Download - Laporan mikrobiologi p2 Fix

Transcript

LAPORAN AKHIRPRAKTIKUM MIKROBIOLOGI-PARASITOLOGIIDENTIFIKASI MIKROBA DENGAN TEKNIK PENGECATAN

Disusun oleh : C-121. Ermira Zenifa126132151. Pandan Panggalih126132161. Diah Intan Pertiwi126132171. Ipnu Setiyo Widarno12613219

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI-PARASITOLOGIPROGRAM STUDI FARMASIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS ISLAM INDONESIAYOGYAKARTA 2014BAB I

I. TUJUAN1. Mahasiswa mampu memahami teknik pengecatan gram.2. Mampu melakukan pengamatan bakteri secara mikroskopis dengan melihat warna, bentuk dan susunan bakteri.3. Mampu memahami uji biokimiawi terhadap bakteri.4. Mampu melakukan pengamatan aktivitas metabolism melalui uji biokimiawi.

II. DASAR TEORIPengenalan bentuk mikroba (morfologi), kecuali mikroalgae harus dilakukan pewarnaan terlebih dahulu agar dapat diamati dengan jelas.Pada umumnya bakteri bersifat tembus cahaya, hal ini disebabkan karena banyak bakteri yang tidak mempunyai zat warna.Tujuan dari pewarnaan adalah untuk mempermudah pengamatan bentuk sel bakteri, memperluas ukuran jazad, mengamati struktur dalam dan luar sel bakteri, dan melihat reaksi jazad terhadap pewarna yang diberikan sehingga sifat fisik atau kimia jazad dapat diketahui (Hadiutomo. 1990).Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian Gram pada tahun 1884.Dengan metode ini.Bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua yatu, bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.Yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut.Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp (Waluyo, 2004).Zat warna yang digunakan dalam pewarnaan bersifat basa dan asam.Pada zat warna basa bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut kromofor dan memiliki muatan positif. Sebaliknya, pada zat warna asam bagian yang berperan memberikan zat warna mempunyai muatan negatif, zat warna basa lebih banyak digunakan karena muatan negatif banyak ditemukan di dinding sel, membran sel dan sitoplasma, sewaktu proses pewarnaan muatan positif pada zat warna basa akan berkaitan dengan muatan negatif dalam sel, sehingga mikroorganisme lebih jelas terlihat (Dwidjoseputro.1998).Pada pewarnaan sederhana hanya digunakan satu macam zat warna untuk meningkatkan kontras antara mikroorganisme dan sekelilingnya.Lazim, prosedur pewarnaan ini menggunakan zat warna basa seperti crystal violet, biru metilen, karbol fuchsin basa, safranin atau hijau malakit. Kadang kala digunakan zat warna negatif untuk pewarnaan sederhana : zat warna asam yang sering digunakan adalah nigrosin dan merah kongo. Prosedur Pewarnaan sederhana mudah dan cepat, sehingga pewarnaan ini sering digunakan untuk melihat bentuk ukuran dan penataan pada mikoorganisme bakteri pada bakteri dikenal bentu yang bulat (coccus), batang (basil), dan spiral.Dengan pewarnaan sederhana dapat juga terlihat penataan bakteri. Pada coccus dapat terlihat pewarnaan seperti rantai (stertococcus), buah anggur ( staphylococcus), pasangan (diplococcus), bentuk kubus yang terdiri dari 4 atau 8 (saranae) (Lay.1994).Uji biokimia merupakan salah satu uji yang digunakan untuk mengetahui aktivitas metabolic dari suatu bakteri. Beberapa uji biokimia yang dilakukan adalah :a. Uji oksidasi fermentasiUji oksidatif- fermantatif digunakan untuk menguji metabolisme bakterioksidatif atau fermentatif. Proses oksidasi terjadi didalam tabung oleh organismeaerob dan proses fermentasi oleh organisme anaerob. Proses fermentasi glukosa akan diubah menjadi glukosa G-Phospat yang kemudian dirombak menjadi asam piruvat dan oksidase akan merubah glukosa menjadi asam piruvat

