Laporan Prakerin Andrea G F Rev 02
-
Upload
scribdandre -
Category
Documents
-
view
200 -
download
14
description
Transcript of Laporan Prakerin Andrea G F Rev 02
LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI PT MERCK TBK.
(Validasi Metode Uji Disolusi Natrium Diklofenak dalam Obat Tablet Salut Enterik
Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT))
Laporan Praktik Kerja Industri sebagai Syarat Mengikuti Ujian Lisan
Semester Genap Tahun Ajaran 2014/2015
oleh
Andrea Gilang Fauzi 115706909
KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA
Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri
Sekolah Menengah Kejuruan – SMAK
Bogor
2015
LEMBAR PERSETUJUAN DAN PENGESAHAN
Disetujui dan disahkan oleh:
Disetujui oleh:
Rahayu Ningsih, S.Si, MP Dwika Riandari, M. Si
NIP 19660726 200212 2 001
Pembimbing I, Pembimbing II,
Disahkan oleh,
Dra. Hadiati Agustine
NIP 19570817 198103 2 002
Kepala Sekolah Menengah Kejuruan-SMAK Bogor
i
KATA PENGANTAR
Laporan Praktik Kerja Industri ini disusun sebagai syarat melengkapi
tugas semester VIII di Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor. Di semester
VIII ini para siswa wajib melaksanakan Praktik Kerja Industri selama 4 bulan di
dunia industri. Setelah melaksanakan Prakerin, para siswa wajib untuk menulis
laporan yang berisikan tentang kegiatan yang mereka lakukan selama masa
prakerin. Laporan Prakerin ini berjudul “Validasi Metode Uji Disolusi Natrium
Diklofenak dalam Obat Tablet Salut Enterik”.
Adapun isi dari Laporan ini meliputi Pendahuluan, Tinjuan Umum Institusi
Prakerin, Kegiatan di Laboratorium, Hasil dan Pembahasan, serta Kesimpulan
dan Saran. Bagian-bagian di dalamnya membahas tentang kegiatan yang
dilakukan selama masa prakerin. Terutama tentang validasi metode uji disolusi
diklofenak dalam obat tablet salut enterik. Validasi metode uji yang dilakukan
mengacu kepada prosedur standar international yaitu United State
Pharmacopeia (USP).
Puji dan Syukur juga saya naikan Ke Hadirat Tuhan Y.M.E, yang telah
menganugerahi segala kepandaian dan segala yang baik kepada penulis.
Sehingga laporan ini dapat diselesaikan tepat waktu. Tidak lupa penulis juga
menyampaikan ucapan terima kasih kepada:
1. Dra. Hadiati Agustine selaku Kepala Sekolah Menengah Kejuruan – SMAK
Bogor.
2. Dra. Leni Liedarsino selaku Senior Manager Product Development PT.
Merck Tbk.
3. Ibu Amilia Sari Ghani, S.S selaku Waka Bidang Hubungan Kerja Industri.
4. Ibu Rahayu Ningsih, S.Si, MP selaku Pembimbing Institusi PT. Merck Tbk
atas bimbingan dan saran yang diberikan kepada penulis.
5. Ibu Dwika Riandari, M.Si selaku Pembimbing di Sekolah Menengah
Kejuruan-SMAK Bogor.
6. Orang tua yang senantiasa mendoakan dan mendukung selama prakerin
dan penulisan laporan ini.
7. Bapak dan Ibu Guru beserta seluruh staf pegawai Sekolah Menengah
Kejuruan-SMAK Bogor.
ii
8. Pak Kamto, Pak Arief, Mas Ade, Kak Dina, Kak Ismi, Kak Galih, Kak Lusy,
Kak Wika, Kak Cepi, dan Mas Dedi yang telah memberikan bimbingan
kepada penulis selama melakukan kegiatan prakerin.
9. Annisa Indah Pratiwi, Anida Maulidina Nurhayati, Farihah Naafiumamah, dan
Megie Noviani Wongso selaku rekan selama prakerin di PT Merck Tbk.
10. Seluruh teman-teman angkatan 57 Quinsena Quark atas kebersamaan dan
semangatnya.
11. Seluruh pihak yang telah membantu dengan keikhlasannya hingga
terselesaikannya laporan ini.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa laporan Prakerin ini tidak luput
dari kekurangan. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati penulis
mengharapkan kritik dan saran yang mampu menghasilkan perbaikan-perbaikan
yang bermanfaat dikemudian hari. Akhir kata semoga laporan Prakerin ini
bermanfaat bagi pembaca umumnya dan siswa-siswi Sekolah Menengah
Kejuruan-SMAK Bogor khususnya.
