Post on 06-Jul-2018
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
1/37
1. PENDAHULUAN
1.1 Tinjauan Pustaka
Pertumbuhan mikroba hanya dimungkinkan apabila kondisi fisik dan kimiawi
lingkungannya sesuai. ondisi fisik !ontohnya suhu dan struktur bahan. "edangkan
kondisi kimiawi untuk pertumbuhan ditentukan oleh komponen yang menyusun
medium pertumbuhan seperti air# sumber karbon# sumber energi# sumber nitrogen#
mineral# faktor pertumbuhan# maupun konsentrasi ion hidrogen $pH%. &lora mikroba di
lingkungan mana sa'a pada umumnya terdapat dalam populasi !ampuran. (ikroba amat
'arang ditemukan sebagai spesies tunggal di alam. Untuk men!irikan dan
mengidentifikasi mikroorganisme harus dilakukan dengan !ara memisahkan suatu
spesies mikroorganisme tertentu dari mikroorganisme lain# lalu ditumbuhkan men'adi
biakan murni. )iakan murni adalah biakan yang sel*selnya berasal dari pembelahan satu
sel tunggal $Hadioetomo# 1++,%.
-solasi adalah suatu !ara untuk memisahkan satu mikrobia dari mikrobia lainnya yang
bertu'uan untuk mendapatkan spesies tunggal dengan sifat*sifat yang diinginkan. Untuk
mengetahui 'enis mikrobia yang hidup dalam bahan pangan dapat dilakukan isolasi
mikrobia dengan !ara menggoreskan suspensi !ampuran sel pada suatu media padat di
dalam !awan petri kemudian menginkubasikannya# sehingga setiap sel akan tumbuh
membentuk koloni dan memudahkan untuk memisahkannya $appu!!ino / "herman#
1+0,%. -solasi merupakan metode untuk memisahkan mikroba yang ada pada media
men'adi sel indiidu yang dipersiapkan untuk mendapatkan spesies tunggal yang
diinginkan $Atlas# 1+02%.
(engisolasi dan mengidentifikasi suatu 'enis mikroorganisme dari suatu spesimen
tertentu merupakan masalah praktis dalam praktek teknis mikrobiologi. Dalam
pengertian mikrobiologi se!ara umum# mengisolasi artinya memisahkan suatu spesies
mikroorganisme tertentu dari organisme lain yang umum di'umpai dalam habitatnya#
lalu ditumbuhkan men'adi biakan murni. )iakan murni ialah biakan yang sel*selnya
berasal dari pembelahan satu sel tunggal. Pengisolasian untuk mendapatkan biakan
murni ini diperlukan# karena semua metode mikrobiologis yang digunakan untuk
1
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
2/37
3
menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme# termasuk penelaahan !iri*!iri kultural#
morfologis# fisiologis# maupun serologis# memerlukan suatu populasi yang terdiri dari
satu ma!am mikroorganisme sa'a $Hadioetomo# 1++,%.
Prinsip dasar dari isolasi yaitu mikrobia yang berbeda sifat genetiknya akan membentuk
koloni dengan karakter yang berbeda*beda pula# meliputi ukuran# bentuk# warna#
tekstur# bentuk koloni# permukaan# dan eleasi $4an!leae# 1++1%. (ikrobia yang
berbeda sifat genetiknya akan membentuk koloni dengan sifat yang berbeda. "ifat*sifat
tersebut antara lain bentuk# ukuran# warna# tekstur# permukaan dan beberapa sifat lain
yang tampak $Lay# 1++2%.
(ikrobia yang diisolasi dapat berupa biakan murni atau populasi !ampuran. )ila
identifikasi ini ter!emar# perlu dilakukan pemurnian terlebih dahulu. La5imnya#
pemurnian dilakukan dengan !ara menggoreskan suspensi mikrobia pada media agar
lempeng# agar miring# atau media !air. "ifat biakan dari suatu mikrobia tergantung dari
penampilan pada berbagai media. Dalam praktikum mikrobiologi# isolasi mikrobia
dilakukan dengan !ara menumbuhkan mikroba dari bahan yang dikehendaki yang
diisolasi pada suatu media selektif. "e!ara umum# untuk mendapatkan 'amur dapat
digunakan media PDA sedangkan untuk menumbuhkan bakteri dan khamir dapat
digunakan media NA $Lay# 1++2%.
Pemindahan kultur adalah langkah pertama dan mendasar dalam proses pengkulturan.
"alah satu hal mendasar adalah dipakai media untuk menumbuhkan mikroorganisme
tersebut# umumnya media umum yaitu NA dan N) atau PDA. Ada tiga !ara dalam
melakukan pemindahan kultur# baik di dalam tabung reaksi maupun di dalam petridish#dan digunakan peralatan yang berbeda*beda untuk masing*masing teknik pemindahan
kultur tersebut6 ada yang menggunakan ose# ada pula yang memakai 'arum dan ada pula
yang menggunakan pipet. Untuk mendapatkan mikroba yang dapat ditumbuhkan dalam
tabung reaksi maupun petridish# dapat dipakai beberapa sumber mikroba# seperti
makanan# mikroba yang telah di'adikan suspensi# ataupun koleksi mikroba yang telah
diisolasi di dalam tabung reaksi $Hadioetomo# 1++,%.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
3/37
,
ara pemindahan kultur dari sumbernya ke dalam medium yang telah disiapkan# dapat
dilakukan dengan teknik "pread Plate# yaitu dengan 7
1. (engambil kultur mikrobia dari dalam sumber mikrobia yang telah disiapkan6
dengan !ara menggoreskan atau men!elupkan ose ke dalam sumber mikrobia
tersebut se!ara aseptis.
3. 8se digoreskan di dalam tabung reaksi dari bawah ke atas se!ara 5ig 5ag se!ara
aseptis.
,. 9abung reaksi tersebut ditutup dengan kapas berlemak yang telah dibungkus dengan
kain kasa sebelumnya. "etelah selesai ose dipanaskan lagi diatas bunsen $&ardia5#
1++3%.
9u'uan mengkulturkan adalah untuk mempela'ari suatu kultur mikroorganisme tertentu.
Dalam studi atau mempela'ari mikroorganisme# maka diperlukan tiga langkah yang
meliputi enumerasi# isolasi dan determinasi atau identifikasi# dan langkah terakhir disini
merupakan !ara untuk mengetahui !iri pertumbuhan yang bisa 'uga di'umpai dalam
makanan sehari*hari. "alah satu tahap yang perlu diperhatikan adalah enumerasi atau
perhitungan 'umlah mikroorganisme baik se!ara langsung maupun tak langsung.
"ebelum digunakan untuk studi yang meliputi beberapa tahap tersebut# namun pertama*
tama harus melakukan pemindahan kultur mikroorganisme ke dalam medium yang telah
dibuat sebelumnya.$9rihendrokesowo# 1+0+%.
Pada bagian agar tempat dimulainya goresan# populasi mikrobia biasanya terlalu pekat
sehingga koloni akan berkumpul men'adi satu. Dengan semakin banyaknya goresan
atau penyebaran yang dilakukan# akan semakin sedikit sel*sel yang terbawa oleh loop#sehingga setelah inkubasi akan terbentuk koloni*koloni se!ara terpisah. "atu koloni
mungkin berasal dari satu sel atau beberapa sel tergantung dari tingkat penyebaran atau
kemurnian kultur. :oresan dan pembiakan yang diulangi beberapa kali terhadap satu
koloni yang tumbuh terpisah pada agar akan menghasilkan koloni*koloni yang berasal
dari satu sel $4olk / ;heeler# 1++,%.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
4/37
2
Pada saat mengambil mikroba dari medium padat yang telah ditumbuhi
mikroorganisme# 'arum ose tidak boleh menggores permukaan medium terlalu keras.
Hal ini penting untuk diperhatikan supaya medium tidak ikut terambil dan tidak
mengalami kesulitan pada saat menghitung 'umlah mikrobanya. 9eknik penggoresan
pada agar atau medium padat dilakukan dengan satu kali gerakan yang makin lama
goresannya makin tipis sehingga didapat hasil goresan garis yang berliku*liku $seperti
ular% dan semua permukaannya dapat ditumbuhi mikroorganisme $Lay# 1++2%.
