloni. Dan untuk pengenceran

ke 10 -6 didapatkan hasil lebih banyak dibandingkan dengan 10 -5dan 10 -4, hal

ini sesuai dengan Tingkat pengenceran yang lebih tinggi menghasilkan jumlah

koloni yang lebih banyak (Fatmarina, 2000). Dan apabila dilakukan

pensuspensian pada pengenceran rendah, seperti 10 -1, maka mikroorganisme

menjadi sangat banyak dan sulit untuk dihitung. (Fardiaz, 1989)

Dan hasil praktikum tersebut dinyatakan galat, karena banyaknya jumlah koloni

pada control lebih dari 5 dan ketidaksterilan alat yang digunakan, serta adanya

kontaminan dari sumber lainnya, yakni udara,sampel (tempe), alumunium foil

(digunakan saat menutup erlenmeyer setelah pemanasan PCA).

Perhitungan diatas dengan asumsi bahwa satu koloni berasal dari satu sel

mikroorganisme. Sehingga pemahaman lebih lanjut pada penelitian berikutnya

tidak menyimpang dari asumsi sebelumnya, yakni koloni bakteri pada suspensipengenceran kecil lebih banyak dibandingkan suspensi pengenceran tinggi. Faktor

lingkungan yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri yang optimal diantaranya

adalah suhu, udara, pH, kelembaban. (Fatmarina, 2000)

Syarat koloni yang ditentukan untuk dihitung adalah sebagai berikut: satu

koloni dihitung 1 koloni, dua koloni yang bertumpuk dihitung 1 koloni, beberapa

koloni yang berhubungan dihitung 1 koloni, dua koloni yang berhimpitan dan

masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni, koloni yang terlalu besar (lebih besar)


8/13

Penghitungan jumlah mikroorganisme dengan cara viable count atau

disebut juga sebagai standard plate count (SPC) didasarkan pada asumsi bahwa

setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni

setelah diinkubasi dalam media biakan dan lingkungan yang sesuai. Setelah masa

inkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau

dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut. Berdasarkan hal

tersebut digunakan istilah colony forming units (CFU/ ml). Koloni yang tumbuh

berasal dari suspensi yang diperoleh menggunakan pengenceran bertingkat dari

sebuah sampel yang ingin diketahui jumlah mikrobanya. 18 dari setengah luas

cawan) tidak dihitung, koloni yang besarnya kurang dari setengah luas cawan

dihitung 1 koloni. Penghitungan jumlah mikroorganisme hidup (viable count)

adalah jumlah minimum mikroorganisme. Hal ini disebabkan koloni yang tumbuh

pada lempengan agar merupakan gambaran mikroorganisme yang didapat.

(Fardiaz, 1989).

Seperti gambar disamping perhitungan

koloninya, lihat koloni (bentuk lingkaran) yang

besar di hitung satu koloni, dan yang kecil

dihitung satu koloni, bahkan yang nampak

seperti titikpun dihitung satu koloni. Dan untuk

mempermudahkan menghitung dengan cara

manual beri titik dengan spidol pada setiap

koloni yang telah dihitung, atau buat area, lalu hitung salah satunya, dan kalikan

dengan banyaknya area tersebut.

Total Plate Count (TPC) merupakan salah satu metode yang dapat

digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam bahan pangan. Metodehitungan cawan (TPC) merupakan metode yang paling banyak digunakan dalam

analisa, karena koloni dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan

mikroskop. (Fardiaz, 1989)

Perhitungan jumlah koloni dilakukan dengan hitungan cawan

(Total Plate Counts) berdasarkan pertumbuhan dapat dilihat langsung tanpa

mikroskop (Fardiaz, 1989).


9/13

Metode hitungan cawan cukup sensitif untuk menentukan jumlah

mikroorganisme yang masih hidup dengan menghitung beberapa jenis

mikroorgaisme sekaligus mengisolasi dan mengidentifikasi yang berasal dari

suatu mikroorganisme yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik.

Dengan metode TPC jumlah koloni dalam contoh dihitung sebagai berikut :

Koloni per ml atau per gram = jumlah koloni per cawan x 1/FP (faktor

pengenceran) Selanjutnya cawan petri yang dipilih dan dihitung mengandung

jumlah koloni antara 30-300 (Permana dan Kusmiati, 2007).

Pengkuran pertumbuhan mikroorganisme dilakukan dengan metoda

cawan. Prinsip dari metode ini adalah sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan

pada medium sedemikian sehingga mikroba tersebut akan berkembang biak dan

membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung tanpa menggunakan

mikroskop. Jumlah koloni mikroorganisme dihitung berdasarkan Standard Plate

Count (SPC). Metode ini cukup sensitif karena hanya sel mikroorganisme yang

hidup yang dapat dihitung. Selain itu beberapa sel yang berdekatan dapat dihitung

sekaligus sebagai suatu koloni (Hanafi, et al., 2006)

Metode hitungan cawan merupakan metode yang paling sensitif untuk

menentukan jasad renik, dengan prinsip jika sel jasad renik yang masih hidup

ditumbuhkan pada medium agar maka sel jasad renik tersebut akan berkembang

biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung tanpa

menggunakan mikroskop (Fardiaz, 1992).

