Fix Pewarnaan

7/25/2019 Fix Pewarnaan

1/12

PENGAMATAN PEWARNAAN DAN PENGUKURAN SEL BAKTERI

LAPORAN PRAKTIKUM

Disusun untuk Memenuhi Tugas Mata Kuliah

Mikrobiologi

yang dibina oleh Sitoresmi Prabaningtyas, S.Si, M.Si

Oleh :

Kelompok 1

Isatun !hasanah 1"#$"%$"&'

Maulidan (sryoil (nam 1"#$"%")&"

Putri Kartika Mukti 1"#$"%'*"

UNIVERSITAS NEGERI MALANG

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

JURUSAN BIOLOGI

Februari 201

!


2/12

BAB I

PENDAHULUAN

A" Da#ar Te$ri

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morologi, struktur dan siat+siat yang

khas, begitu pula dengan bakteri. akteri merupakan organisme prokariot. -mumnya

memiliki ukuran sangat keil, bentuk tubuh bakteri baru dapat dilihat dengan /elas

menggunakan mikroskop dengan pembesaran 1.###0 atau lebih 2aluyo, %##"3. akteri

yang hidup, hampir tidak ber4arna dan kontras dengan air, dimana sel+sel bakteri tersebut

disuspensikan. Salah satu ara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk

diidentiikasi ialah dengan metode pe4arnaan. 5al tersebut /uga berungsi untuk mengetahui

siat isiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pe4arnaan

5adiutomo, 1))#3. Pengenalan bentuk mikroba morologi3, keuali mikroalgae harus

dilakukan pe4arnaan terlebih dahulu agar dapat diamati dengan /elas 5adiutomo, 1))#3.

Pada umumnya bakteri bersiat tembus ahaya, hal ini disebabkan karena banyak bakteri

yang tidak mempunyai 6at 4arna 2aluyo, %##"3.

Salah satu /enis pe4arnaan yaitu pe4arnaan gram atau metode gram, merupakan suatu

metode empiris untuk membedakan spesies bakteri men/adi dua kelompok besar, yakni gram

positi dan gram negati, berdasarkan siat kimia dan isik dinding sel mereka. Metode ini

diberi nama berdasarkan penemunya, yaitu seorang ilmu4an Denmark 5ans !hristian 7ram

18'$91)$83 yang mengembangkan teknik ini pada tahun 188" untuk membedakan antara

pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniaee;ine, %###3. !han, %##*3.

Teknik pe4arnaan sel bakteri merupakan salah satu ara yang paling utama dalam

penelitian+penelitian mikrobiologi. Prinsip dasar dari pe4arnaan ini adalah adanya ikatan ion

antara komponen selular dari bakteri dengan senya4a akti dari pe4arna yang disebut

kromogen. Ter/adi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler

maupun pada pe4arna. erdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pe4arna asam


3/12

dan pe4arna basa. Teknik pe4arnaan gram tersebut dapat menghasilkan 4arna merah dan

ungu, bakteri gram negati ditandai dengan pe4arnaan merah sedangkan yang positi

ber4arna ungu e;ine, %###3.

Prosedur pe4arnaan yang sederhana dan epat, membuat metode pe4arnaan ini sering

digunakan untuk mempermudah pengamatan bentuk sel bakteri, memperluas ukuran obek

amatan, mengamati struktur dalam dan luar sel bakteri, dan melihat reaksi ob/ek amatan

terhadap pe4arna yang diberikan sehingga siat isik atau kimia ob/ek amatan dapat diketahui

5adiutomo, 1))#3. (dapun pada bakteri dikenal berbagai maam bentuk diantaranya bulat

ous3, batang basil3, koma ataupun spiral. Dengan pe4arnaan sederhana dapat /uga

terlihat penataan bakteri. Pada ous dapat terlihat pe4arnaan seperti rantai stertoous3,

buah anggur stailoous3, pasangan diploous3, bentuk kubus yang terdiri dari " atau 8

saranae3 ay,1))"3.

Proses pe4arnaan gram ini memerlukan " /enis reagen. akteri terbagi atas dua

kelompok berdasarkan pe4arnaan ini, yaitu bakteri gram positi dan bakteri gram negati.