Agar miring merupakan salah satu bentuk medium yang digunakan untuk membiakkan
mikrobia# terutama yang bersifat aerobik dan anaerobik fakultatif. iri*!iri kultur
termasuk pembentukan warna dan bentuk pertumbuhannya dapat segera diamati pada
agar miring. Agar miring dapat digunakan untuk menyimpan kultur dalam 'angka waktu
pendek di lemari es pada suhu 2o. Penggunaan agar miring adalah untuk mendapatkan
permukaan media yang lebih luas sehingga mikrobia yang tumbuh pada media ini
semakin banyak dan 'umlahnya tersebar sesuai dengan luas permukaan media agar
miring $appu!ino / "herman# 1+0,%. Digunakan NA sebagai media !air yang
dimiringkan karena NA berfungsi untuk memberikan keseimbangan kultur murni# selain
itu dapat 'uga mnghasilkan permukaan yang luas untuk isolasi dan mempermudah
dalam mempela'ari yang tumbuh. (edium padat NA dan PDA ini miring dalam tabung
reaksi yang apabila ditumbuhi oleh mikroorganisme maka mikroorganisme tersebut
akan tumbuh rata pada permukaan dan memudahkan kultur untuk dilakukan
pemindahan $"!helgel / "!hmidt# 1++2%.
(orfologi adalah ilmu yang mempela'ari bentuk# ukuran# dan susunan suatu sel. Untuk mengindentifikasikan suatu 'enis mikroorganisme dapat dilakukan berdasarkan !iri
morfologinya $Lay# 1++2%. (orfologi adalah bagian dari ilmu biologi yang mempela'ari
bentuk dan panampilan fisik lainnya dari makhluk hidup. (akhluk hidup ada yang
bersel satu yaitu disebut mikroorganisme# dan dari sekian banyak mikroorganisme
tersebut ada yang dapat tumbuh pada makanan# yaitu beberapa mikroorganisme dari
golongan bakteri# 'amur dan yeast. Disamping dapat tumbuh pada makanan sebagai
perusak namun ada pula yang tumbuh pada makanan memang disenga'a oleh manusia
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
5/37
<
untuk membuat suatu bahan makanan men'adi suatu bentuk baru# dimana proses
pengolahan makanan dengan mikroorganisme disebut fermentasi. Ada beberapa istilah
yang sebenarnya perlu didefinisikan se!ara 'elas# untuk membedakan pandangan
manusia tentang 'amur atau yeast. =amur adalah fungi yang bertunas# sedangkan yeast
adalah fungi yang tidak bertunas dan tidak bermiselium# ada istilah ragi yang sering
digunakan orang untuk menyebut suatu bentuk seperti tepung dan berwarna putih serta
tidak peduli apakah isi ragi itu 'amur atau yeast. Dalam masyarakat -ndonesia 'amur
sering disebut kapang dan yeast sering disebut khamir. $4olk / ;heeler# 1++,%.
Ada tiga golongan besar mikrobia yang dapat dikulturkan untuk berbagai tu'uan dalam
berbagai bidang. :olongan tersebut adalah 7
1. )akteri# memiliki !iri kultur sebagai berikut 7 membentuk film atau lapisan pada
medium# menghasilkan lendir# menghasilkan bau tak sedap# dan tidak berwarna.
ontohnya 7 Microccocaceae# Streptoccocaceae# Enterobacterium.
3. >east# memiliki !iri kultur sebagai berikut 7 ada yang berwarna merah atau ber!ak
berwarna pada medium6 ada yang membentuk film atau lapisan pada permukaan
medium6 umumnya kering dan berlendir6 berwarna putih atau krem6 umumnya
kering# ke!il# dan keriput6 serta tidak berbau.
ontohnya 7 Saccharomyces sp# Zygosaccharomyces# Phicia.
,. =amur# memiliki !iri kultur sebagai berikut 7 seperti kapas namun berwarna putih
atau keruh atau menghasilkan warna lainnya# loose atau lepas*lepas# fluffy atau
berserabut atau berserat# ada pula yang kompak# warna pada miseliumnya#
gelatinuous# tidak berbau.
ontohnya 7 Aspergillus sp.# Penicillium# Mucor # Rhizopus $)ibiana# 1++2%.
=amur sangat menyukai suatu bahan yang mengandung banyak karbohidrat.
"ebagaimana kita tahu bahwa pati ini adalah merupakan golongan polisakarida $de
(an# 1+0+%. apang adalah fungi multiseluler yang mempunyai filamen dan
pertumbuhannya pada makanan mudah dilihat karena penampakannya yang beserabut
seperti kapas. Pertumbuhannya mula*mula berwarna putih# tetapi 'ika spora telah timbul
akan terbentuk berbagai warna tergantung dari 'enis kapang. =amur atau kapang adalah
kelompok mikroba yang tergolong dalam fungi# yang merupakan suatu organisme
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
6/37
?
eukariotik yang mempunyai !iri spesifik# antara lain7 mempunyai inti sel# memproduksi
spora# tidak mempunyai klorofil sehingga tidak dapat melakukan fotosintesis# dapat
berkembang biak se!ara seksual maupun aseksual# beberapa mempunyai bagian*bagian
tubuh berbentuk filamen dengan dinding sel yang mangandung selulosa dan kitin.
apang merupakan fungi multiseluler pertumbuhan pada makanan dapat dilihat
penampakannya yang berserabut seperti kapas $&ardia5# 1++3%.
Rhizopus sering disebut 'uga kapang roti karena sering tumbuh dan menyebabkan
kerusakan pada roti. "pesies Rhizopus yang umumnya ditemukan pada roti adalah R.
stolonifer dan R. nigricans. iri*!iri spesifik Rhizopus adalah mempunyai hifa
nonaseptat# mempunyai stolon dan rhi5oid yang warnanya gelap 'ika sudah tua#
sporangofora tumbuh pada noda di mana terbentuk 'uga rhi5oid# sporangia biasanya
besar dan berwarna hitam# kolumela agak bulat dan apofisis bebentuk seperti !angkir#
tidak mempunyai sporangiola# membentuk hifa egetatif yang melakukan penetrasi
pada substrat# dan hifa fertil yang memproduksi sporangia pada u'ung sporangiofora#
pertumbuhannya !epat# dan membentuk miselium seperti kapas $&ardia5# 1++3%.
=amur merupakan suatu bentuk tak se'ati# yaitu tidak memiliki akar# batang dan daun
se'ati# namun memiliki bentuk tersendiri yang disebut hifa yang tumbuh pada awal
pertumbuhannya. Hifa ada tiga ma!am berdasarkan pertumbuhannya pada substrat atau
media serta berdasarkan fungsinya dalam tubuh 'amur# yaitu 7
• Hifa egetatif# yaitu hifa yang digunakan untuk pertumbuhan se!ara aseksual yaitu
dengan menghasilkan spora aseksual# seperti konidiospora# sporangiospora#
arthospora# klamidospora dan 5oospora. Disamping itu hifa ini ditandai dengan
pertumbuhannya# yaitu selalu berada di dalam substrat.
• Hifa fertile# yaitu hifa yang yang digunakan untuk reproduksi# yaitu menghasilkan
spora# khususnya spora seksual yaitu as!ospora# basidiospora# 5igospora# dan
oospora.
• Hifa aerial # yaitu hifa yang tumbuh pada substrat# dimana selalu keluar ke
permukaan substrat $)ibiana# 1++2%.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
7/37
@
Disamping memiliki hifa# 'amur membentuk pula miselium yang merupakan gabungan
dari beberapa hifa tersebut# dan kemudian bisa pula membentuk koloni yang berupa
yeast koloni dengan bentuk bulat# lon'ong ada yang bertunas dan ada pula yang tidak
bertunas# serta pada keadaan lingkungan mendukung akan membentuk spor seksual
yaitru as!ospora. Ada pula bentuk koloni berupa yeast like koloni# yang memiliki
bentuk seperti yeast koloni namun memiliki suatu bentuk yang mirip hifa namun bukan
hifa yang disebut pseudohifa. Dan terakhir umumnya membentuk filamentous koloni#
yaitu berupa bentuk yang kasar# atau berserat. =amur punya karakteristik umum pada
makanan dan pada kultur# yaitu 7
"eperti kapas namun berwarna putih atau keruh atau menghasilkan warna lainnya#
misalnya Aspergillus niger akan menun'ukkan warna hitam# Aspergillus candidus
akan menun'ukkan warna putih# dan pada Aspergillus flavus akan menun'ukkan
warna hi'au kekuningan# dan lain sebagainya.
Loose atau lepas*lepas.
luffy atau berserabut atau berserat.
Ada pula yang kompak.
;arna pada miseliumnya.
!elatinuous.
9idak berbau# tidak berlendir# tidak membentuk lapisan film di permukaan substrat.
)ila spora sudah matang akan menun'ukkan warna.
ering seperti serbuk# !ontohnya Aspergillus parasiticus.
(emiliki serat yang biasanya putih namun ada pula yang keruh atau gelap.
Ada yang memiliki bentuk lilin# seperti ".achoenleini.
