7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
1/21
REPLIKASI DAN
POLYMERASE CHAIN REACTION(PCR)
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
2/21
Central Dogma of Molecular Biology
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
3/21
Replikasi
Replikasi adalah penggandaan DNA
Sintesis 2 molekul DNA dari 1molekul DNA
Konsep pasangan basa
Arah 5 ke 3 pada untai yang
disintesis Dikatalisis oleh DNA polimerase
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
4/21
Mulai pada origin of replication (ori) Protein DnaA mengenali pertama kali
Protein pengikat DNA untai tunggal Helikase (pembuka untai) Girase (merelakskan super kumparan) Primase (RNA polimerase) DNA polimerase DNA ligase (menyambungkan fragmen
Okazaki)
Komponen komponen Replikasi DNA
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
5/21
REPLIKASI DNA
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
6/21
Gap filling & DNA repairPol-
Replikasi pada mitokondriaPol-
Replikasi leading strandPol-
Gap filling & DNA repairPol-
Replikasi lagging strandPol-
Eukariot
ReplikasiPol III
Gap filling & DNA repairPol II
Gap filling & DNA repairPol I
FungsiProkariot
DNA POLIMERASE
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
7/21
PCR :
Polymerase Chain Reaction(Karry Mulis, 1985)
Perbanyakan DNAin vitro, hanya ditabung reaksi,tidak di dalam sel
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
8/21
Dasar : Struktur DNA
* Ikatan kovalen antara satu nucleosida dan yang lain
*Ikatan hidrogen antara kedua buah strand
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
9/21
PCR
Perbanyakan karena adanya pembentukancopy DNA
Komponen yang diperlukan:
* cetakan DNA
* oligonukleotida pendek (primer)
* DNA polimerase & buffer
* dNTP (dATP, dTTP, dCTP dan dGTP)
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
10/21
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
11/21
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
12/21
Typical PCR Cycles
94 oC
55 oC
72 oC
Cycle 1 Cycle 2 Cycle 3
T
Time (seconds)
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
13/21
PERBANYAKAN DNA:
EKSPONENSIAL
2
4
8
16
220
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
14/21
PCR?
* DNA Polymerase :
enzim termostabil :Taq Polymerase(Thermus aquaticus)
* Tidak perlu penambahan enzim di setiap siklusnya
* Enzym tetap bekerja setelah proses denaturasi
(94oC)Dalam 1mesin saja
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
15/21
Tahap PCR
* siapkan PCR di dalam tabungreaksi: template DNA, primers, TaqDNA polymerase, dNTP
* reaksi PCRdalam mesin
* perancangan primer
0.5 kb
deteksi
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
16/21
PCR
GEN TARGETP1
P2
PRODUK PCR: 490 pb
TARGET HARUS SPESIFIK PATOGEN
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
17/21
PCR
product
DETEKSI PRODUK PCR
1400 pb
500 pb
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
18/21
DETEKSIMYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
FRAGMEN TARGET IS6110, BERSALINAN TINGGI
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
19/21
DETEKSICHLAMYDIA TRACHOMATIS
Keterangan :
1. Standar Marker DNA ( 1,0 ; 0,75; 0,5 ; 0,3 ; 0,15 ; 0,05 KB)
2. Kontrol Negatif Chlamydiatrachomatis
3. Kontrol Positif Chlamydiatrachomatis (0,281 KB)
4. Pasien Positif dari Bahan UsapVagina
5. Pasien Positif dari Bahan Darah
6. Pasien Positif dari Bahan Usap
MataLaboratorium Klinik Utama PRAMITA
Cabang Bandung
GEN MAJOR OUTER MEMBRANE PROTEIN = MOMP
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
20/21
DETEKSIMYCOPLASMA PNEUMONIAE
FRAGMEN DNA SPESIFIK M. pneumoniae
7/26/2019 REPLIKASI DAN PCR.pdf
21/21
DETEKSIVIRUS HEPATITIS B
GEN PENGKODE HBsAg
Top Related