Perbedaan ini berdasarkan 4arna yang dapat dipertahankan bakteri. ?eagen pertama disebut

4arna dasar, berupa pe4arna basa, /adi pe4arna ini akan me4arnai dengan /elas. ?eagen

kedua disebut bahan penui 4arna deolori6ing agent3. Terui tidaknya 4arna dasar

tergantung pada komposisi dinding sel, bila komponen dinding sel kuat mengikat 4arna,

maka 4arna tidak akan terui sedangkan bila komponen dinding sel tidak kuat mengikat

4arna dasar, maka 4arna akan terui. ?eagen terakhir adalah 4arna pembanding, bila 4arna

tidak terui maka 4arna pembanding akan terlihat, yang terlihat pada hasil akhir tetap 4arna

dasar. arutan yang biasa dipakai adalah ungu kristal, lartan iodium, alkohol dan saranin

Tray, %##'3.

Prosedur pe4arnaan 7ram dimulai dengan pemberian kristal ;iolet, setelah itu

ditambahkan larutan iodium maka semua bakteri akan ber4arna biru. Setelah itu ditambah

alkohol. akteri 7ram positi membentuk kompleks Kristal iodine yang ber4arna biru.

Setelah di tambahkan saranin, bakteri 7ram positi akan ber4arna ungu. !ontoh bakteri

7ram positi adalah Streptococcus, Bacillus, Stapilococcus, Clostridia, Corynebacterium

dhypteriae, Peptococcus, Peptostreptococcus, dan lain+lain. Sedangkan, bakteri 7ram negati

akan terdekolorisasi oleh alohol dan pemberian saranin akan memberikan 4arna merah

pada bakteri 7ram negati. !ontoh bakteri 7ram negati;e adalah Neisseria, Klebesiella,

Vellonella, Shigella, Salmonella, Hemophillus, dll !appuino > Sherman, 1)8$3.


4/12

B" Tu%ua&

Praktikum ini pe4arnaan gram memiliki tu/uan yaitu :

1. Mampu mengetahui proses pe4arnaan gram pada bakteri

%. Mampu mengidentiikasi bentuk bakteri biakan melalui pe4arnaan gram

$. Mampu membedakan dan mengidentiikasi bakteri gram positi dan negati

". Mampu mengukur pan/ang dan diameter dari bakteri biakan


5/12

BAB II

METODE

A" A'a( )a& Ba*a&

(lat :

1. =arum Inokulasi

%. Mikroskop

$. Kaa enda

". ensa Okuler

'. !a4an

&. Tabung ?eaksi

*. !olony !ounter

8. unsen

). Korek (pi1#. ap

ahan :

1. akteri iakan diambil darigreenhouse biology3

%. (@uades

$. (lkohol )&A

". Pe4arna Saranin

'. Iodium

&. (mmonium Oksalat Kristal Biolet

*. isol

8. Minyak Immersi

B" +ara Ker%a

1. Kaa preparat disterilkan dengan mele4atkannya dia atas api beberapa kali.

%. =arum berkolong /uga disterilkan dengan membakarnya hingga membara ber4arna

merah menyala3 dan digunakan untuk mengambil a@udest steril.

$. (@uadest steril dioleskan di atas kaa preparat.

". =arum inokulasi disterilak dengan ara yang sama seperti sterilisasi /arum berkolong,

ditunggu hingga agak dingin, dan digunakan untuk mengambil sampel bakteri dari

biakan yang tersedia.

'. Sebelum sample bakteri diambil, bagian tepi a4an petri yang beris biakan disterilkan

dengan ara dile4atkan diatas api agak epat.

&. Sample biakan bakteri yang telah diambil diratakan pada kaa preparat dengan

meletakkannya tepat pada a@uadest steril lalu dioles+oleskan.

*. Kaa preparat yang telah berisi sample biakan dan a@uadest steril diberi label dan

ditunggu hingga a@uadest megering.


6/12

8. Setelah kering, kaa preparat berisi sample disterilakan lagi dengan mele4atkannya di

atas api seara epat beberapa kali lalu diletakkan di atas ka4at penyangga yang

terletak di atas mangkuk.

). Selan/utnya ditetesi dengan ammonium oksalat kristal ;iolet, ditunggu selama 1

menit, lalu dibilas dengan air di atas mangkuk.

1#. Selan/utnya ditetesi larutan iodium, ditunggu selama % menit, lalu dibilas dengan air

di atas mangkuk.

11. Selan/utnya ditetesi dengan alkohol )'A, ditunggu selama 1 menit, lalu dibilas

dengan air di atas mangkuk.

1%. Selan/utnya ditetesi denga saranin, ditunggu selama $# detik, lalu dibilas dengan air

di atas manguk.

1$. Setelah itu, sample diamatai diba4ah mikroskop yang telah dilengkapi dengan skala

okuler yang telah ditera mulai dari perbesaran "#0 hingga 1###0 ditambahkan

minyak emersi ketika mengamati preparat dengan perbesaran 1###03.

