PEMILIHAN MEDIUM KULTUR

DI LABORATORIUM

A.Milka.B, Rahmafitria, Irda Handayani, Nurhayana

Sennang

I. PENDAHULUAN

oBiakan → diagnosis pasti.

o Pembiakan → proses organisme >> , lingkungan

II. JENIS MEDIUM KULTUR

Medium cair, padatB’dasarkan kandungan nutrisi : defined medium medium kompleks medium umum medium penyubur medium selektif medium diferensial medium khusus

Kategori medium pertumbuhan: Medium Non Selektif Medium Selektif Medium Differensial

Faktor–faktor yang mempengaruhi pertumbuhan

mikroorganisme :1. Faktor Fisik :

t0, pH, tekanan osmotik, cahaya / radiasi.

2. Faktor Kimia : O2 ,trace elements & faktor-faktor

pertumbuhan organik (nutrisi)

Berdasarkan kebutuhan O2, bakteri dapatdibagi dalam 5 kategori :

1. Aerob obligat 2. Anaerob obligat3. Anaerob fakultatif4. Aerob mikroaerofilik 5. Anaerob aerotoleran

Syarat medium pertumbuhan :

1. t 0

2. CO2

3. Lama inkubasi

1. BHIB

A. Pra AnalitikAlat : a. Aquades c. Autoclaveb. Tabung steril d. pH meter.

Bahan : Nutrient substrat 27,5 g, glukosa 2,0 g,

sodium chloride 5,0 g, disodium hydrops phosphate 2,5 g.

B. Analitik Cara : ҉ 37 g bahan + 1 L Aq→tabung steril - 5 cc

→autoclave 1210C,15’ ҉ Simpan pada suhu 250C dengan pH 7,4

±0,2

C. Pasca Analitik kekeruhan → pertumbuhan ≠ perubahan → tidak ada pertumbuhan

2. BLOOD AGAR

A. Pra AnalitikAlat : Cawan petri steril AutoclaveBahan : Campuran bahan : Ekstrat hati 10 g, triptose

10 g, NaCl 5 g, agar 15 g, pH 6,9. Darah domba segar

B. Analitik Bahan +1 L Aq → autoclave ,1150C ,15 ‘→dinginkan 45’- 500C→ + 4 – 8 % darah domba →cawan petri steril 20 cc → lemari es

C. Pasca Analitik ∂ hemolisis hemolisis ᵝ hemolisis

3. MAC CONKEY AGAR

A. Pra AnalitikAlat : Aquades Cawan petri steril AutoclaveBahan : Substrat MC agar : pepton (casein 17 g), bile

salt mixture 1,5 g, pepton (daging 3 g), neutral red 0,03 g, sodium chloride 5 g, kristal violet 0,001 g, laktose 19 g, dan agar 13,5 g.

B. AnalitikCara : Bahan + 1 L Aq →autoclave1210C – 15’ →dinginkan → cawan petri → lemari es

C.Pasca AnalitikKoloni (+) → bakteri gram ( - )

(-) → mungkin bakteri gram (+)

III. JENIS SPESIMEN

1. Darah2. Urin

Darah * BHIB- 24 j, 370 MC, NA – 24 j, 370 **

P. GramB. Gram (+)

B. Gram (-)

Tes Biokimia24 j, 370

Interpretasi Akhir

Tes Sensitivitas

24 j, 370

Tes Katalase,

MSA

tumbuh

ALGORITME ISOLASI & IDENTIFIKASI BAKTERI :

IV. PENGENDALIAN MUTU ORGANISME

1. Sumber strain kontrol pada bakteri

American Type Culture Collection (ATCCTM)

2. Pemeliharaan / stok kultur beku

Stok kultur komersial

~ petunjuk - pertumbuhan & pemeliharaan 

1

2

3

Persiapan stok kultur beku :

Susun kembaliInkubasi 18-

24j ~ t0Inokulasi (TSA,BA)

Kemurnian,morfologi

Tes BiokimiaPindahkan

Suspensikan 50-100 mlMedium cryoprotective

~ 0,5 McFarland

Simpan -500C 1 thn

3. Pengerjaan kultur Inokulasi → inkubasi Simpan Kemurnian &morfologi koloni.

4.Prosedur tes Inokulasi Inkubasi Suspensi 3-5 koloni → isolasi TSB Inkubasi 4-5 jam ~ 0,5 McFarland

Terima kasih

T E R I M A

K A S I H

Mc Farland Perkiraan ∑ sel ( x 10 6)

0,5 1,5

1,0 3,0

2,0 6,0

3,0 9,0

4,0 12,0

Pewarnaan Gram

Tes Biokimia

TSIA -, + H2SIndol +, -

MR +,VP-

Sitrat +,-

Urease -

Gluk +, -; gas +

Thioglycollate Broth dgn rezasurin

MALDI TOF BACT ALERT (+)

1.BIOLOGICAL SAFETY CABINET2. INKUBATOR , 3. PH INDIKATOR

1 2 3