b. Uji motilitasMotilitas bakteri adalah suatu gerakan bakteri yang disebabkan adanya gerak aktif dan pasif.Gerak aktif adalah gerakan bakteri yang disebabkan karena bakteri memiliki flagel.Gerak pasif disebabkan karena faktor dari luar (gerak brown).Gerak brown adalah suatu gerakan yang dapat menggetarkan partikel-partikel secara acak atau terarah karena terus-menerus terkena pukulan molekul-molekul kecil yang tak terlihat yang terdapat dalam cairan.Motilitas dapat diamati dengan baik pada biakan yang masih baru. Pada biakan yang sudah lama,bakteri sudah mati, sehingga sangat sukar untuk mendapatkan sel yang motil, selain itu produksi asam dan produk yang bersifat racun dapat menyebabkan hilangnya motalitas sel bakteri pada biakan (Volk, 1988).Menurut Taringan (1988) beberapa bakteri dapat melakukan gerakan meluncur yang sangat mulus yang hanya terjadi kalau persentuhan dengan benda padat.Kebanyakan bakteri yang motil dapat mendekati atau menjauhi berbagai senyawa kimia yang disebut kemotaksis.

c. Uji katalaseUji katalase digunakan untuk mengetahui aktivitas katalase pada bakteri yang diuji. Kebanyakan bakteri memproduksi enzim katalase yang dapat memecah H2O2 menjadi H2O dan O2. Enzim katalase diduga penting untuk pertumbuhan aerobik karena H2O2 yang dibentuk dengan pertolongan berbagai enzim pernafasan bersifat racun terhadap sel mikroba.

BAB II

I. ALAT DAN BAHANA. Pengecatan GramAlat :1. Bunsen2. Gelas obyek3. Mikroskop4. Ose bulat dan runcing5. Pipet tetes

Bahan :1. Cat gram A, B, C dan D2. Koloni bakteri gram negatif3. Koloni bakteri gram positif4. Koloni bakteri sampel (dari praktikum sebelumnya)5. Larutan NaCl

B. Uji BiokimiaAlat :1. Autoclaf2. Bunsen3. Gelas beaker4. Labu Erlenmeyer5. Labu ukur6. LAF7. Ose bulat dan runcing8. Oven9. Tabung reaksi

Bahan :1. Aquades2. Koloni bakteri sampel (dari praktikum sebelumnya)3. Media KIA, LIA, Simon Citrat, SIM, Mc. Conkey, Blood Agar

II. CARA KERJAA. Pengecatan GramPembuatan Preparat Untuk Pengecatan

Diambil 3 gelas obyek yang bersih dan steril.

Dipanaskan diatas Bunsen.

Disterilkan ose sampai pijar dan diambil koloni (bakteri diambil dari P1, control (+) dan control (-).(jika bakteri berbentuk slant, maka dilarutkan dengan NaCl secukupnya)

Dikeringkan preparat pada suhu ruangan.

Melakukan Pengecatan Gram

Preparat yang sudah disiapkan, ditetesi dengan cat gram A, diamkan selama 1-3 menit.Kemudian dicuci dengan aliran air.Tunggu hingga agak kering.

Ditetesi dengan cat gram B, diamkan selama 1 menit.Kemudian dicuci dengan aliran air.Tunggu hingga agak kering.

Ditetesi dengan cat gram C, diamkan selama 30 detik.Kemudian dicuci dengan aliran air.Tunggu hingga agak kering.

Ditetesi dengan cat gram D, diamkan selama 1-2 menit.Kemudian dicuci dengan aliran air.Tunggu hingga agak kering.

Setelah kering diamati dibawah mikroskop.

B. Uji Biokimia

Disiapkan mikroba dari praktikum sebelumnya.

Disiapkan media yang akan digunakan (LIA, KIA, SIM, Cimmon Citrat, Mc.Conkey dan Blood Agar)

Disterilkan ose dengan cara dipanaskan dengan Bunsen hingga membara.

Diambil koloni dari sampel praktikum sebelumnya.

KIA Digoreskan dan ditusukkan ose berisi mikroba ke media.LIA Digoreskan dan ditusukkan ose berisi mikroba ke media.Cimmon Citrat Digores dan ditusukkan ose berisi mikroba ke media.SIM Ditusukkan ose berisi mikroba ke media.Mc. Conkey Digoreskan ose berisi mikroba ke media (quadrant streak)Blood Agar Digoreskan ose berisi mikroba ke media (quadrant streak)

Diinkubasi 18-24 jam didalam oven.Kemudian diamati.