Hifa umumnya tidak berwarna# atau 'ernih# ada yang bersepta ada pula yang tidak
namun ada pula yang keruh atau berwarna# bila beberapa hifa makin membesar dan bergabung membentuk miselium# dan miselium inilah yang tampak menghasilkan
warna pada 'amur tertentu.
Punya bentuk khusus# seperti rhi5oid atau bangun seperti akar pada Rhizopus# sel
kaki pada Aspergillus sp# dan lain sebagainya $)ibiana# 1++2%.
Pertumbuhan kapang mula*mula berwarna putih# tetapi 'ika spora telah timbul akan
terbentuk berbagai warna tergantung dari 'enis kapang. "alah satu 'enis kapang adalah
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
8/37
0
Aspergillus. A. niger mempunyai kepala pembawa konidia yang besar yang dipak se!ara
padat# bulat# dan bewarna hitam# !oklat*hitam atau ungu !oklat. onidianya kasar dan
mengandung pigmen. Adanya hifa dan konidia tipe radial warna hi'au# merupakan bukti
adanya Aspergillus flavus. "edangkan warna hitam menun'ukkan tumbuhnya 'amur
Aspergillus niger $&ardia5# 1++3%.
Pada morfologi Aspergillus sp. yang merupakan golongan Pycetomycetes# terbentuk sel
hifa# sel kaki ber!abang yang membentuk hifa tegak lurus# serta u'ungnya berupa
gelembung. Dari gelembung tersebut keluar sterigma# dan pada sterigma tersebut
tumbuh konidium*konidium yang tersusun berurutan mirip bentuk untaian mutiara
berwarna kuning kehi'auan. Aspergillus sp merupakan 'amur yang bersepta dan sel
kakinya berwarna hi'au# serta memiliki konidia berwarna hitam $Hadioetomo# 1++,%.
Aspergillus termasuk 'enis spora konidiospora yang memiliki !iri7 hifa septat dan
miselium ber!abang# biasanya tidak berwarna# koloni kompak# konidiofora septat atau
non*septat# mun!ul dari #foot cell$% konidia membentuk rantai yang berwarna hi'au#
!oklat atau hitam# dan beberapa spe!ies tumbuh baik pada suhu ,@ ° atau lebih
$&ardia5# 1++3%.
&acillus termasuk bakteri pembentuk spora. )entuk spora yang diproduksi oleh
&acillus berma!am*ma!am# tergantung dari spesiesnya. &. subtilis dan &.cereus
memproduksi spora berbentuk silinder yang tidak membengkak. "edangkan &. subtilis
memproduksi spora yang langsing dan tidak melebihi diameter #+ µm $&ardia5# 1++3%.
)akteri sukar untuk dilihat dengan mikroskop !ahaya biasa karena bakteri itu tampak
tidak bewarna# walaupun biakannya se!ara keseluruhan mungkin bewarna $4olk /
;heeler# 1++,%. enampakan koloni bakteri &.subtilis dengan warna putih ini
merupakan kenampakan yang khas yang ditun'ukkan oleh bakteri tersebut . ;arna
koloni ini dipengaruhi oleh pH# suhu# temperatur# dan oksigen yang bebas
$Dwi'oseputro# 1++2%.
)akteri merupakan mikroorganisme yang menempati golongan prokariotik# karena tidak
memiliki dinding inti yang 'elas atau belum memiliki dinding inti yang se'ati# sehingga
semua bagian intinya tersebar di dalam sitoplasma se!ara bebas. 9etap memiliki faktor
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
9/37
+
pembawa sifat yang tersimpan di dalam DNA yang berada di dalam kromosom namun
tersebar luas dan bebas di dalam sitoplasma. (eskipun demikian bukannya tidak
memiliki inti namun hanya sa'a tidak memiliki dinding inti yang 'elas sehingga tampak
tidak berinti sel. )eberapa sifat morfologi bakteri perlu diperhatikan karena
pertumbuhannya di dalam makanan dan 'uga karena bakteri memiliki ketahanan !ukup
tingggi selama pengolahan dengan panas maupun dengan suhu dingin $"!hlegel /
"!hmidt# 1++2%.
)eberapa sifat morfologi bakteri sangat penting dalam hubungannya dengan
pertumbuhan dan perkembang biakan bakteri tersebut pada makanan# serta
ketahanannya terhadap pengolahan bahan pangan. "ifat*sifat tersebut# meliputi bentuk
dan pengelompokan sel# susunan dinding sel# pembentukan kapsul# dan pembentukan
endospora. Pada umumnya# bakteri mempunyai ukuran sel #< B 1# µm C 3# B
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
10/37
1
berkembang biak dengan banyak !ara yaitu dengan pembelahan sel atau binary fission#
pertunasan# spora baik seksual maupun aseksual. Perbedaan lainnya dari bakteri yaitu
mengenai ukurannya# yeast lebih besar ukurannya dan bentuknya berma!am*ma!am ada
yang bulat# oal# ogial# botol# lemon# batang# pseudomiselium yaitu seperti miselium
pada 'amur namun bukan miselium sebenarnya. >east punya beberapa sifat umum# yaitu
7
9idak berfilamen
Uniseluler
"ebagai pembusuk makanan atau untuk fermentasi
"edangkan karateristik kulturnya adalah 7
Pada medium !air bisa mebentuk beberapa bentuk seperti memberikan warna
keruh dan ada endapan# bisa pula membentuk pelikel !in!in atau pelikel berupa
garis melingkar putus*putus# pelikel yang tumbuh pada permukaan serta bisa pula
membentuk pelikel yang berbentuk seperti kulit.
Pada medium padat biasanya membentuk koloni dengan garis melingkar atau garis
radial# namun selain koloni 'uga dapat diamati tepian koloni# ada yang rata atau
halus# ada yang bergelombang# ada yang menggelembung# ada yang bergerigi dan
ada pula yang tampak berambut.
)ila masih muda biasanya lembek# namun selan'utnya akan men'adi bentuk yang
ke!il namun berkerut.
)erlendir namun kering# bila bakteri hanya berlendir dan tidak kering.
Umumnya berwarna putih atau terkadang krem# sehingga dalam pengamatan perlu
dilakukan pewarnaan khusus untuk melihat bagian tertentu# yaitu anilin untuk
melihat seluruh sel# besi hemosiklin untuk melihat inti sel# tinta india untuk
melihat kapsulanya sa'a# kalium iodida untuk melihat granula pati dan glikogen#
merah netral untuk melihat granula metakromik dan akuola# merah sudan dan
hitam sudan untuk melihat granula lemak# 5ink !hlorida iodium untuk melihat
selulosa pada dinding sel# dan plo!hroma biru metilen untuk melihat
nukleoprotein pada tubuh yeast.
Untuk mengamati morfologi yeast bisa dilakukan dengan beberapa !ara yaitu dengan
menggunakan mikroskop biasa# dengan menggunakan mikroskop biasa namun sudah
melalui pewarnaan tertentu# dengan mikroskop elektron namun dinding sel telah
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
11/37
11
dipisahkan dari selnya# dan terakhir dengan menggunakan mikroskop elektron untuk
mengamati 1 potongan tipis sel yeast. $"h!legel dan "!hmidt# 1++2%.
Pemindahan suatu biakan mikroorganisme harus dilakukan se!ara aseptis. Hal ini sangat
penting untuk menghindari ter'adinya kontaminasi oleh organisme yang tidak
dikehendaki dalam biakan murni yang akan dibuat# dan menghindari tersentuhnya
media atau permukaan tabung bagian dalam oleh benda yang tidak steril.
(ikroorganisme luar yang tidak dikehendaki dapat masuk melalui kontak langsung
dengan permukaan atau tangan yang ter!emar $Hadioetomo# 1++,%.
ara aseptik yang harus dilakukan dalam peker'aan mikrobiologi merupakan suatu !ara
ker'a dimana ter'adinya kontaminasi oleh mikrobia lain yang tidak dikehendaki di!egah
semaksimum mungkin# sedangkan mikrobia yang dikehendaki dipertahankan
semaksimum mungkin. Untuk memindahkan sel*sel mikrobia dari satu medium ke
medium lainnya digunakan suatu kawat yang diberi batang pemegang di bagian
pangkalnya# yang disebut 'arum ose atau loop. Loop harus dipi'arkan sampai berwarna
merah sesaat sebelum dan sesudah digunakan. Dengan !ara ini# bagian 'arum dari loop
tersebut men'adi steril untuk sementara karena mikrobia yang ada pada permuaakn loop
akan mati. "elama pemi'aran# 'arum ose harus dipegang sedemikian rupa di atas api
sehingga seluruh u'ung loop hingga bagian dekat tangkai pemegang menyala se!ara
bersamaan. "ebelum digunakan untuk inokulasi# loop yang telah menyala harus
didinginkan dalam waktu beberapa detik untuk men!egah kematian mikrobia yang akan
diinokualsikan $4olk / ;heeler# 1++,%.