Bogor, Februari 2015 Penulis,
iii
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ............................................................................................. i
DAFTAR ISI ......................................................................................................... iii
DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. v
DAFTAR TABEL ................................................................................................. vi
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... vii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
A. Latar Belakang .......................................................................................... 1
B. Tujuan Prakrein ......................................................................................... 2
C. Materi Prakerin .......................................................................................... 2
D. Waktu dan Tempat Pelaksanaan Prakerin ................................................. 3
E. Tujuan Pembuatan Laporan Prakerin ........................................................ 3
BAB II TINJAUAN UMUM INSTITUSI PRAKERIN ............................................... 4
A. Profil PT Merck Tbk................................................................................... 4
1. Sejarah .................................................................................................. 4
2. Visi dan Misi PT Merck Tbk ................................................................... 6
B. Produk Yang Diproduksi ........................................................................... 6
C. Struktur Organisasi .................................................................................... 7
D. Tata Letak dan Fasilitas Bangunan ............................................................ 7
E. Disiplin kerja ............................................................................................. 8
F. Administrasi Laboratorium ......................................................................... 9
BAB III KEGIATAN DI LABORATORIUM DAN TINJAUAN PUSTAKA............... 10
A. Latar Belakang Pemilihan Judul Laporan ................................................ 10
B. Masalah dan Pentingnya Masalah .......................................................... 10
C. Kegiatan di Laboratorium ......................................................................... 11
D. Tinjauan Pustaka ..................................................................................... 11
1. Validasi Metode ................................................................................... 11
2. Obat .................................................................................................... 15
3. Tablet .................................................................................................. 19
4. Uji Disolusi........................................................................................... 25
5. Natrium Diklofenak .............................................................................. 30
6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi .......................................................... 33
E. Metode Analisis ....................................................................................... 42
iv
1. Preparasi Reagent ............................................................................... 42
2. Preparasi Larutan Standar ................................................................... 44
3. Kondisi Disolusi ................................................................................... 46
4. Kondisi Kromatografi ........................................................................... 46
5. Preparasi Larutan Spike untuk Uji Akurasi ........................................... 46
6. Preparasi Sampel ................................................................................ 47
7. Sampel ................................................................................................ 49
8. Penetapan validasi .............................................................................. 50
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................. 53
A. Uji Kesesuaian Sistem ............................................................................ 53
B. Uji Spesifisitas ......................................................................................... 54
C. Uji Linearitas ............................................................................................ 54
D. Uji Akurasi ............................................................................................... 56
E. Uji Presisi ................................................................................................ 59
1. Keterulangan (Repeatability) ............................................................... 59
2. Ketertiruan (Reproducibility) ................................................................ 60
F. Uji Ketahanan ......................................................................................... 63
1. Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel .......................................... 63
2. Variasi Prosedur .................................................................................. 65
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ....................................................................... 67
A. SIMPULAN ............................................................................................. 67
B. SARAN ................................................................................................... 67
DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 68
LAMPIRAN ........................................................................................................ 71
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1 PT Merck Tbk. Indonesia .................................................................... 4
Gambar 2 Tahapan Penguraian Obat ................................................................ 26
Gambar 3 Tahapan Penguraian Obat di dalam Tubuh ....................................... 26
Gambar 4 Alat disolusi metode basket .............................................................. 28
Gambar 5 Alat disolusi metode paddle .............................................................. 29
Gambar 6 Rumus Bangun Na Diklofenak .......................................................... 30
Gambar 7 Pembentukan Prostaglandin ............................................................. 31
Gambar 8 Instrumentassi KCKT ........................................................................ 38
Gambar 9 Kurva Linearitas Standar tahap asam ............................................... 55
Gambar 10 Kurva Linearitas Standar tahap buffer ............................................. 56
Gambar 11 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap asam .............................. 63
Gambar 12 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap buffer ............................. 64
Gambar 13 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap asam .............................. 64
Gambar 14 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap buffer .............................. 65
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1 Tabel 1 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap asam ....................... 45
Tabel 2 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap buffer ................................... 45
Tabel 3 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap asam ............................................ 48
Tabel 4 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap buffer ............................................ 49
Tabel 5 Variasi Prosedur Paameter KCKT ......................................................... 52
Tabel 7 Hasil Uji Kesesuaian Sistem ................................................................. 53
Tabel 8 Hasil Uji Akurasi tahap asam ................................................................ 57
Tabel 9 Hasil Uji Akurasi tahap buffer ................................................................ 58
Tabel 10 Hasil Uji Keterulangan tahap asam ..................................................... 59
Tabel 11 Hasil Uji Keterulangan tahap buffer ..................................................... 60
Tabel 12 Hasil Uji Ketertiruan tahap asam ......................................................... 61
Tabel 13 Hasil Uji Ketertiruan tahap buffer ........................................................ 62
Tabel 18 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap asam .................... 65
Tabel 19 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap buffer .................... 66
vii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Rumus Perhitungan laju disolusi ..................................................... 71
Lampiran 2 Rumus Perhitungan laju disolusi untuk uji akurasi ........................... 72
Lampiran 3 Kromatogram Uji Spesifisitas .......................................................... 74
Lampiran 4 Tabel Uji Linearitas ......................................................................... 78
Lampiran 5 Tabel Hasil Uji Ketegaran ............................................................... 79
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Semakin berkembangnya zaman, pembangunan di berbagai sektor
yang terjadi di Indonesia pun semakin berkembang. Salah satunya adalah
sektor industri, perkembangan pengetahuan dan kemajuan teknologi yang
semakin canggih telah membawa kemajuan yang signifikan dalam sektor
industri. Dengan perkembangan tersebut, tentunya tantangan yang dihadapi
masyarakat industri juga akan semakin berat dan terus meningkat. Maka
disinilah peran Sekolah Menengah Kejuruan untuk mencetak lulusan-lulusan
yang siap menghadapi tantangan tersebut dan dapat membangun negeri ke
arah yang lebih baik.
Sebagaimana SMK lainnya di Indonesia, Sekolah Menengah
Kejuruan SMAK Bogor memiliki Visi dan Misi yang bertujuan untuk
menghasilkan lulusan profesional yang mampu memenuhi kebutuhan
masyarakat dunia usaha usaha dan dunia industri baik di tingkat nasional
maupun tingkat internasional. Dari tujuan tersebutlah maka SMK-SMAK
Bogor perlu untuk membangun kemitraan dengan dunia industri, dimana
dunia industri turut membantu sekolah melalui kegiatan Praktik Kerja Industri.
Praktik Kerja Industri ini adalah sebagai sarana bagi para siswa SMK untuk
belajar tentang dunia industri yang akan mereka hadapi dengan cara terjun
langsung ke lapangan dan menjadi bagian dari dunia industry tersebut.