Keuntungan menggunakan metode hitungan cawan dalam menghitung

jumlah koloni pada medium agar adalah sebagai berikut:

Hanya sel yang masih hidup yang dihitung

Beberapa jenis jasad renik dapat dihitung secara langsung Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi jasad renik karena koloni

yang terbentuk mungkin berasal dari suatu jasad renik yang mempunyai

penampakan pertumbuhan spesifik.

Selain keuntungan yang dimiliki seperti tersebut di atas, metode hitungan cawan

juga memiliki kelemahan seperti yang termuat dalam (Dwidjoseputro, 1989)

yaitu:


10/13

Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya karena

beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni

Medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai

yang berbeda.

Jasad renik yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat

dan membentuk koloni yang nampak dan jelas, tidak menyebar.

Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga

pertumbuhan koloni dapat dihitung.

PCA Media Mikrobiology Plate Count Agar direkomendasikan untuk

menghitung angka lempeng total ( plate count ) mikroorganisme dalam makanan,

air bersih dan air limbah.

Plate Count Agar dengan Tween 80 dan Lecithin (Standar Methods Agar

with Tween 80 and Lecithin ) dapat digunakan untuk menganalisa kualitas

kebersihan dari permukaan. Plate Count Agar Spesial dapat digunakan untuk

menghitung perkiraan jumlah bakteri pada raw milk dan produk susu lainnya,

sesuai Netherlands Dairy Association. Plate Count Agar dengan BCP digunakan

untuk menganalisa kultur Lactobacillus pada susu, yoghurt dan sour creams.

(Anonim 1, 2009).

Sampel yang digunakan pada saat praktikum ini adalah tempe, jamur

tempe adalah salah satu mikroorganisme semi anaerob dan organism saprofit. Hal

ini dapat dilihat akan kebutuhan jamur tempe akan udaradan summber

makanannya. Jamur tempe merupakan organism yang membutuhkan sedikit sekali

udara dan sumber makanan yang berasal dari jasad mati, oleh karena itu jamur

tempe dapat diissolasi pada media PCA (Plate Count Agar).

Jamur tempe (Rhizopus oryzae) termasuk ke dalam genus Rhizopus dan

Famili Mucoraceae. Pengamatan yang dilakukan dengan menggunakan

mikroskop dapat dilihat bahwa misellium dari jamur tempe ini tidak bersekat.

Misellium yang tidak bersekat merupakan cirri utama dari family Mucoraceae.

Jamur tempe ini terdiri dari beberapa bagian utama yaitu misellium atau yang

sering disebut stolon jamur, sporongiophore,sporangium dan spora yang menjadi

organ perkembangbiakannya. (Jordy, 2011).


11/13

BAB IV

KESIMPULAN

Dari hasil praktikum di atas dapat disimpulkan bahwa:

Hasil praktikum yang didapatkan galat, karena jumlah koloni pada control

lebih dari 5.

Faktor penyebab galat adalah ketidaksterilan alat yang digunakan, adanya

kontaminan yang berasal dari udara, dan alumunium foil yang digunakan

untuk menutup Erlenmeyer saat praktikum.

Penghitungan total plate count di mulai dari 10 -4, karena pengsuspensian

rendah bakteri yang didapat sangat banyak dan sulit di hitung.


12/13

DAFTAR PUSTAKA

Anonim 1. 2009. Terdapat di http://bhajaboounu.blogspot.com/2013. Diakses

tanggal 23 November 2013.

Dwidjoseputro, D.1989.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang: Djambatan.

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. Penerbit PT. Gramedia

Pustaka Utama, Jakarta.

Fatmarina, 2000. Diakses dihttp://rizqanjb.blogspot.com.Pada tanggal 23

November 2013.

Hanafi, et al., 2006. Di akses dihttp://digilib.unimus.ac.id.Pada tanggal 24

November 2013

Jordy, 2011. Diakses dihttp://jordyanalcaff.blogspot.com.Pada tanggal 23

November 2013.

Permana dan Kusmiati, 2007. Di akses dihttp://repository.usu.ac.id.Pada tanggal

24 November 2013.
http://bhajaboounu.blogspot.com/2013http://bhajaboounu.blogspot.com/2013http://rizqanjb.blogspot.com/http://digilib.unimus.ac.id/http://jordyanalcaff.blogspot.com/http://repository.usu.ac.id/http://repository.usu.ac.id/http://jordyanalcaff.blogspot.com/http://digilib.unimus.ac.id/http://rizqanjb.blogspot.com/http://bhajaboounu.blogspot.com/2013


13/13

LAMPIRAN GAMBAR

Gb. 1 Pemanasan PCA Gb. 2 Pendinginan PCA

Gb. 3 Hasil Koloni 10-4

Gb. 4 Hasil Koloni 10-5

Gb.5 Hasil Koloni 10-6

Gb. 6 Hasil Koloni Control Plate

Laporan Praktikum Mikrobiologi Pangan III

Documents

Transcript of Laporan Praktikum Mikrobiologi Pangan III