Untuk mendapatkan koloni yang terpisah sewaktu melakukan goresan harusmemperhatikan7
• :unakan ose yang telah dingin untuk menggores permukaan lempengan agar. 8se
yang panas akan mematikan mikrobia# sehingga tidak ter'adi pertumbuhan pada
bekas goresan.
• "ewaktu menggores# ose dibiarkan melun!ur di atas permukaan lempengan agar
yang luka akan mengganggu pertumbuhan mikrobia# sehingga sulit diperoleh koloni
yang terpisah.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
12/37
13
• 8se harus dipi'arkan setelah menggores suatu daerah# hal ini bertu'uan mematikan
mikrobia yang melekat pada mata ose dan men!egah pen!emaran pada penggoresan
berikutnya $;aluyo# 32%.
Di dalam medium !air# mikrobia akan tumbuh dalam waktu 32*20 'am. Pertumbuhan
mikrobia di dalam suatu medium !air dapat terlihat dalam berbagai bentuk misalnya 7
1. ekeruhan# yang biasanya terlihat pada seluruh bagian medium.
3. Pertumbuhan pada permukaan yang dapat berbentuk pelikel# !in!in# flokulen atau
membran.
,. "edimen endapan# yaitu kumpulan sel*sel yang mengumpul pada dasar tabung dan
akan menyebar lagi 'ika tabung digerakkan atau diko!ok $4olk / ;heeler# 1++,%.
9imbulnya kekeruhan dan terbentuknya endapan putih ter'adi sebagai tanda
pertumbuhan mikroorhanisme karena mikroba tidak menggerombol melainkan
menyebar pada seluruh bagian dari medium. Lama kelamaan sebagian dari sel*sel yang
menyebar tersebut mengendap di dasar tabung# sehingga terbentuklah endapan $&ardia5#
1++3%.
)entuk pertumbuhan mikroba# dapat dibedakan men'adi beberapa# berdasarkan !ara
melihatnya. >aitu bentuk pertumbuhan mikroba pada permukaan# terdiri dari bentuk
!in!in# folikel# filiform# ekinulat# ilous# dll. )entuk pertumbuhan koloni mikrobia
berdasarkan penon'olannya adalah datar# timbul# koneks# gunung# umbonat# berbukit#
dan tumbuh ke dalam media. )entuk dari pinggir meliputi halus# bergelombang# lobat#
tidak teratur# siliat# benang# rambut# wool dan ber!abang. "edangkan bentuk dari atas
men!akup bulat# konsentrik# filamen# kompleks# rhi5oid# filiform# permukaan kusut#
bulat dengan tepi timbul dan menyebar dengan tidak teratur $&ardia5# 1++3%.
"usu adalah !airan berwarna putih yang disekresi oleh kelen'ar mamae $ambing% pada
binatang mamalia betina# untuk bahan makanan dan sumber gi5i bagi anaknya. "usu
merupakan medium yang baik untuk pertumbuhan mikrobia. Hal ini karena komposisi
nutrisinya ideal untuk pertumbuhan mikrobia $;inarno# 1++2%. arena air susu
merupakan medium yang baik untuk pertumbuhan bakteri dan bahkan air susu yang
dipasteurisasi pun tidak steril# suhu dingin untuk menghambat pertumbuhan bakteri
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
13/37
1,
merupakan sesuatu yang perlu. )akteri coliformis anaerob dan beberapa khamir
mungkin memproduksi gas dan !ita rasa yang tidak dikehendaki dalam air susu $4olk /
;heeler# 1++,%.
)akteri asam laktat mempunyai sifat mampu memfermentasi gula men'adi asam laktat.
"ifat ini penting dalam pembuatan produk fermentasi seperti fermentasi sayuran# susu#
dan ikan. "elain itu# bakteri asam laktat 'uga sering menyebabkan kebusukan asam pada
beberapa makanan seperti susu. >ang termasuk bakteri asam laktat yaitu Lactobacillus#
Streptococcus# Leuconostoc# dan Pediococcus $&ardia5# 1++3%. ;arna koloni merupakan
sifat yang penting yang diperlukan untuk dapat menentukan identifikasi dari suatu
spesies yang dapat diamati. ;arna koloni bakteri Lactobacillus adalah putih.
(ikroorganisme pada umumnya tidak bersifat kromogenetik namun menampilkan
warna putih $Dwid'oseputro# 1++2%.
1.2. Tujuan Praktikum
9u'uan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui !ara melakukan isolasi dan
pemindahan kultur mikrobia# mengetahui faktor*faktor dan !iri*!iri pertumbuhan
mikrobia# mengetahui bentuk*bentuk koloni mikrobia# mengetahui kenampakan
mikrobia pada media dan bahan pangan# mengetahui karakteristik masing*masing
mikrobia# serta dapat mengidentifikasi mikrobia yang tumbuh pada media# serta
mengetahui penyebab dan 'enis mikrobia yang mengkontaminasi roti dan susu.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
14/37
3. (A9E- DAN (E98DA
2.1. Materi
2.1.1. Alat
Dalam praktikum ini# alat B alat yang dibutuhkan adalah bunsen# korek api# 'arum ose#
tabung reaksi# rak tabung reaksi# kapas# dan label.
2.1.2. Bahan
)ahan B bahan yang dibutuhkan dalam praktikum ini adalah alkohol# mikrobia roti#
mikrobia susu# media NA# media PDA# media P:># Aspergillus niger # &acillus subtilis#
Saccharomyces cerevisiae# serta media steril.
2.2. Metoda
2.2.1. Isolasi dan Indentifikasi
=arum ose dipi'arkan sampai bewarna merah pada seluruh bagiannya agar steril.
)ersamaan dengan itu# tabung reaksi berisi media steril yang berupa agar miring
dipegang dengan tangan kiri# setelah itu tutup tabung tersebut dibuka $tutup tabung
'angan diletakkan diatas me'a karena akan menyebabkan kontaminasi pada tutup
tabung%. "etelah itu mulut dan leher tabung dipanaskan sebentar di atas api. emudian
mikrobia yang ada pada roti diambil dengan menggunakan 'arum ose. Lalu digoreskan
se!ara 5ig * 5ag pada permukaan agar miring. (ulut dan leher tabung kemudian
dipanaskan lagi lalu ditutup. =arum ose 'uga dipanaskan hingga berwarna merah
kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi yang berisi alkohol. emudian
diinkubasikan selama , hari# diamati perubahan yang ter'adi# digambar# dan diberi
keterangan meliputi warna# bentuk dari atas# bentuk dari pinggir# serta bentuk koloni.
Per!obaan ini diulang dengan menggunakan mikrobia pada susu.
2.2.2. Pemindahan kultur dan morfologi
=arum ose dipi'arkan sampai bewarna merah pada seluruh bagiannya agar steril.
)ersamaan dengan itu# tabung reaksi berisi kultur &acillus subtilis dipegang dengan
tangan kiri# setelah itu tutup tabung tersebut dibuka $tutup tabung 'angan diletakkan
12
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
15/37
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
16/37
,. HA"-L PEN:A(A9AN
3.1. Isolasi dan identifikasi
elompok )ahan :ambar eterangan esimpulan
1 oti busuk ;arna awal 7 abu * abu
;arna 'amur7 putih kekuningan
)entuk koloni7 efus
)entuk dari atas7 efus
)entuk dari pinggir 7 benang
'amur
3 oti busuk ;arna awal 7 abu * abu
;arna7 putih ada bintik hitam
)entuk koloni7 arboresen)entuk dari atas7 arboresen
)entuk dari pinggir 7 tidak
teratur
'amur
, oti busuk ;arna awal 7 hitam
;arna7 putih kekuningan# ada
bintik !oklat# ada gumpalan
hitam kuning
)entuk koloni7 beaded
)entuk dari atas7 beaded)entuk dari pinggir7 rambut
'amur
2 oti busuk ;arna awal 7 hi'au lumut
;arna7 hi'au
)entuk koloni7 filiform
)entuk dari atas7 filiform
)entuk dari pinggir7
bergelombang
'amur
< oti busuk ;arna awal 7 abu * abu
;arna7 kuning kehi'auan
)entuk koloni7 filiform
)entuk dari atas7 filiform
)entuk dari pinggir7 tidak
teratur
'amur
? oti busuk ;arna awal 7 kuning# ada titik
hitam
;arna7 putih ber!orak hi'au
)entuk koloni7 efus
)entuk dari atas7 efus
)entuk dari pinggir7 tidak
teratur
'amur
1?