Dalam Praktik Kerja Industri ini, siswa dapat melihat, mempelajari, dan
mempraktikkan prosedur dan peralatan modern yang tidak dapat dipelajari
disekolah secara langsung. Dan juga siswa dapat belajar untuk menyiapkan
dan menyesuaikan mental dengan lingkungan dan disiplin kerja di dunia
industri. Sehingga setelah lulus dari sekolah dapat menjadi seorang analis
kimia yang terampil, kreatif, dan bermoral.
B. Tujuan Prakrein
Adapun tujuan umum diadakannya kegiatan Praktik Kerja Industri
adalah sebagai berikut:
a. Meningkatkan pengetahuan, kemampuan dan keterampilan sebagai
bekal untuk masuk ke dunia industri sebagai seorang analis kimia.
b. Meningkatkan pengetahuan dan keterampilan siswa dalam penggunaan
instrument untuk analisis yang lebih modern dibandingkan fasilitas yang
ada di sekolah.
c. Memberikan wawasan kepada siswa tentang aspek-aspek yang termasuk
ke dalam ruang lingkup dunia kerja industri, antara lain yaitu: struktur
organisasi, disiplin kerja, pemeliharaan lingkungan dan keselamatan
kerja.
d. Memperkenalkan calon lulusan tenaga analis kimia SMK SMAK Bogor
kepada instansi tempat Prakerin.
e. Mendapatkan masukan dan saran untuk mengembangkan dan
meningkatkan kualitas pendidikan dan pelatihan di SMK SMAK Bogor.
C. Materi Prakerin
Materi pembelajaran di dalam Praktik Kerja industri terdiri atas:
1. Struktur organisasi, fungsi organisasi, disiplin kerja, dan administrasi
(terutama administrasi laboratorium) institusi siswa melaksanakan
Prakerin.
2. Pengetahuan tentang komoditi yang dianalisis, baik secara teoritis
maupun praktis.
3. Pengetahuan tentang metoda analisis kimia yang dilaksanakan secara
teoritis maupun praktis.
4. Pengetahuan tentang proses pengendalian mutu.
Secara umum materi yang diberikan adalah latihan analisis kimia
yang merupakan pekerjaan sehari-hari dan bukan dititik beratkan pada
penelitian.
D. Waktu dan Tempat Pelaksanaan Prakerin
Prakerin dilakukan di unit atau bagian pada perusahaan atau lembaga
penelitian yang terkait dengan analis kimia. Institusi yang dipilih penyusun
adalah PT Merck Tbk yang berlokasi di Jalan T.B. Simatupang No.8 Pasar
Rebo, Jakarta Timur, Kode pos 13760. Nomor telepon : (021) 28565600, fax
(021)28565601. Penyusun melaksanakan prakerin di Departemen Product
Development pada bagian Analytical Development. Prakerin dilakukan
selama empat bulan terhitung mulai 3 November 2014 hingga 27 Februari
2015.
E. Tujuan Pembuatan Laporan Prakerin
Seusai melaksanakan Prakerin, siswa/siswi diwajibkan untuk
membuat laporan Prakerin. Laporan Prakerin tersebut berisikan tentang
kegiatan dan materi yang diberikan kepada siswa selama melaksanakan
Praktik Kerja Industri atas persetujuan pembimbing, adapun tujuannya adalah
sebagai berikut
1. Sebagai media untuk mengetahui sejauh mana siswa/siswi peserta
Prakerin telah mempelajari dan memahami materi yang telah diberikan
selama proses Prakerin berlangsung.
2. Sebagai koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi
Prakerin sehingga dapat menambah pengetahuan baik penyusun
maupun pembaca.
3. Sebagai wujud tanggung jawab siswa dalam melaksanakan kewajibannya
serta melatih siswa untuk dapat membuat laporan kerja dan
mempertanggung jawabkannya.
4
BAB II TINJAUAN UMUM INSTITUSI PRAKERIN
A. Profil PT Merck Tbk
1. Sejarah
Pada awal pendiriannya, Merck adalah sebuah apotek bernama
“Engel Apotheke” yang didirikan oleh Jacob Merck pada tahun 1668 di
kota Darmstadt, Jerman. Apotek ini menjual obat-obatan dan bahan
kimia. Barulah pada tahun 1827, Immanuel Merck mendirikan pabrik obat-
obatan yang diantaranya adalah alkaloid dan beberapa senyawa kimia.
Hingga saat ini pabrik tersebut telah berkembang menjadi perusahaan
farmasi multinasional dan berubah nama menjadi Merck KgaA.
Pada tanggal 14 Oktober 1970, Merck KgaA membangun cabang
di Indonesia dengan nama PT Merck Indonesia (PTMI). Kemudian
memulai pembangunan fasilitas produksi Farmasi dan Kantor Umum 2
tahun kemudian. PTMI memulai produksi farmasi pada April 1974 dan
membuat perjanjian lisensi dengan Astra lima tahun sesudahnya yaitu
pada 1979. PTMI menjadi perusahaan publik pada tahun 1981 dengan
menawarkan saham kepada publik dan merupakan salah satu
perusahaan pertama yang terdaftar di Bursa Saham Indonesia. Sebagian
besar saham dimiliki oleh Grup Merck yang berkantor pusat di Jerman.
Gambar 1 PT Merck Tbk. Indonesia
5
Pada masa itu pemerintah Indonesia mewajibkan perusahaan
farmasi asing untuk memproduksi sedikitnya satu bahan baku kuat,
sehingga tahun 1983 PT Merck Indonesia membangun fasilitas produk
kimia. Thiamin Disulfida merupakan salah satu produksi kimia yang
pertama pada tahun 1985, lalu PTMI memulai bisnis Obat Bebas pada
tahun1993 dan mendapat 12 sertifikat Cara Pembuatan Obat yang Baik
(CPOB) untuk semua fasilitas produksi.
Pada tahun 2000, perusahaan mulai menggunakan sistem
SCALA. Sistem ini memudahkan akses data dan pencarian informasi.