BAB III

I. DATA DAN HASILHasil Mikroskopik Pengecatan GramSampel

Setelah dilakukan uji mikroskopik, dapat dilihat bahwa bakteri yang terdapat pada sampel adalah bakteri gram negatif. Karena hasil menunjukkan bahwa bakteri berwarna merah ketika telah dilakukan pengecatan.

Gram Positif

Setelah dilakukan uji mikroskopik, dapat dilihat bahwa pengecatan bakteri gram positif gagal, karena seharusnya bakteri gram positif setelah dilakukan pengecatan berwarna biru/ ungu, namun ini tetap berwarna merah. Dimungkinkan karena ketika ditetesi cat gram C (berisi aseton) terlalu banyak dan didiamkan terlalu lama, sehingga menghapus fungsi pewarnaan dari Kristal violet. Ataupun karena penambahan cat gram D (berisi safranin) terlalu banyak dan didiamkan terlalu lama, sehingga menyebabkan bakteri menyerap warna merah dari safranin.

Gram Negatif

Setelah dilakukan uji mikroskopik, dapat dilihat bahwa bakteri gram negatif setelah dilakukan pengecatan akan berwarna merah, seperti hasil yang ada disamping.

Hasil Uji BiokimiaKIA

Dapat dilihat pada tabung medium berwana kuning kecoklatan dan hasil goresan berwarna kuning, sehingga dapat dikatakan bahwa bakteri tersebut dapat melakukan fermentasi dekstrosa dan laktosa.

LIA

Dapat dilihat pada tabung bahwa media slant berwarna ungu dan terjadi perubahan warna dibawah yaitu menjadi kuning. Dengan media tidak mengalami penghitaman.

Cimmon Citrat

Pada tabung dapat dilihat bahwa media tidak mengalami perubahan warna, yaitu warna tidak hijau dan bakteri yang ditusukkan juga tidak tumbuh pada media ini.

SIM

Pada tabung terlihat jelas bahwa bakteri sampel yang disuntikkan tumbuh ke atas. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri merupakan golongan aerob, yaitu bakteri yang tumbuh memerlukan oksigen sehingga koloni tersebut tumbuh ke atas untuk mencari-cari oksigen.Pada pengujian menggunakan indol belum dilakukan sehingga belum dapat diketahui apakah bakteri sampel mampu memecah indol dari triptopan atau tidak.

Mc. Conkey

Pada cawan petri dapat dilihat bahwa pada media tidak dapat menumbuhkan bakteri dan warna media berubah dari merah pekat menjadi pink jernih.

Blood Agar

Pada hasil dapat dilihat bahwa pada media tumbuh bakteri. Sehingga disimpulkan bahwa bakteri tersebut dapat menhemolisa darah.

Tabel DataNoNama SpesiesJenis UjiHasil UjiKeterangan

1SampelKIADapat memfer mentasikan dekstrosa dan laktosa.Slant dan goresan berwarna kuning

2SampelLIADapat memfermentasikan dekstrosa dan laktosa.Media berubah warna menjadi ungu

3SampelSIM/MIOBakteri aerobKoloni tumbuh ke atas untuk mencari oksigen

4SampelMc. ConkeyBukan merupakan bakteri gram negatifWarna media berubah menjadi pink namun tidak ditumbuhi bakteri

5SampelSimmon CitratMerupakan bakteri gram negatifTidak ada pertumbuhan bakteri dan perubahan warna

6SampelBlood AgarBakteri dapet menghemolisis darah dengan tipe B-hemolisisTumbuh bakteri dengan warna disekitarnya tetap

II. PERHITUNGAN MEDIAMedia KIAKandungan media adalah 55 gram dalam 1 literDibutuhkan 3 mL setiap kelompokUntuk 12 kelompok = 3 mL x 12 = 36 mLDibuat 40 mL untuk bahan yang menguap saat di oven = x = 2.2 gram

Media LIAKandungan media adalah 32 gram dalam 1 literDibutuhkan 3 mL setiap kelompokUntuk 12 kelompok = 3 mL x 12 = 36 mLDibuat 60 mL untuk bahan yang menguap saat di oven = = 1.92 gram