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
17/37
1@
Pada kelompok satu kultur yang digunakan adalah yang berwarna abu B abu. "etelah
diinokulasi dihasilkan warna putih kekuningan. =ika dilihat dari atas maka bentuknya
adalah efus# 'ika dilihat dari pinggir maka bentuknya seperti benang# dan bentuk
koloninya adalah efus. Pada kelompok dua menggunakan kultur mikrob yang berwarna
abu B abu 'uga. "etelah diinokulasi menghasilkan warna kuning dengan bintil B bintil
hitam. =ika dilihat dari atas maka bentuknya seperti arboresen. =ika dilihat dari pinggir
bentuknya tidak teratur# dan bentuk koloninya adalah arboresen. Pada kolompok tiga
kultur yang digunakan adalah yang berwarna hitam. "etelah diinokulasi didapatkan
warna putih kekuningan serta adanya bintik !oklat dan gumpalan hitam kuning. =ika
dilihat dari atas maka berbentuk seperti beaded# 'ika dilihat dari pinggir seperti rambut#
dan bentuk koloninya adalah beaded. Pada kelompok empat# kultur yang digunakan
adalah yang berwarna hi'au lumut. "etelah diinokulasi dihasilkan warna hi'au lumut.
=ika dilihat dari atas maka bentuknya seperti filiform# 'ika dari pinggir maka terlihat
bergelombang# dan bentuk koloninya adalah filiform. Pada kelompok lima# kultur yang
digunakan adalah yang berwarna abu B abu. "etelah diinokulasi maka didapatkan warna
kuning kehi'au B hi'auan. =ika dilihat dari atas berbetuk filiform dan 'ika dilihat dari
pinggir bentuknya tidak teratur# sedangkan bentuk koloninya filiform. Pada kelompok
enam kultur yang digunakan adalah yang berwarna kuning serta ada titik hitamnya.
"etelah diinokulasi maka terlihat warna putih ber!orak hi'au. =ika dilihat dari atas maka
berbentuk efus# 'ika dilihat dari pinggir terlihat tidak teratur# dan bentuk koloninya
adalah efus.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
18/37
10
elompok )ahan :ambar eterangan esimpulan
1 "usu busuk ;arna7 putih kekuningan
)entuk koloni7 bergerombol
)entuk dari atas7 bulat dan
menyebar
)entuk dari samping7
bergelombang
)entuk penon'olan7 berbukit
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
3 "usu busuk ;arna7 putih
)entuk koloni7 bergerombol
)entuk dari atas7 bulat
)entuk dari samping7 halus
)entuk penon'olan7 datar
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
, "usu busuk ;arna7 putih
)entuk koloni7 ber!ak
)entuk dari atas7 halus
)entuk dari samping7 halus
)entuk penon'olan7 datar
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
2 "usu busuk ;arna7 hitam
)entuk koloni7 menggerombol
)entuk dari atas7 halus)entuk dari samping7 halus
)entuk penon'olan7 datar
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
< "usu busuk ;arna7 putih
)entuk koloni7 menggerombol
)entuk dari atas7 menyebar
)entuk dari samping7
bergelombang
)entuk penon'olan7 berbukit
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
? "usu busuk ;arna7 putih susu
)entuk koloni7 bergerombol
)entuk dari atas7 halus
)entuk dari samping7 halus
)entuk penon'olan7 datar
9ermasuk bakteri
:enus
Lactobacillus
Pada kelompok satu didapatkan warna putih kekuningan# 'ika dilihat dari atas
bentuknya beaded# 'ika dilihat dari pinggir bentuknya halus# dan bentuk koloninya
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
19/37
1+
adalah beaded. Pada kelompok dua terlihat warnanya putih kekuningan# 'ika dilihat dari
atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir bentuknya bergelombang# dan bentuk
koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok tiga terlihat warnanya adalah kuning
keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir terlihat
halus# serta bentuk koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok empat# terlihat warnanya
adalah putih susu# 'ika dilihat dari atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir
terlihat halus# serta bentuk koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok kelima terlihat
warnanya adalah putih susu# 'ika dilihat dari atas akan berbentuk ekinulat dan 'ika
dilihat dari pinggir terlihat bergelombang# serta memiliki bentuk koloni ekinulat. Pada
kelompok enam# terlihat warnanya adalah putih kekuningan# 'ika dilihat dari atas
bentuknya ekinulat dan 'ika dilihat dari pinggir terlihat bergelombang# serta bentuk
koloninya adalah ekinulat.
3.2. Pemindahan kultur dan morfologi
elompok (edia=enis
mikroorganisme:ambar eterangan
1 NA &acillus subtilis ;arna7 kuning keputihan
)entuk dari atas7 beaded
)entuk dari pinggir 7 halus
)entuk penon'olan 7 datar
3 NA &acillus subtilis ;arna7 kuning keputihan
)entuk dari atas7 efus
)entuk dari pinggir 7 halus
)entuk penon'olan7 datar
, PDA Aspergillus niger ;arna7 hitam
)entuk dari atas7 filiform
)entuk dari pinggir 7 lobat
)entuk penon'olan7 berbukit
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
20/37
3
2 PDA Aspergillus niger ;arna7 hitam
)entuk dari atas7 ekinulat
)entuk dari pinggir 7
bergelombang
)entuk penon'olan7 krateriform
< P:> Saccaromyces
cereviseae
;arna7 putih.
Ada endapan dia atas dan di
dasar tabung# yang berwarna
putih keruh.
? P:> Saccaromyces
cereviseae
;arna7 puith
Ada endapan di dasar tabungyang berwarna putih keruh.
elompok satu dan dua menggunakan kultur &accilus subtilis dan NA sebagai
medianya yang merupakan agar miring. Pada kelompok satu didapatkan warna kuning
keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya beaded# 'ika dilihat dari penggir terlihat
halus# serta bentuk penon'olannya datar. Pada kelompok dua didapatkan warna kuning
keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya efus# 'ika dilihat dari pinggir terlihat halus#
serta bentuk penon'olannya datar. Pada kelompok tiga dan empat# kultur yang
digunakan adalah Aspergillus niger dan PDA sebagai medianya yang merupakan agar
miring. Pada kelompok tiga didapatkan hasil kultur yang berwarna hitam. =ika dilihat
dari atas berbentuk filiform# 'ika dilihat dari pinggir bentuknya lobat# dan bentuk
penon'olannya berbukit. Pada kelompok empat didapatkan warna kultur yang dihasilkan
adalah hitam. =ika dilihat dari atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir
bergelombang# dan bentuk penon'olannya adalah krateriform. Pada kelompok kelima
dan keenam menggunakan Saccaromyces serevisiae sebagai kulturnya dan sebagai
medianya digunakan media !air yaitu P:> sebagai agar tegak. Pada kelompok lima
didapatkan warna putih dengan adanya endapan diatas dan didasar tabung yang
berwarna putih keruh. Pada kelompok enam didapatkan warna putih dengan endapan
yang berada dibawah tabung yang berwarna putih keruh.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
21/37
2. PE()AHA"AN
Pada per!obaan ini dilakukan dua kali per!obaan. Per!obaan pertama adalah isolasi dan
identifikasi mikrobia yang menggunakan roti serta susu yang telah busuk. "edangkan
per!obaan yang kedua adalah pemindahan kultur dan morfologi mikrobia. Pertumbuhan
mikroba hanya dimungkinkan apabila kondisi fisik dan kimiawi lingkungannya sesuai.
ondisi fisik !ontohnya suhu dan struktur bahan. "edangkan kondisi kimiawi untuk
pertumbuhan ditentukan oleh komponen yang menyusun medium pertumbuhan seperti
air# sumber karbon# sumber energi# sumber nitrogen# mineral# faktor pertumbuhan#
maupun konsentrasi ion hidrogen $pH%. &lora mikroba di lingkungan mana sa'a pada
umumnya terdapat dalam populasi !ampuran. (ikroba amat 'arang ditemukan sebagai
spesies tunggal di alam. Untuk men!irikan dan mengidentifikasi mikroorganisme harus
dilakukan dengan !ara memisahkan suatu spesies mikroorganisme tertentu dari
mikroorganisme lain# lalu ditumbuhkan men'adi biakan murni. )iakan murni adalah
biakan yang sel*selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal $Hadioetomo# 1++,%.