Dalam rangka penerapan identitas korporat Merck secara global, pada
tahun 2002 nama perseroan berubah menjadi PT Merck Tbk. Kini PT
Merck Tbk menjalankan usaha pada tiga sector utamanya yaitu:
1. Farmasi Merck
Divisi Farmasi Merck mengembangkan, membuat dan
memasarkan obat-obatan dengan formula yang inovatif.
2. Kimia Merck
Merck menawarkan ragam bahan kimia yang sangat luas
untuk aplikasi teknologi yang canggih. Di Indonesia, PT. Merck
Tbk. memiliki dua sektor bisnis kimia yaitu Perfomance Materials
dan Merck Millipore. Departemen Performance Meterials
mencakup produk-produk pigmen, termasuk di dalamnya produk
untuk aplikasi kosmetik. Departemen ini merupakan pemimpin
global untuk produk-produk kristal cair yang digunakan untuk layar
televisi, PC dan elektronik lainnya.
Departemen Merck Millipore mencakup produk-produk
untuk aplikasi bisnis Bioscience, Lab Solutions, Process Solutions.
Departemen ini menyediakan alat uji kadar logam dan reagen
unuk penelitian protein, solusi sel kultur, serta layanan penemuan
obat bagi perusahaan biofarmasi, laboratorium kimia untuk
penelitian analisis dan laboratorium rumah sakit.
3. Merck Serono
Merck Serono mengkhususkan diri pada pengobatan
kanker, penyakit menurunnya fungsi syaraf, kemandulan, endkrin
6
dan penyakit metabolisme, penyakit kardiovaskular serta berbagai
kondisi lainnya dengan kebutuhan medis yang sulit.
2. Visi dan Misi PT Merck Tbk
a. Visi:
Kami di PT Merck Tbk, dihargai oleh seluruh pemegang
kepentingan karena kesuksesan kami yang berkelanjutan,
berkesinambungan, dan di atas pangsa pasar pada bidang yang kami
jalankan.
b. Misi:
Kami di PT Merck Tbk memberikan nilai tambah bagi :
1. Pelanggan kami, melalui perluasan kesempatan pada usaha
mereka dalam jangka panjang, membentuk kemitraan yang saling
menguntungkan.
2. Konsumen kami, melalui penyediaan produk-produk yang aman
dan bermanfaat.
3. Pemegang saham kami, melalui pencapaian hasil usaha yang
berkesinambung dan berarti.
4. Karyawan kami, melalui penciptaan lingkungan kerja yang aman
dan pemberian kesempatan yang sama bagi semua.
5. Lingkungan kami, melalui teladan yang kami berikan dalam bentuk
tindakan perlindungan dan dukungan masyarakat sekitar.
B. Produk Yang Diproduksi
Di bidang farmasi, PT Merck Tbk memproduksi dan menjual merek
farmasi terkemuka seperti seperti Neurobion, Sangobion, Illiadin, Becombion,
dan Glucophage dengan fasilitas bersertifikat cGMP.
7
C. Struktur Organisasi
PT. Merck Tbk merupakan perusahaan yang bergerak dibidang
farmasi. PT. Merck Tbk terdiri dari lima divisi masing-masing dipimpin oleh
seorang direktur. Berikut divisi PT. Merck Tbk:
1. Divisi Merck Serono.
2. Divisi Consumen Health Care (CHC).
3. Divisi Chemicals.
4. Divisi Human Resources.
5. Divisi Plant.
6. Divisi Finance and Controlling.
Divisi Plant terdiri dari 6 bagian,
1. Quality Assurance (QA) and Quality Control (QC) Departement.
2. Production Departemen.
3. Supply Chain Management (SCM).
4. Engineering Departement.
5. Product Development.
Product Development terdiri dari 3 bagian, yaitu:
a. Analytical Development.
b. Galenic Development.
c. Packaging Development.
D. Tata Letak dan Fasilitas Bangunan
PT Merck Tbk didirikan dalam bentuk Perusahaan Modal Asing
berdasarkan undang-undang No.1/1976 dengan izin mendirikan bangunan
diatas area seluas 22.257 m2 dan luas bangunan 4.694 m2. Sejak pertama
kali didirikan PT Merck Tbk berlokasi di Jl. TB Simatupang No.8 Pasar Rebo,
Jakarta Timur. PT Merck dibagi atas 3 gedung, yaitu:
1. Gedung pertama merupakan kantor, terdiri dari ruang President Director,
Departemen Finance & accounting, Departemen Pembelian
(Procurement), Departemen Human Resource (HR), Departemen General
Affair (GA), Depatemen HSE (Health Safety Environment), Divisi
Chemical dan Departemen IS.
2. Gedung kedua terdiri atas ruang produksi pharma, gedung bahan baku
(Raw Material), gudang bahan pengemas (packaging materials), gudang
8
obat jadi (finished goods), ruang laboratorium pengawasan mutu/QC
(Quality Control), ruang Production Manager, ruang Quality Assurance
Manager, ruang Engineering Manager, ruang Quality Control Manager,
ruang Product Development Manager, dan beberapa fasilitas umum.
3. Gedung ketiga adalah gedung yang baru dibangun pada tahun 2010 yang
digunakan sebagai laboratorium Product Development.
E. Disiplin kerja
PT. Merck Tbk bergerak dibidang industri Farmasi dan Kimia.