Media Simon CitratKandungan media adalah 23 gram dalam 1 literDibutuhkan 3 mL setiap kelompokUntuk 12 kelompok = 3 mL x 12 = 36 mLDibuat 40 mL untuk bahan yang menguap saat di oven = = 0.92 mL

Media SIMKandungan media adalah 30 gram dalam 1 literDibutuhkan 3 mL setiap kelompokUntuk 12 kelompok = 3 mL x 12 = 36 mLDibuat 45 mL untuk bahan yang menguap saat di oven = = 1.35 mL

Media Mc. ConkeyKandungan media adalah 50 gram dalam 1 literDibutuhkan 20 mL setiap kelompokUntuk 12 kelompok = 20 mL x 12 = 240 mLDibuat 260 mL untuk bahan yang menguap saat di oven = = 13 gram

BAB IVPEMBAHASAN

Salah satu tujuan dari praktikum adalah dapat mengidentifikasi bakteri baik gram positif maupun negatif dengan menggunakan uji pengecatan bakteri dan uji biokimia.Bakteri gram positif yaitu bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pengecatan gram.Sedangkan bakteri gram negatif tidak mempertahankan zat warna metil ungu. Perbedaan dari kedua bakteri yaitu :1. Berdasarkan dinding selPositif: memiliki dinding sel (peptidoglikan) yang lebih tebal, sehingga dapat mempertahankan zat warna metil ungu.Negatif: memiliki dinding sel (peptidoglikan) yang tipis, sehingga tidak dapat mempertahankan zat warna metil ungu.2. Berdasarkan bentuk selPositif: kebanyakan dari bakteri ini berbentuk bulat, batang atau filament.Negatif: sebagian besar bakteri ini mempunyai bentuk bulat, oval, batang lurus atau koma yang dilindungi oleh kapsul.3. Berdasarkan reproduksiPositif: reproduksi yang terjadi pada bakteri ini adalah dengan pembelahan biner.Negatif: reproduksi yang dilakukan bakteri jenis ini yaitu pembelahan biner, namun kadang juga dengan pertunasan.4. Berdasarkan metabolismPositif: metabolism dari bakteri ini yaitu kemoorganoheterotrof.Negatif: metabolism yang terjadi bisa fototrof, kemolitoautotrof dan kemoorganoheterotrof.5. Berdasarkan motilitasPositif: kebanyakan bakteri ini adalah non motil, namun apabila memiliki motil maka tipe flagel nya yaitu peritrikus.Negatif: ada bakteri yang non motil maupun motil, bentuk flagelnya bervariasi, ada yang berupa polar, iopotrikus dan peritrikus.Selain itu, perbedaan sifat dari bakteri gram positif dan negatif adalah :1. Resistensi terhadap alkali (1% KOH), bakteri gram positif tidak dapat larut sedangkan gram negatif larut.2. Toksin yang terbentuk pada gram positif adalah eksotoksin sedangkan gram negatif yang terbentuk adalah endotoksin.3. Kepekaan terhadap iodium dan penisilin, bakteri gram positif lebih peka dari gram negatif.4. Sifat tahan asam bakteri, pada bakteri gram positif ada yang tahan asam, sedangkan pada bakteri gram negatif tidak ada yang tahan asam.Bagian yang membedakan gram positif dan gram negatif yaitu peptidoglikan pada dinding sel. Peptidoglikan pada gram positif lebih tebal dibanding gram negatif. Terlihat pada proses pengecatan gram, pada gram positif setelah penambahan alkohol warna tetap ungu. Sedangkan pada gram negatif, hasil akhir berubah warna menjadi merah muda karena pada gram negatif, cat Gram A akan keluar dari dinding sel atau luntur saat diberikan cat Gram C (decolorizer) sehingga akan digantikan dengan cat Gram D yang berwarna merah muda.Pada cat gram D yang digunakan adalah cat yang berisi safranin. Apabila safranin digantikan dengan methylen blue, maka pewarnaan yang awalnya bertujuan untuk menganalisa perbedaan berdasarkan perbedaan warna tidak akan berfungsi efektif karena metylen blue memberi warna yang mirip dengan kristal violet. Pewarnaan ini sederhana, mudah dan cepat sehingga pewarnaaan ini sering digunakan untuk melihat bentuk, ukuran dan penataan mikroorganisme.Pewarnaan sederhana dapat memperlihatkan penataan bakteri, misalnya seperti rantai (stretokokus) seperti buah anggur (stafilokokus), atau berbentuk seperti kubus (sarcina) (Waluyo, 2008).Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pewarnaan yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri (mikroorganisme). Cat gram yang digunakan pada pengecatan Gram meliputi kristal violet (Cat A), iodium (Cat B), alkohol (Cat C) dan safranin (Cat D). Sebelum dilakukan pengecatan, bakteri diambil dari media yang dibuat sebelumnya lalu ditempatkanpada kaca objek dan disterilkan di atas bunsen (20cm) agar steril dan untuk memperjelas struktur internal dan eksternal sel. Setelah itu ditetesi dengan larutankristal violet yang berfungsi sebagai zat warnaprimer (utama) yang akan memberi warna ungu pada mikroorganisme target.Kristal violet bersifat basa sehingga mampu berikatan dengan sel mikroorganisme yang bersifat asam , dengan begitu sel mikroorganisme yang transparan akan terlihat berwarna (ungu). Didiamkan selama 1menit, karena pada waktu 1 menit diasumsikan dinding sel bakteri sudah mengunci kristal ungu. Setelah itu dibilas dengan aquadest hal ini bertujuan agarkristal ungu yang tidak berikatan dengan bakteri dapat luntur serta untuk memperjelas pengamatan. Setelah dibilas, ditetesi iodium yang berfungsi memfiksasi pewarna primer yang diserap mikroorganisme target dan memperkuat pengikatan warna kristal ungu. Lalu didiamkan selama 2 menit.Perlakuan ini dilakukan karena selama waktu tersebut diasumsikan telah cukup jelas memberikan warna ungu pada bakteri.Setelah itu dibilas lagi dengan aquadest bertujuan untuk membersihkan sisa iodium pada bakteri.Kemudian dicuci dengan menggunakan alkohol 70 %, yang berfungsi untuk membilas atau melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri (mikroorganisme).Kemudian dibilas kembali dengan aquadest, hal inibertujuan untuk memperjelas pengamatan.Setelah ituditetesi denganmenggunakan safranin, Safraninberfungsi sebagai pewarna sekunder dan untuk mewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan decolorizer. Dengan kata lain, memberikan warna pada mikroorganisme non target. Setelah itu dibilas dengan aquadest bertujuan untuk membilas safranin dan untukmemperjelas pengamatan.Kemudian preparat diamati di bawah mikroskop dan didokumentasikan.(Wahyuningsih, 2008).Fungsi pengujian biokimia adalah untuk mengetahui aktivitas metabolik dari suatu bakteri.Ada beberapa macam media yang digunakan dalam uji biokimia ini yaitu KIA, LIA, Cimon Citrate, SIM, Mc. Conkey, dan Agar Blood.a. Kliger Iron Agar (KIA)Kemampuan bakteri memfermentasikan dekstrose dan laktose serta kemampuan memproduksi hydrogen sulfida adalah merupakan dasar untuk mengetahui jenis bakteritertentu dari pertumbuhannya dalam medium ini.Jika hanya dektrose yang difermentasi maka dasarnya saja yang berwarna kuning, tetapi jika dektrose maupun laktose keduanya difermentasi maka dasar dan kereng keduanya berwarna kuning.b. Lysin Iron Agar (LIA)Kemampuan suatu bakteri memproduksi lysine decarboxilase dapat diketahui dan juga H2S. Jika bakteri hanya memfermentasikan dektrose maka dasarnya akan berwarna kuning,tetapi bakteri yang memfermentasikan dekstrose serta mendekarboksilase L-lysine, maka pH akan kembali menjadi alkali sehingga terlihat medium secara keseluruhan berwarnaviolet dengan adanya indicator brom cresol purple.c. SIM mediumMedia untuk membedakan tiga parameter yaitu Reduksi Sulfur untuk membedakan bakteri enterik, uji Indol merupakan bagian dari uji IMViC untuk membedakan family Enterobacteriaceae dan uji motilitas untuk membedakan jenis bakteri secara umum. Kandungan Media SIM berisi nutrisi ( salah satunya pepton yang mengandung asam amino termasuk Triptofan), Iron, dan Natrium thiosulfat.d. Simmons Citrate AgarBakteri yang memanfaatkan sitrat sebagai sumber karbon akan menghasilkan natriumkarbonat yang bersifat alkali, sehingga dengan adanya indicator brom thymol bluemenyebabkan terjadinya warna biru. prinsipnya yaitu bakteri menggunakan sitrat sebagai sumber carbon tunggal, dengan bantuan emzim citrate permease maka bakteri akan menyebarkan citrat kedalam sel. Selain itu bakteri mengubah Amonium Dihidrogen Phosfat menjadi Amonium Hidroksida (NH3) dan amoniak yang bersifat basa. Jikauji Citrat positif maka media menjadi biru, sedangkan uji Citrat negatif maka media tidak berubah warna ( hijau ).e. Mc ConkeyMenghambat pertumbuhan bakteri gram positif yang disebabkan oleh garam empedu dan kristal violet. Bakteri gram negatif yang tumbuh dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa.Koloni dari bakteri yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu.Endapan ini disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam yang bereaksi dengan garam empedu. Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen, dimana golongan bakteri ini tidak memperlihatkan perubahan pada media, ini berarti bahwa warna koloninya sama dengan warna media.f. Blood agarMedia ini untuk membedakan antara bakteri yang dapat membedakan antara bakteri yang dapat menghemolysa darah dengan yang tidak dapat (Lay, 1994).Berikut merupakan tabel hasil uji sampel yang digunakan serta literatur E.coli :ParameterSampelLiteratur