Dalam per!obaan kali ini# semua dilakukan se!ara aseptis untuk men!egah ter'adinya
kontaminasi. =arum ose yang akan digunakan harus dipi'arkan dahulu diatas api hingga
berwarna merah. Dan pada saat pengambilan mikrobia dari medium padat# 'arum ose
tidak boleh menggores permukaan medium terlalu keras. Hal ini sangat penting agar
medium tidak ikut terambil dan tidak mengalami kesulitan saat menghitung 'umlah
mikroorganismenya. (enurut Lay $1++2%# teknik penggoresan pada agar atau medium
padat dilakukan dengan satu kali gerakan yang makin lama goresannya makin tipis
sehingga didapatkan hasil goresan garis yang berliku B liku dan semua permukaan rata
ditumbuhi oleh mikroorganisme. (enurut 4olk / ;heeler $1++,%# pada bagian awal
tempat dimulainya goresan# populasi mikrobia biasanya terlalu pekat sehingga koloni
akan berkumpul men'adi satu. Dengan semakin banyaknya goresan# maka akan semakin
sedikit sel yang terbawa oleh loop# sehingga setelah diinkubasi maka akan didapatkan
koloni se!ara terpisah yang mungkin berasal dari satu sel atau beberapa sel. "edangkan
goresan yang dilakukan se!ara berulang B ulang terhadap satu koloni yang tumbuh
terpisah akan menghasilkan koloni yang berasal dari satu sel.
31
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
22/37
33
4.1. Isolasi dan identifikasi
Pada per!obaan ini dilakukan isolasi dan identifikasi mikrobia yang terdapat pada susu
dan roti yang telah busuk. (enurut appu!!ino / "herman $1+0,%# isolasi merupakan
suatu !ara yang dilakukan untuk memisahkan satu mikrobia dari mikrobia yang lain
dengan tu'uan untuk mendapatkan spesies tunggal dengan sifat B sifat yang diinginkan.
(enurut Atlas $1+02%# isolasi merupakan metode untuk memisahkan mikroba yang ada
pada media men'adi sel indiidu yang dipersiapkan untuk mendapatkan spesies tunggal
yang diinginkan.
(engisolasi dan mengidentifikasi suatu 'enis mikroorganisme dari suatu spesimen
tertenru merupakan masalah yang praktis dalam praktek teknis mikrobiologi.
Pengisolasian yang bertu'uan untuk mendapatkan biakan murni# merupakan salah satu
metoda yang paling diperlukan. Hal ini disebabkan karena merupakan metode
mikrobiologis yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme#
termasuk penelaahan !iri B !iri kultural# morfologis# fisiologis# maupun s!rologis#
dimana hanya memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu ma!am mikroorganisme
sa'a $Hadioetomo# 1++,%.
(edia yang digunakan pada per!obaan ini adalah agar miring. Agar miring merupakan
salah satu bentuk medium yang digunakan untuk membiakkan mikrobia# terutama yang
bersifat aerobik dan anaerobik. Penggunaan agar miring ini bertu'uan untuk
mendapatkan permukaan media yang lebih luas sehingga mikrobia yang tumbuh pada
media ini akan semakin banyak. "elain itu# dengan adanya agar miring ini maka !iri dari
kultur termasuk pembentukan warna serta bentuk pertumbuhannya lebih mudah untuk diamati $appu!!ino / "herman# 1+0,%.
Pada per!obaan ini# pertama B tama yang diamati adalah mikroorganisme yang ada pada
roti busuk. Pada kelompok satu kultur yang digunakan adalah yang berwarna abu B abu.
"etelah diinokulasi dihasilkan warna putih kekuningan. =ika dilihat dari atas maka
bentuknya adalah efus# 'ika dilihat dari pinggir maka bentuknya seperti benang# dan
bentuk koloninya adalah efus. Pada kelompok dua menggunakan kultur mikrob yang
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
23/37
3,
berwarna abu B abu 'uga. "etelah diinokulasi menghasilkan warna kuning dengan bintil
B bintil hitam. =ika dilihat dari atas maka bentuknya seperti arboresen. =ika dilihat dari
pinggir bentuknya tidak teratur# dan bentuk koloninya adalah arboresen. Pada kolompok
tiga kultur yang digunakan adalah yang berwarna hitam. "etelah diinokulasi didapatkan
warna putih kekuningan serta adanya bintik !oklat dan gumpalan hitam kuning. =ika
dilihat dari atas maka berbentuk seperti beaded# 'ika dilihat dari pinggir seperti rambut#
dan bentuk koloninya adalah beaded. Pada kelompok empat# kultur yang digunakan
adalah yang berwarna hi'au lumut. "etelah diinokulasi dihasilkan warna hi'au lumut.
=ika dilihat dari atas maka bentuknya seperti filiform# 'ika dari pinggir maka terlihat
bergelombang# dan bentuk koloninya adalah filiform. Pada kelompok lima# kultur yang
digunakan adalah yang berwarna abu B abu. "etelah diinokulasi maka didapatkan warna
kuning kehi'au B hi'auan. =ika dilihat dari atas berbetuk filiform dan 'ika dilihat dari
pinggir bentuknya tidak teratur# sedangkan bentuk koloninya filiform. Pada kelompok
enam kultur yang digunakan adalah yang berwarna kuning serta ada titik hitamnya.
"etelah diinokulasi maka terlihat warna putih ber!orak hi'au. =ika dilihat dari atas maka
berbentuk efus# 'ika dilihat dari pinggir terlihat tidak teratur# dan bentuk koloninya
adalah efus.
Pada beberapa kelompok# setelah diinokulasi terlihat beberapa 'amur yang timbul
padahal hanya menggunakan satu 'enis kultur sa'a. Hal ini dapat disebabkan karena
kontaminasi pada saat melakukan per!obaan ini. ontaminasi ini dapat disebabkan
karena pemanasan pemi'aran yang salah pada 'arum ose. "eharusnya 'arum ose
sebelum dipakai harus dipi'arkan dahulu hingga berwarna merah. (enurut ;aluyo
$32%# 'arum ose sebaiknya dipi'arkan terlebih dahulu untuk mematikan mikrobia yang
melekat pada mata ose dan untuk men!egah pen!emaran pada penggoresan berikutnya.Perbedaan pada bentuk dapat disebabkan karena perbedaan kultur yang digunakan# serta
!ara pengolesan kultur pada media yang berbeda B beda.
Pada roti ini# mikroorganisme yang tumbuh adalah kapang 'amur. Hal ini dibuktikan
dengan adanya bentuk seperti kapas# berserabut dan berwarna pada permukaan roti yang
busuk. -ni sesuai dengan teori dari )ibiana $1++2%# yang mengatakan bahwa 'amur
memiliki !iri B !iri kultur seperti kapas namun berwarna putih atau keruh atau
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
24/37
32
menghasilkan warna lainnya# loose atau lepas B lepas# berserabut# ada pula yang
kompak dan tidak berbau. (enurut de (an $1+0+%# 'amur sangat menyukai suatu bahan
yang mengandung banyak karbohidrat. "ebagaimana kita tahu bahwa pati ini adalah
merupakan golongan polisakarida.
apang adalah fungi multiseluler yang mempunyai filamen dan pertumbuhannya pada
makanan mudah dilihat karena penampakannya yang beserabut seperti kapas.
Pertumbuhannya mula*mula berwarna putih# tetapi 'ika spora telah timbul akan
terbentuk berbagai warna tergantung dari 'enis kapang. =amur atau kapang adalah
kelompok mikroba yang tergolong dalam fungi# yang merupakan suatu organisme
eukariotik yang mempunyai !iri spesifik# antara lain7 mempunyai inti sel# memproduksi
spora# tidak mempunyai klorofil sehingga tidak dapat melakukan fotosintesis# dapat
berkembang biak se!ara seksual maupun aseksual# beberapa mempunyai bagian*bagian
tubuh berbentuk filamen dengan dinding sel yang mangandung selulosa dan kitin.
apang merupakan fungi multiseluler pertumbuhan pada makanan dapat dilihat
penampakannya yang berserabut seperti kapas $&ardia5# 1++3%. Pada roti busuk ini
'amur yang ditemukan termasuk dalam kelompok Rhizopus yang sering disebut 'uga
sebagai kapang roti karena sering tumbuh dan menyebabkan kerusakan pada roti.
"pesies Rhizopus yang umumnya ditemukan pada roti adalah R. stolonifer dan R.
nigricans. iri*!iri spesifik Rhizopus adalah mempunyai hifa nonaseptat# mempunyai
stolon dan rhi5oid yang warnanya gelap 'ika sudah tua# sporangofora tumbuh pada noda
di mana terbentuk 'uga rhi5oid# sporangia biasanya besar dan berwarna hitam# kolumela
agak bulat dan apofisis bebentuk seperti !angkir# tidak mempunyai sporangiola#
membentuk hifa egetatif yang melakukan penetrasi pada substrat# dan hifa fertil yang
memproduksi sporangia pada u'ung sporangiofora# pertumbuhannya !epat# danmembentuk miselium seperti kapas $&ardia5# 1++3%.