Sehingga dalam kegiatan produksinya sangat menerapkan proses industri
farmasi CPOB. CPOB merupakan suatu konsep mengenai prosedur atau
langkah langkah yang dilakukan dalam suatu industri farmasi untuk menjamin
mutu obat jadi, yang diproduksi dengan menerapkan “Good Manufacturing
Practices” dalam seluruh aspek dan rangkaian kegiatan produksi sehingga
obat yang diproduksi senantiasa memenuhi persyaratan mutu yang telah
ditentukan sesuai dengan tujuan penggunaannya. PT. Merck Tbk. telah
memperoleh sertifikat CPOB pada tanggal 19 April 1993. Diterapkannya
konsep CPOB bertujuan untuk menjamin agar obat dibuat secara konsisten
memenuhi persyaratan yang ditetapkan dan sesuai dengan tujuan
penggunaannya. CPOB mencakup seluruh aspek produksi dan pengendalian
mutu (BPOM, 2006). Bagian Analytical Development PT. Merck Tbk dipimpin
oleh seorang Associate Analytical Development Manager. Dengan fungsi
sebagai berikut :
1. Mengembangkan dan memvalidasi metode pengujian untuk
digunakan selama validasi pembersihan.
2. Memecahkan masalah kimia analitik yang kompleks.
3. Mentransfer metode analisis baru ke Laboratorium Pengawasan
Mutu.
4. Pengujian stabilitas untuk produk dengan formulasi baru.
5. Pengujian mutu produk trial.
6. Pengembangan metode analisis untuk produk baru dan bahan baku
baru.
7. Validasi / verifikasi metode analisis baru (produk dan bahan baku).
9
F. Administrasi Laboratorium
Dalam kegiatan analisis rutin yang dilakukan di laboratorium Product
Development dokumentasi harus dilakukan dengan baik. Hal ini bertujuan
apabila terdapat masalah ketidaksesuaian pada hasil dapat mudah ditelusuri.
Dokumentasi meliputi, yaitu sebagai berikut:
1. Form Permintaan Analisis
2. Pembelajaran Literatur
3. Desain Trial
4. Laporan Trial
5. Metode Analisis
6. Protokol Validasi
7. Laporan Validasi
8. Transfer Metoda Analisis
10
BAB III KEGIATAN DI LABORATORIUM DAN TINJAUAN PUSTAKA
A. Latar Belakang Pemilihan Judul Laporan
Kegiatan di laboratorium Product Development meliputi analisis rutin
pengembangan metode, pemeriksaan stabilitas produk dengan formulasi
baru, validasi metode, dan pemeriksaan kadar zat aktif dalam bahan baku
yang akan digunakan. Dalam analisis produk multivitamin dilakukan
pemeriksaan kadar zat aktif menggunakan metode kromatografi,
pemeriksaan kadar air menggunakan Karl Fisher, waktu hancur obat dengan
menggunakan alat disintegrator dan pemeriksaan stabilitas produk dalam
kurun waktu dan suhu tertentu. Hal ini dilakukan untuk menjaga kualitas dan
keamanan produk yang dihasilkan.
Pemilihan judul laporan prakerin didasarkan pada pekerjaaan analisis
yang dilakukan oleh siswa selama masa prakerin, yang bertujuan untuk
melihat sejauh mana kemampuan siswa dalam memahami materi yang dari
pekerjaan yang dilakukan selama melakukan kegiatan prakerin. Sesuai
dengan tugas bagian Analytical Development yaitu melakukann
pengembangan metode analisis terhadap suatu produk baru ataupun produk
yang telah mengalami perubahan komposisi, sebelum metode tersebut
digunakan untuk analisis rutin di laboratorium uji, metode yang
dikembangkan tersebut harus melalui tahapan validasi metode terlebih
dahulu, validasi metode ini juga merupakan salah satu tugas bagian
Analytical Development.
B. Masalah dan Pentingnya Masalah
Metode analisis yang akan digunakan di laboratorium uji sebelumnya
harus divalidasi terlebih dahulu dengan tujuan untuk mengetahui bahwa
metode tersebut telah sesuai dengan persyaratan dan tujuan yang telah
ditentukan. Oleh sebab itulah, metode analisis hasil percobaan terhadap
produk baru ataupun produk yang telah mengalami perubahan komposisi
harus melewati tahapan validasi metode uji terlebih dahulu.
11
C. Kegiatan di Laboratorium
Laboratorium Product Development PT. Merck Tbk bertanggung
jawab melakukan validasi terhadap metode analisis baru yang akan
diterapkan dan melakukan trial terhadap formulasi-formulasi terbaru yang
sedang dibuat. Laporan ini mengacu pada salah satu kegiatan yang
dilakukan laboratorium yaitu Validasi Metode Uji Disolusi Natrium Diklofenak
dalam Obat Tablet Salut Enterik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
D. Tinjauan Pustaka
1. Validasi Metode
Validasi metode adalah konfirmasi bahwa suatu metode dapat
memenuhi persyaratan tujuan penggunaannya, yaitu melakukan uji untuk
kerja metode yang bersangkutan dan mengumpulkan bukti atau hasilnya.
Menurut CPOB Validasi adalah suatu proses pembuktian dengan cara
yang sesuai bahwa setiap bahan, proses, prosedur kegiatan, sistem
kelengkapan atau mekanisme yang digunakan dalam produksi dan
pengawasan akan mencapai hasil yang diinginkan.
Menurut American Chemical Society ( ACS ), validasi adalah
kemampuan untuk mendapatkan data yang akurat, tepat waktu, dan
dapat dipercaya adalah hal yang penting dalam kimia analitik terutama
dalam bidang pengembangan penemuan dan manufaktur dari produk-
produk farmasi.