KIAPositifPositif

LIABerwarna unguBerwarna ungu

SIMH2S (-), Indole (+), Motility (+)

Mc ConkeyTidak tumbuh koloni, namun media menjadi merah mudaTumbuh koloni, media menjadi merah muda

Simmon SitratTidak tumbuh bakteri dan tidak berubah warnaTidak tumbuh, tidak berubah warna

Agar Darah

Berdasarka hasil uji biokimia yang dilakukan, dan setelah dibandingkan dengan literatur yang dalam hal ini adalah E.coli, maka dapat disimpulkan bahwa sampel bakteri yang digunakan memiliki karakteristik yang kurang mirip dengan E. coli, seperti yang terlihat hasil pada media Mc. Conkey, bahwa E. coli dapat tumbuh di media tersebut. Namun, pada percobaan bakteri tidak tumbuh pada media Mc. Conkey.BAB VKESIMPULAN

1. Pengecatan bakteri dilakukan dengan pemberian cat A, B, C dan D secara berurutan dan setelah itu dilakukan pengamatan dengan menggunakan mikroskop untuk melihat warna apa yang terbentuk.2. Dari sampel, didapatkan hasil mikroskop bakteri berwarna merah, yang merupakan bakteri gram negative, sedangkan bakteri gram positif berwarna biru atau ungu.3. Uji biokimia terhadap bakteri dilakukan untuk mengetahui aktivitas metabolic yang terjadi pada bakteri tersebut.4. Pada media KIA dan LIA menunjukkan bahwa bakteri dapat memfermentasi dekstrosa dan laktosa, sedangkan pada media SIM menunjukkan bahwa bakteri termasuk dalam bakteri aerob atau anaerob, media Mc. Conkey untuk mengetahui isolasi dan diferensiasi bakteri gram negative, media SIM untuk mengetahui bahwa bakteri memproduksi sulfide, formasi indol dan motilitas mikroorganisme dan blood agar untuk mengetahui bakteri yang dapat menghemolisa darah.

BAB VIDAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: DjambatanHadioetomo, Ratna Siri.1990.Mikrobiologi dalam Praktek. Jakarta: GramediaLay, Bibiana W.,1994, Analisis mikroba di laboratorium, PT. Raja Grafindo, Jakarta hal. 13Volk, W. A. dan Wheeler, M. F. 1993.Mikrobiologi Dasar Edisi Kelima. Jakarta: ErlanggaWahyuningsih .2008 .Pengecatan Gram . Universitas Jenderal Soedirman ,Fakultas Pertanian : PurwokertoWaluyo, Lud. 2008. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. Universitas Muhamadiah Malang: Malang