Pada per!obaan yang kedua# digunakan susu yang sudah membusuk. Pada hasil
pengamatan# pada kelompok satu didapatkan warna putih kekuningan# 'ika dilihat dari
atas bentuknya beaded# 'ika dilihat dari pinggir bentuknya halus# dan bentuk koloninya
adalah beaded. Pada kelompok dua terlihat warnanya putih kekuningan# 'ika dilihat dari
atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir bentuknya bergelombang# dan bentuk
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
25/37
3<
koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok tiga terlihat warnanya adalah kuning
keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir terlihat
halus# serta bentuk koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok empat# terlihat warnanya
adalah putih susu# 'ika dilihat dari atas bentuknya ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir
terlihat halus# serta bentuk koloninya adalah ekinulat. Pada kelompok kelima terlihat
warnanya adalah putih susu# 'ika dilihat dari atas akan berbentuk ekinulat dan 'ika
dilihat dari pinggir terlihat bergelombang# serta memiliki bentuk koloni ekinulat. Pada
kelompok enam# terlihat warnanya adalah putih kekuningan# 'ika dilihat dari atas
bentuknya ekinulat dan 'ika dilihat dari pinggir terlihat bergelombang# serta bentuk
koloninya adalah ekinulat.
Pada hasil pengamatan ini# rata B rata dari tiap kelompok dihasilkan warna putih
kekuningan# bahkan hampir sama dengan warna medianya. Perbedaan pada bentuk yang
dihasilkan dari tiap kelompok dapat disebabkan karena perbedaan !ara pengolesan
kultur pada media NA. "elain itu dapat disimpulkan bahwa pada susu busuk ini#
mikroba yang tumbuh didalamnya termasuk golongan bakteri. Hal ini dapat dibuktikan
dari bentuk susu busuk yang berlendir dan berbau busuk. (enurut )ibiana $1++2%#
bakteri memiliki !iri kultur yaitu membentuk film atau lapisan pada medium#
menghasilkan lendir# menghasilkan bau tidak sedap# serta tidak berwarna. Dan menurut
hasil pengamatan dapat disimpulkan 'uga bahwa bakteri yang tumbuh termasuk dalam
golongan Lactobacillus. Hal ini sesuai dengan teori dari Dwid'oseputro $1++2%# yang
mengatakan bahwa warna koloni bakteri Lactobacillus adalah putih. (ikroorganisme
pada umumnya tidak bersifat kromogenetik namun menampilkan warna putih.
"usu adalah !airan berwarna putih yang disekresi oleh kelen'ar mamae $ambing% pada binatang mamalia betina# untuk bahan makanan dan sumber gi5i bagi anaknya. "usu
merupakan medium yang baik untuk pertumbuhan mikrobia. Hal ini karena komposisi
nutrisinya ideal untuk pertumbuhan mikrobia $;inarno# 1++2%. arena air susu
merupakan medium yang baik untuk pertumbuhan bakteri dan bahkan air susu yang
dipasteurisasi pun tidak steril# suhu dingin untuk menghambat pertumbuhan bakteri
merupakan sesuatu yang perlu. )akteri coliformis anaerob dan beberapa khamir
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
26/37
3?
mungkin memproduksi gas dan !ita rasa yang tidak dikehendaki dalam air susu $4olk /
;heeler# 1++,%.
)akteri asam laktat mempunyai sifat mampu memfermentasi gula men'adi asam laktat.
"ifat ini penting dalam pembuatan produk fermentasi seperti fermentasi sayuran# susu#
dan ikan. "elain itu# bakteri asam laktat 'uga sering menyebabkan kebusukan asam pada
beberapa makanan seperti susu. >ang termasuk bakteri asam laktat yaitu Lactobacillus#
Streptococcus# Leuconostoc# dan Pediococcus $&ardia5# 1++3%. ;arna koloni merupakan
sifat yang penting yang diperlukan untuk dapat menentukan identifikasi dari suatu
spesies yang dapat diamati $Dwid'oseputro# 1++2%.
)akteri merupakan mikroorganisme yang menempati golongan prokariotik# karena tidak
memiliki dinding inti yang 'elas atau belum memiliki dinding inti yang se'ati# sehingga
semua bagian intinya tersebar di dalam sitoplasma se!ara bebas. 9etap memiliki faktor
pembawa sifat yang tersimpan di dalam DNA yang berada di dalam kromosom namun
tersebar luas dan bebas di dalam sitoplasma. (eskipun demikian bukannya tidak
memiliki inti namun hanya sa'a tidak memiliki dinding inti yang 'elas sehingga tampak
tidak berinti sel. )eberapa sifat morfologi bakteri perlu diperhatikan karena
pertumbuhannya di dalam makanan dan 'uga karena bakteri memiliki ketahanan !ukup
tingggi selama pengolahan dengan panas maupun dengan suhu dingin $"!hlegel /
"!hmidt# 1++2%.
4.2. Pemindahan kultur dan morfologi
Pemindahan kultur merupakan langkah yang paling dasar dalam proses pengkulturan.
"alah saru hal dasar adalah dipakai media untuk menumbuhkan mikroorganismetersebut# umumnya yang digunakan adalah media NA dan N) atau PDA $Hadioetomo#
1++,%. Akan tetapi pada per!obaan kali ini# kita menggunakan tiga ma!am media yaitu
media NA yang berupa media agar miring# media PDA berupa agar miring# serta media
P:> berupa media tegak yang berwu'ud !air. Dalam per!obaan ini# pemindahan kultur
dilakukan dengan menggunkan 'arum ose. Hal ini sesuai dengan teori dari Hadioetomo
$1++,%# yang mengatakan bahwa ada tiga !ara dalam melakukan pemindahan kultur
baik di dalam tabung reaksi maupun dalam petidrish# dan digunakan peralatan yang
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
27/37
3@
berbeda B beda untuk masing B masing teknik pemindahan kultur tersebut. Ada yang
menggunakan 'arum ose# ada yang menggunakan 'arum# dan ada pula yang
menggunakan pipet.
(orfologi adalah ilmu yang mempela'ari bentuk# ukuran# dan susunan suatu sel. Untuk
mengindentifikasikan suatu 'enis mikroorganisme dapat dilakukan berdasarkan !iri
morfologinya $Lay# 1++2%. (orfologi adalah bagian dari ilmu biologi yang mempela'ari
bentuk dan panampilan fisik lainnya dari makhluk hidup. (akhluk hidup ada yang
bersel satu yaitu disebut mikroorganisme# dan dari sekian banyak mikroorganisme
tersebut ada yang dapat tumbuh pada makanan# yaitu beberapa mikroorganisme dari
golongan bakteri# 'amur dan yeast. Disamping dapat tumbuh pada makanan sebagai
perusak namun ada pula yang tumbuh pada makanan memang disenga'a oleh manusia
untuk membuat suatu bahan makanan men'adi suatu bentuk baru# dimana proses
pengolahan makanan dengan mikroorganisme disebut fermentasi. Ada beberapa istilah
yang sebenarnya perlu didefinisikan se!ara 'elas# untuk membedakan pandangan
manusia tentang 'amur atau yeast. =amur adalah fungi yang bertunas# sedangkan yeast
adalah fungi yang tidak bertunas dan tidak bermiselium# ada istilah ragi yang sering
digunakan orang untuk menyebut suatu bentuk seperti tepung dan berwarna putih serta
tidak peduli apakah isi ragi itu 'amur atau yeast. Dalam masyarakat -ndonesia 'amur
sering disebut kapang dan yeast sering disebut khamir. $4olk / ;heeler# 1++,%.
Dalam per!obaan ini# kita melakukan pemindahan kultur dengan teknik spread plate.
(enurut &ardia5 $1++3%# !ara pemindahan kultur dari sumbernya ke dalam medium
yang telah disiapkan# dapat dilakukan dengan teknik "pread Plate# yaitu dengan 7
1. (engambil kultur mikrobia dari dalam sumber mikrobia yang telah disiapkan6dengan !ara menggoreskan atau men!elupkan ose ke dalam sumber mikrobia
tersebut se!ara aseptis.
3. 8se digoreskan di dalam tabung reaksi dari bawah ke atas se!ara 5ig 5ag se!ara
aseptis.
,. 9abung reaksi tersebut ditutup dengan kapas. "etelah selesai ose dipanaskan lagi
diatas bunsen.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
28/37
30
9u'uan mengkulturkan adalah untuk mempela'ari suatu kultur mikroorganisme tertentu.