Menurut CPOB jenis-jenis prosedur analisis yang harus divalidasi :
a. Uji identifikasi
b. Uji kuantitatif bentuk aktif bahan atau produk
c. Uji kuantitatif komponen terpilih lainnya dalam suatu produk obat
d. Uji kuantitatif kandungan cemaran
e. Uji batas untuk mengendalikan cemaran
Tujuan dari validasi metode adalah:
12
a. Membuktikan bahwa prosedur yang dilakukan sesuai dengan tujuan
yang dicapai.
b. Menjamin bahwa prosedur penetapan kadar dapat dipercaya
c. Menjamin keterulangan prosedur penetapan kadar
d. Menjamin Mutu obat
Ada beberapa protokol yang harus dikerjakan dalam
melaksanakan validasi metode, antara lain :
a. Uji Kesesuaian Sistem
Sistem kromatografi terutama kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) harus diuji dahulu sebelum digunakan untuk analisis, melalui
uji kesesuaian sistem agar mendapatkan keyakinan tentang
keefektifan sistem kromatografi sehingga data analisis yang
dihasilkan cukup handal untuk dipakai dalam mennyimpulkan suatu
hasil pengujian. Hal ini karena banyak faktor yang dapat memberikan
perbedaan hasil uji seperti kolom yang walaupun jenisnya sama, umur
kolom, komposisi dan pH larutan fase gerak (Snyder, 1997).
Parameter uji kesesuaina sistem dapat digunakan sebagai
petunjuk mendesain pengoperassian kromatografi ini, meliputi:
a. Keberulangan penyuntikan
Keberulangan penyuntikan ditetapkan dengan penyuntikan
berulang larutan analait dan dinyatakan dalam simpangan baku
relatif (RSD)
b. Daya pemisahan (Resolusi)
Daya pemisahan adalah ukuran daya pisah dua puncak
kromatogram yang terelusi berdekatan dari dua komponen yang
terdapat dalam larutan yang terpisahkan, sehingga dapat
digunakan untuk analisis kuantitatif secara akurat. Nilai resolusi
yang lebih besar dari 1,5 menunjukan pemisahan yang baik
(Snyder, 1997)
c. Efisiensi Kolom
Efisiensi kolom dinyatakan sebagai jumlah lempeng teoritis per
meter (N) yang merupakan ukuran ketajaman kromatogram.
Kinerja kolom yang berubah ditunjukan dari lebar kromatogram
13
yang berbeda pada analisis berulang sehingga memberikan nilai
efisiensi kolom yang berbeda. Jumlah lempeng teoritis yang lebih
besar dari 10000/m dianggap cukup memadai untuk analisis
(Jatnika, 2007)
d. Faktor Ikutan (kesimetrisan)
Faktor ikutan (Tailing Factor) merupakan ukuran kesimetrisan
suatau kromatogram. Nilai Tf bertambah jika kromatogram makin
terlihat berekor. Kecermatan kromatogram berkurang apabila
faktor ikutan bertambah karena rekorder/pencatat sukar
menentukan dimana dan kapan kromatogram berakhir sehingga
mempengaruhi perhitungan luas kromatogram. Nilai Tf lebih kecil
dari 2.0 menunjukan ukuran kesimetrisan kromatogram baik
sehingga kromatogram dapat digunakan untuk analisis (Jatnika,
2007).
e. Faktor kapasitas (k‟)
Faktor Kapasitas menyatakan kemampuan senyawa tertentu
berinteraksi dengan sistem kromatografi dan mementukan retensi
dari senyawa terlarut. Faktor ini merupakan perbandingan waktu
atau jumlah senyawa dalam fase diam dan dalam fase gerak
(Syder, 1997). Jika k‟ kurang dari satu, maka elusinya sangat
cepat sehingga senyawa sedikit diretensi oleh kolom dan
kromatogram senyawa terelusi dekat dengan kromatogram
senyawa yang tidak diretensi, menunjukan pemisahan yang terjadi
buruk. Jika nilai k‟ sangat besar (antara 20-30), waktu elusinya
sangat lama sehingga tidak berguna untuk analisis. Nilai k‟ yang
ideal dalah diantara 1-10.
b. Akurasi
Menurut International Organitation for Standardization ( ISO ),
akurasi didefinisikan sebagai kesesuaian antara hasil analisis dengan
nilai benar analit. Akurasi sering dinyatakan sebagai persentase
perolehan kembali. Uji akurasi dilakukan untuk mengetahui adanya
gangguan matriks di dalam contoh uji terhadap pereaksi yang
digunakan atau untuk mengetahui ketepatan metode yang digunakan.
Secara umum dikenal tiga cara yang digunakan untuk pengecekan
akurasi metode uji, yaitu:
14
1. Uji Pungut Ulang (Recovery Test)
2. Uji Relatif terhadap akurasi metode baku
3. Uji terhadap Standard Reference Material (SRM)
Akurasi dilakukan untuk mengetahui ketepatan/keakurasian
analisa zat aktif dalam sampel dengan menggunakan metode yang
sedang divalidasi. Zat aktif yang ditambahkan dalam masing-masing
sampel memiliki konsentrasi yang berbeda. Sampel disini adalah
campuran dari zat aktif dengan placebo (bahan pengisi fungsional).
c. Presisi
Presisi merupakan derajat keterulangan suatu kelompok data
hasil uji diantara hasil-hasil itu sendiri, dengan tujuan mengetahui
kesalahan akibat operator. Presisi dilakukan dengan pengukuran
ulang terhadap suatu sampel kemudian hasil pengukuran tersebut
dihitung Simpangan Baku Relatifnya (Relative Standard Deviation
(RSD)) dan dibandingkan dengan suatu range standar. Presisi dapat
dibagi dengan tiga tingkatan yaitu keterulangan ( repeatibility ),
ketertiruan ( Reproducibility ), presisi antara ( Intermediete Precission
) ( BPOM, 2003 ).
d. Linearitas
Pengujian Linearitas dilakukan dengan membuat kurva
linearitas untuk menentukan jangkauan keakuratan dari metode
tersebut. Kurva dibuat dengan cara memplot konsentrasi larutan
standar zat aktif dengan berbagai konsentrasi dengan luas area
sampel yang dihasilkan dari pembacaan alat. Bertambah naiknya
konsentrasi harus sebanding dengan besarnya/bertambah luasnya
area sampel. Semakin Linear kurva yang dihasilkan maka keakuratan
metode uji tersebut semakin baik.
e. Spesifitas
Parameter ini dilakuakn untuk membuktikan bahwa metode
yang digunakan mampu mendeteksi dan mengukur secara tepat dan
spesifik suatu analit atau zat aktif murni yang terdapat bersama
komponen lainnya dalam contoh ( CPOB, 2001 ).