1". Cang diamati aalah bentuk, 4arna, dan ukuran sel.

1," -kuran sel yang diambil sebagai data adalah ketika diamati pada perbesaran 1###0.

1" 5itung ukuran sel dengan akurat dan sesuaikan dengan hasil tera skala okuler.

BAB III

ANALISIS DATA DAN PEMBAHASAN

A" Da(a


7/12

Pe4arnaan akteri 7ram dan Pengukuran Sel akteri

Koloni 2arna 7ram-kuran

Pan/ang SelDiameter entuk

K I Merah egati +3 ",8 Em %," Em asil

K II Merah egati +3 + %," Em !ous

B" A&a'i#i# Da(a

Pada praktikum per4anaan gram bakteri, digunakan % koloni bakteri yang diambil dari

greenhousebiologi. Prosedur a4al dari pe4arnaan gram ini yaitu memberi pe4arna kristal

;iolet pada sampel bakteri yang telah diambil, kemudian diletakkan dikaa benda.

Setelahnya, ditunggu selama 1 menit lalu dibilas, kemudian diberikan pe4arna iodium,

ditunggu selama % menit kemudian dibilas. Selan/utnya pada kaa benda diberi alkohol )'A

selama $# detik, kemudian dibilas dan diberi pe4arna saranin selama 1 menit.


8/12

metode pe4arnaan yaitu pe4arnaan sederhana, pe4arnaan dierensial dan pe4arnaan gram

Tray, %##'3.

Pada praktikum pe4arnaan yang digunakan yaitu pe4arnaan gram yang merupakan

metode pe4arnaan yang paling umum digunakan untuk me4arnai sel bakteri. 2heeler, 1))$3.

=adi, /ika bakteri di4arnai, muatan negati dalam asam nukleat bakteri akan bereaksi dengan

ion positi 6at pe4arna basa, Kristal ;iolet, saranin dan iodium adalah 6at pe4arna basa yang

digunakan pada praktikum ini. Sebaliknya 6at pe4arna asam ditolak oleh muatan negati

bakteri menyeluruh. =adi, me4arnai bakteri dengan 6at pe4arna asam akan menghasilkan

hanya pe4arnaan pada daerah latar belakang sa/a. Karena sel bakteri tak ber4arna di atas

latar belakang yang ber4arna Bolk > 2heeler, 1))$3.

erdasarkan praktikum yang telah kami lakukan diketahui bah4a baik koloni satu

maupun koloni dua yang diambil dari hasil biakan pada media lempeng merupakan gram

negati. 5al ini didasarkan pada hasil akhir pe4arnaan yang menghasilkan 4arna merah. sel+

sel gram negati mempunyai kandungan lipid yang lebih tinggi pada dinding selnya dan lipid

pada umumnya larut dalam alkohol dan aseton. Ini dimungkinkan karena antara gram positi

dan gram negati memiliki perbedaan yang mendasar dalam hal ketebalan dinding selnya.

Pada bakteri positi atau gram positi dinding selnya memiliki struktur yang lebih tebal

sehingga tetap ber4arna ungu, sedangkan pada gram negati memiliki struktur dinding sel

yang lebih tipis sehingga 4arnanya akan pudar ketika dibilas dengan alkohol -msl, %##83

(dapun hal ini /uga di/elaskan menurut Tray %##'3, Mekanisme penyerapan 4arna

gram pada bakteri menurut dasarnya dinding sel bakteri golongan gram negati umumnya

lebih tipis dari dinding sel bakteri golongan gram positi. Cang pertama mengandung

presentasi lipid lemak3 yang lebih banyak daripada yang dimiliki dinding sel bakteri

golongan gram positi. Selama perlakuan dengan alkohol ternyata lemak ini tertarik ke luar

sehingga memperbanyak porositasGmenaikkan permeabilitas dinding sel, akibatnya kristal

;iolet iodin keluar dan bakteri tidak ber4arna. Pada bakteri golongan gram positi yang

dinding selnya sedikit mengandung lemak akan mengalami dehidrasi karena perlakuan

dengan alkohol sehingga ukuran pori+pori dan permeabilitas dinding sel berkurang dan !B+1

tidak terui. Dinding sel yang lebih tebal pada bakteri gram positi menyusut oleh perlakuan


9/12

alkohol karena ter/adinya dehidrasi, menyebabkan pori+pori dinding sel menutup sehingga

menegah larutnya kompleks ungu kristal+iodium pada langkah pemudaran. (dapun

pe4arnaan bakteri /uga dipengaruhi oleh aktor+aktor seperti : iksasi, peluntur 4arna,

substrat, intensiikasi pe4arnaan dan penggunaan 6at 4arna penutup Suted/o, 1))13.