Dalam studi atau mempela'ari mikroorganisme# maka diperlukan tiga langkah yang
meliputi enumerasi# isolasi dan determinasi atau identifikasi# dan langkah terakhir disini
merupakan !ara untuk mengetahui !iri pertumbuhan yang bisa 'uga di'umpai dalam
makanan sehari*hari. "alah satu tahap yang perlu diperhatikan adalah enumerasi atau
perhitungan 'umlah mikroorganisme baik se!ara langsung maupun tak langsung.
"ebelum digunakan untuk studi yang meliputi beberapa tahap tersebut# namun pertama*
tama harus melakukan pemindahan kultur mikroorganisme ke dalam medium yang telah
dibuat sebelumnya.$9rihendrokesowo# 1+0+%.
Dalam per!obaan ini# kelompok satu dan dua menggunakan kultur &accilus subtilis dan
NA sebagai medianya yang merupakan agar miring. Pada kelompok satu didapatkan
warna kuning keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya beaded# 'ika dilihat dari
penggir terlihat halus# serta bentuk penon'olannya datar. Pada kelompok dua didapatkan
warna kuning keputihan# 'ika dilihat dari atas bentuknya efus# 'ika dilihat dari pinggir
terlihat halus# serta bentuk penon'olannya datar. Hal ini sesuai dengan teori dari &ardia5
$1++3%# yang mengatakan bahwa &acillus merupakan bakteri yang memproduksi spora
langsing dan tidak melebihi diameter .+ µm# sehingga terlihat datar. )akteri sukar
untuk dilihat dengan mikroskop !ahaya biasa karena bakteri itu tampak tidak bewarna#
walaupun biakannya se!ara keseluruhan mungkin bewarna $4olk / ;heeler# 1++,%.
)eberapa sifat morfologi bakteri sangat penting dalam hubungannya dengan
pertumbuhan dan perkembang biakan bakteri tersebut pada makanan# serta
ketahanannya terhadap pengolahan bahan pangan. "ifat*sifat tersebut# meliputi bentuk
dan pengelompokan sel# susunan dinding sel# pembentukan kapsul# dan pembentukan
endospora. Pada umumnya# bakteri mempunyai ukuran sel #< B 1# µm C 3# B
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
29/37
3+
dapat disebabkan karena perbedaan !ara pengolesan kultur pada media yang dilakukan
oleh praktikan.
Pada kelompok tiga dan empat# kultur yang digunakan adalah Aspergillus niger dan
PDA sebagai medianya yang merupakan agar miring. Pada kelompok tiga didapatkan
hasil kultur yang berwarna hitam. =ika dilihat dari atas berbentuk filiform# 'ika dilihat
dari pinggir bentuknya lobat# dan bentuk penon'olannya berbukit. Pada kelompok empat
didapatkan warna kultur yang dihasilkan adalah hitam. =ika dilihat dari atas bentuknya
ekinulat# 'ika dilihat dari pinggir bergelombang# dan bentuk penon'olannya adalah
krateriform. ;arna hitam dari hasil per!obaan ini merupakan konidia dari Aspergillus
tersebut. Hal ini sesuai dengan teori dari Hadioetomo $1++,%# yang mengatakan bahwa
Aspergillus sp merupakan golongan dari Pycetomycetes yang memiliki !iri B !iri
morfologi yaitu terbentuk sel hifa# sel kaki ber!abang yang membentuk hifa tegak lurus#
serta u'ungnya berupa gelembung. Dari gelembung ini akan keluar sterigma dan pada
sterigma ini akan tumbuh konidium yang tersusun berurutan mirip seperti bentuk
untaian mutiara berwarna kuning kehi'auan. Aspergillus sp merupakan 'amur yang
bersepta dan sel kakinya berwarna hi'au# serta memiliki konidia yang berwarna hitam.
(enurut &ardia5 $1++3%# konidia pada Aspergillus berbentuk rantai yang berwarna
hi'au# !oklat# atau hitam# dan beberapa spesies diantaranya dapat tumbuh baik pada suhu
,@o atau lebih. "edangkan perbedaan bentuk yang dilihat dari atas maupun pinggir
serta bentuk penon'olannya dapat disebabkan karena perbedaan 'umlah kultur yang
diambil dengan menggunakan 'arum ose# sehingga tebal atau tipisnya olesan kultur
tidak dapat ditentukan.
Pada kelompok kelima dan keenam menggunakan Saccaromyces serevisiae sebagaikulturnya dan sebagai medianya digunakan media !air yaitu P:> sebagai agar tegak.
Pada kelompok lima didapatkan warna putih dengan adanya endapan diatas dan didasar
tabung yang berwarna putih keruh. Pada kelompok enam didapatkan warna putih
dengan endapan yang berada dibawah tabung yang berwarna putih keruh. Endapan yang
terlihat diatas permukaan merupkan top yeast # sedangkan yang terlihat di bagian bawah
tabung merupkan bottom yeast . -ni sesuai dengan teori dari &ardia5 $1++3%# yang
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
30/37
,
mengatakan salah satu 'enis dari "a!!haromy!es sp adalah khamir yang dapat
dibedakan men'adi 3 'enis yaitu 7
1. "op yeast # yang merupakan khamir yang bersifat fermentatif kuat# tumbuh dengan
!epat pada suhu 3o# tumbuh se!ara menggerombol dan melepaskan 83 dengan
!epat sehingga mengakibatkan sel terapung pada permukaan.
3. &ottom yeast # yang merupakan khamir yang memiliki suhu optimumfermentasi
sekitar 1 B 1
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
31/37
,1
halus# ada yang bergelombang# ada yang menggelembung# ada yang bergerigi dan
ada pula yang tampak berambut.
)ila masih muda biasanya lembek# namun selan'utnya akan men'adi bentuk yang
ke!il namun berkerut.
)erlendir namun kering# bila bakteri hanya berlendir dan tidak kering.
Umumnya berwarna putih atau terkadang krem# sehingga dalam pengamatan perlu
dilakukan pewarnaan khusus untuk melihat bagian tertentu# yaitu anilin untuk
melihat seluruh sel# besi hemosiklin untuk melihat inti sel# tinta india untuk
melihat kapsulanya sa'a# kalium iodida untuk melihat granula pati dan glikogen#
merah netral untuk melihat granula metakromik dan akuola# merah sudan dan
hitam sudan untuk melihat granula lemak# 5ink !hlorida iodium untuk melihat
selulosa pada dinding sel# dan plo!hroma biru metilen untuk melihat
nukleoprotein pada tubuh yeast.
Untuk mengamati morfologi yeast bisa dilakukan dengan beberapa !ara yaitu dengan
menggunakan mikroskop biasa# dengan menggunakan mikroskop biasa namun sudah
melalui pewarnaan tertentu# dengan mikroskop elektron namun dinding sel telah
dipisahkan dari selnya# dan terakhir dengan menggunakan mikroskop elektron untuk
mengamati 1 potongan tipis sel yeast. $"h!legel dan "!hmidt# 1++2%.
ekeruhan yang ditimbulkan dalam per!obaan ini merupkan pertanda bahwa adanya
mikroorganisme yang tumbuh dalam media tersebut. Di dalam medium !air# mikrobia
akan tumbuh dalam waktu 32*20 'am. Pertumbuhan mikrobia di dalam suatu medium
!air dapat terlihat dalam berbagai bentuk misalnya 7
1. ekeruhan# yang biasanya terlihat pada seluruh bagian medium.
3. Pertumbuhan pada permukaan yang dapat berbentuk pelikel# !in!in# flokulen atau
membran.
,. "edimen endapan# yaitu kumpulan sel*sel yang mengumpul pada dasar tabung dan
akan menyebar lagi 'ika tabung digerakkan atau diko!ok $4olk / ;heeler# 1++,%.
9imbulnya kekeruhan dan terbentuknya endapan putih ter'adi sebagai tanda
pertumbuhan mikroorganisme karena mikroba tidak menggerombol melainkan
menyebar pada seluruh bagian dari medium. Lama kelamaan sebagian dari sel*sel yang
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
32/37
,3
menyebar tersebut mengendap di dasar tabung# sehingga terbentuklah endapan $&ardia5#
1++3%.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
33/37
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
34/37
,2
Pada meidum !air $P:>% pertumbuhan mikrobia dapat dilihat dari adanya
kekeruhan# pertumbuhan pada permukaan yang dapat berbentuk pelikel# !in!in#
flokulen atau membran# serta adanya endapan atau sedimen.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
35/37
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
36/37
,?
;inarno# &.:6 ". &ardia5 / D. &ardia5. $1+02%. Pengantar 9eknologi Pertanian. P9
:ramedia. =akarta.
8/18/2019 Isolasi Dan Pemindahan Kultur_ku
37/37
@. LA(P-AN
7.1. Laoran !ementara