15
f. Ketegaran (Robustness)
Ketegaran (Robustness) merupakan ukuran kemampuan
metode untuk tidak terpengaruh atau bertahan terhadap pengaruh
kecil. Pengaruh tersebut dilakukan secara sengaja dengan menbuat
variasi dalam faktor metode yang memberikan indikasi reabilitas
metode normal pada pengujian. Contoh perubahan atau variasi
parameter metode analisis adalah stabilitas larutan sampel. Apabila
pengukuran peka terhadap variasi kondisi analisis maka kondisi
tersebut harus dikendalikan atau harus berhati-hati terhadap kondisi
tersebut. Kesesuaian sistem harus ditetapkan pada evaluasi
ketegaran untuk menjamin keabsahan metode analisis tetap
terpelihara ketika digunakan (Jatnika, 2007).
2. Obat
Obat adalah suatu zat yang dimaksudkan untuk dipakai dalam
diagnosis, mengurangi rasa sakit, mengobati atau mencegah penyakit
pada manusia atau hewan (Ansel, 1989). Berdasarkan Surat Keputusan
Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 193/KabB.VII/71 memberikan
defenisi berikut obat ialah suatu bahan atau paduan bahan-bahan yang
dimaksudkan untuk digunakan dalam menetapkan diagnosis, mencegah,
mengurangkan, menghilangkan, menyembuhkan penyakit atau gejala
penyakit, luka atau kelainan badaniah dan rohaniah pada manusia atau
hewan dan untuk memperelok atau memperindah badan atau bagian
badan lainnya (Joenoes, 2001). Obat-obat yang digunakan dalam terapi
dapat dibagi dalam 4 (empat) golongan besar yaitu : Obat
farmakodinamis, Obat kemoterapeutis, Obat tradisional dan Obat
diagnosis (Tan Hoan Tjay dan Kirana Rahardja, 2007).
Berdasarkan mekanisme aksi dan efek penggunaannya, obat
dapat dipisahkan menjadi sebagai berikut:
1) Analgetik, merupakan obat yang dapat mengurangi atau
menghilangkan rasa nyeri tanpa menghilangkan kesadaran. Contoh:
asetaminofen, aspirin, dan kodein.
16
2) Antipiretik, merupakan obat yang dapat menurunkan suhu tubuh yang
tinggi. Contoh: asetaminofen, asam asetilsalisilat, metampiron,
salisilamid, dan asam mefenamat.
3) Antibiotik, merupakan obat yang mempunyai efek menekan atau
menghentikan suatu proses biokimia di dalam organisme, khususnya
dalam proses infeksi oleh bakteri. Contoh: ampisilin, penisilin,
rifampisin,dan tetrasiklin.
4) Antiinflamasi, merupakan obat yang dapat menghilangkan radang
yang disebabkan bukan karena mikroorganisme (non infeksi). Contoh:
aspirin, benorilat, piroksikam, fenilbutazon, ketoprofen.
5) Antitusif, merupakan obat yang digunakan untuk menekan batuk.
Contoh: dekstrometorfan hidrobromida.
6) Ekpektoran, merupakan obat yang digunakan untuk mempertinggi
sekresi dari saluran pernafasan atau mencairkan riak agar mudah
dikeluarkan. Contoh: amonium klorida, bromheksin hidroklorida,
gliseril guaiakolat.
7) Antihistamin, merupakan obat yang digunakan untuk melawan atau
memblokir pekerjaan histamin, dapat menyembuhkan adanya alergi,
dan anafilaktik, biasanya sebagian besar memiliki efek kantuk.
Contoh: CTM, prometazin HCl, difenhidramin HCl.
Berdasarkan bentuknya, sediaan obat dapat digolongkan menjadi
sediaan padat, cair, semi padat, dan gas.
1) Sediaan Padat
a) Serbuk (Pulvis)
Serbuk adalah campuran homogen kering dua atau lebih
obat yang dihaluskan, dapat berasal dari tumbuh-tumbuhan yang
dikeringkan secara alamiah maupun sejumlah kecil cairan yang
disebarkan secara merata pada campuran bahan padat yang
kering (Ansel, 1989).
b) Granul
Granul adalah gumpalan-gumpalan dari partikel-partikel
yang lebih kecil dengan diameter 2-4 µm dengan atau tanpa
17
vehikulum. Pada umumnya granul berbentuk tidak merata dan
menjadi seperti partikel tunggal yang lebih besar. Granul dapat
dibuat dengan cara melembapkan serbuk atau campuran serbuk
yang digiling dan melewatkan adonan yang sudah lembap pada
celah ayakan dengan ukuran lubang yang sesuai dengan ukuran
granul yang diinginkan. Contoh sediaan granul: obat-obat
laksansia (senokot granules) (Ansel, 1989).
c) Tablet
Tablet merupakan sediaan padat kompak yang dicetak
dalam bentuk tabung pipih atau sirkuler, kedua permukaannya
rata atau cembung. Mengandung satu jenis obat atau lebih
dengan atau tanpa bahan tambahan.
d) Kapsul (Capsulae)
Kapsul adalah sediaan padat yang terdiri dari satu atau
lebih macam obat dan bahan inert lainnya yang dimasukkan
dalam cangkang keras atau lunak yang dapat melarut. Biasanya
cangkang terbuat dari gelatin, metil selulosa, atau dari pati dan
bahan lain yang sesuai.
e) Pil (Pilulae)
Pil adalah sediaan padat yang berbentuk bulat,
mengandung satu atau lebih bahan obat dan dimaksudkan untuk
pemakaian secara oral. Pil biasanya memiliki berat 60-300 mg.