=adi, pada pe4arnaan gram, adanya perbedaan pe4arnaan disebabkan adanya perbedaan

dinding sel antara bakteri gram positi dan bakteri gram negati . Pada gram positi senya4a

kompleks pe4arna kristal ;iolet+iodium tertahan oleh dinding sel setelah diui dengan

alkohol. (lkohol diduga menyebabkan penyempitan diameter pori peptidoglikan dinding sel.

Sedangkan Pada bakteri gram negati lapisan peptidoglikannya tipis sehingga pori yang

terbentuk ukup besar. Iodium tidak ukup untuk memperkeil pori dinding sel

peptidoglikan, sehingga kompleks kristal ;iolet+iodium keluar terui dari dinding sel

tersebut (dnany, %### : $

BAB IV

PENUTUP

Si-.u'a&

Dari praktikum yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan sebagai berikut :


10/12

1. Pe4arnaan gram merupakan salah satu metode pe4arnaan untuk membedakan spesies

bakteri men/adi dua kelompok yaitu gram positi dan gram negati yang didasarkan pada

siat kimia dan dinding selnya.

%. akteri yang dapat menahan 6at pe4arna setelah dibilas dengan alkohol )'A merupakan

bakteri gram positi yang diindikasikan dengan 4arna ungu pada bakteri tersebut.

Sedangkan, akteri yang tidak dapat menahan 6at pe4arna setelah dibilas dengan

alkohol )'A merupakan bakteri gram negati yang diindikasikan dengan 4arna merah

pada bakteri tersebut

$. Pada pengamatan diperoleh betuk bakteri berupa basil pada koloni 1 dan ous pada

koloni %, bentuk bakteri baru dapat terlihat /elas pada mikroskop dengan perbesaran

1###0

". Pada pengamatan diperoleh pan/ang bakteri basil pada koloni 1 yaitu ",8 um dan

diameter yaitu %," um serta pada koloni % diameter bakteri ous yaitu %," um

DAFTAR RUJUKAN

(dnany > rai6, M. %###. Identiikasi Morologi akteri Metanogen dari Hluen !lariier

IPT Keputih Surabaya.Jurnal Purifikasi, 1&3 : $''+$


11/12

!appuino, =. 7. > atalie. S. 1)8$.icrobiology ! "aboratory anual. e4 Cork : M

7ra4 5ill ook !ompany.

5adioetomo, ?. S. 1))#.ikrobiologi #asar #alam Praktek. =akarta : 7ramedia

ay, .2. 1))".!nalisis ikroba di "aboratorium. =akarta : PT ?a/a 7raindo Persada

e;ine, M. %###. (n Introdution to aboratory Tehni@ue in ateriology. MMillan

!ompany, e4 Cork.

Pel6ar, M. =., !han, H.!.S. %##*. $lements of icrobiology. e4 Cork : M 7ra4 5ill

ook !ompany.

Suted/o, M. 1))1.ikrobiologi%anah. =akarta : ?ineka !ipta.

Tray. %##'. &ram Staining. Online3, 444.tray.k1%.a.usGthsad;bioGpdsGgramA%#stain.

pd3, diakses tanggal 1 ebruari %#1&

-msl. %##8. Staining Bacteria. Online3, 444.umsl.eduGmirobesGpdGstainingbateria.pd3

diakses tanggal 1 ebruari %#1&

Bolk > 2heeler. 1))$.ikrobiologi #asar. =akarta : Hrlangga

2aluyo, . %##* . ikrobiologi 'mum . Malang : -ni;ersitas Muhammadiyah Malang

Press.
http://www.tracy.k12.ca.us/thsadvbio/pdfs/gram%20stain.%20pdfhttp://www.tracy.k12.ca.us/thsadvbio/pdfs/gram%20stain.%20pdfhttp://www.umsl.edu/~microbes/pdf/stainingbacteria.pdfhttp://www.umsl.edu/~microbes/pdf/stainingbacteria.pdfhttp://www.tracy.k12.ca.us/thsadvbio/pdfs/gram%20stain.%20pdfhttp://www.tracy.k12.ca.us/thsadvbio/pdfs/gram%20stain.%20pdf


12/12

LAMPIRAN

Joto :

Pan/ang dan diameter dariakteri pada Koloni I ",8 Em

dan %," Em

Pe4arnaan pada kolonibakteri I menun/ukkan

4arna merah

Fix Pewarnaan

Documents

Transcript of Fix Pewarnaan