2) Sediaan Cair
a) Eliksir
Eliksir adalah sediaan obat berupa larutan dengan zat
aditif seperti gula, pengawet, pewangi, dan pewarna, sehingga
memiliki rasa dan bau yang sedap. Biasanya sebagai pelarut
digunakan etanol 90 % dan ditambahkan gliserol, sorbitol, dan
propilen glikol. (Sari, 2011)
b) Sirup
Sirup adalah sediaan obat berupa larutan pekat gula yang
biasanya ditambahkan sorbitol (polialkohol) dalam jumlah sedikit
untuk meningkatkan kelarutan bahan obat dan menghalangi
pembentukan hablur sukrosa. (Sari, 2011)
18
c) Emulsi
Emulsi adalah sediaan cair yang berupa campuran dari
dua fase cairan dalam sistem dispersi, fase cairan yang satu
terdispersi sangat halus dan merata dalam fase cairan lainnya.
Pada umumnya emulsi distabilkan oleh zat pengemulsi.
d) Suspensi
Suspensi adalah sediaan cair yang mengandung fase yang
terdiri dari partikel padat yang tidak larut terdispersi dalam fase
cair. Contoh: suspensi oral (susu), suspensi tetes telinga (guttae
auriculares).
e) Injeksi
Injeksi adalah sediaan obat steril yang berupa larutan,
emulsi, suspensi, atau serbuk yang harus dilarutkan terlebih
dahulu sebelum digunakan secara parental, disuntikkan melalui
kulit.
3) Sediaan Semi Padat
a) Salep
Salep adalah sediaan obat yang mengandung bahan obat
yang larut/ terdispersi dalam basis salep yang cocok. Basis salep
dapat dikelompokkan dalam basis hidrokarbon (vaselin, parafin),
salep absorpsi (lanolin), dan basis yang larut dalam air (polietilen
glikol).
b) Krim (Cremores)
Krim adalah bentuk sediaan obat yang mengandung satu
atau lebih bahan obat berupa emulsi minyak dalam air atau
dispersi mikrokristal asam-asam lemak atau alkohol rantai panjang
dalam air dan emulsi air dalam minyak sebagai pelunak dan
pencuci. Sebagai penstabil, biasanya ditambahkan antioksidan
dan zat pengawet, seperti nipagin-nipasol.
c) Gel (Jelly)
Gel adalah bentuk sediaan obat yang mengandung zat-zat
aktif dalam keadaan terlarut dalam basis, biasanya berupa
mucilago atau gum, berbentuk jernih dan tembus cahaya. Gel
pada umumnya lebih encer daripada salep dengan atau tanpa lilin.
19
d) Pasta
Pasta adalah bentuk sediaan obat yang terdiri dari satu
atau lebih bahan obat yang mengandung bahan padat 40-50 %
dan tidak memberikan rasa berminyak pada pemakaian secara
topikal.
4) Sediaan Gas
a) Aerosol
Aerosol adalah sediaan obat yang dikemas di bawah
tekanan, mengandung zat aktif obat yang dapat dilepas pada saat
sistem katup yang sesuai ditekan. Sediaan ini digunakan untuk
pemakaian topikal pada kulit dan juga untuk pemakaian lokal pada
hidung, mulut, atau paru-paru. Contoh: obat asma.
3. Tablet
Nama tablet (tabuletta atau tabletta) berasal dari “tabuletta‟ piring
pipih, papan tipis. Beberapa farmakope dijumpai penandaan tablet
sebagai kompressi (comprimere = dicetak bersama), juga sebagai
komprimat dan dengan demikian menunjukkan cara membuatnya. Tablet
adalah sediaan obat padat takaran tunggal. Tablet dicetak dari serbuk
kering, kristal atau granulat, umumnya dengan penambahan bahan
pembantu, pada mesin yang sesuai dengan menggunakan suatu tekanan
tinggi. Tablet dapat memiliki bentuk silinder, kubus, batang, dan bentuk
cakram, juga bentuk seperti telur atau peluru. Keberhasilan dimiliki bentuk
bundar, lebih atau kurang bentuknya cembung ganda atau bentuk
cakram. Besarnya garis tengah tablet pada umumnya 5-17 mm, bobot
tablet 0,1 – 1 gram (Voight, 1994).
Menurut Farmakope Indonesia edisi IV, tablet adalah sediaan
padat yang mengandung bahan obat dengan atau tanpa bahan pengisi.
Berdasarkan metode pembuatan, dapat digolongkan sebagai tablet cetak
dan tablet kempa. Tablet cetak dibuat dengan cara menekan massa
serbuk lembab dengan tekanan rendah ke dalam cetakan. Tablet kempa
dibuat dengan memberikan tekanan tinggi pada serbuk atau granul
menggunakan cetakan baja (tahan karat) (Agoes, 2008).
Tablet dapat berbentuk rata atau cembung rangkap, umumnya
bulat, mengandung satu jenis obat atau lebih dengan atau tanpa zat
20
tambahan. Zat tambahan yang digunakan dapat berfungsi sebagai zat
pengisi, zat pengembang, zat pembasah. Tablet dapat digunakan untuk
tujuan pengobatan lokal atau sistemik. Tablet yang berbentuk kapsul
umumnya disebut kaplet. Berbagai bentuk khusus tablet dimaksudkan
untuk menghindari, mencegah, atau mempersulit pemalsuan dan agar
mudah dikenal orang (Syamsuni, 2006).
Tablet sangat baik disimpan dalam wadah yang tertutup rapat
ditempat yang kelembabannya rendah, serta terlindung dari temperatur
yang tinggi. Tablet khusus yang cenderung hancur bila kena lembab
dapat disertai dengan pengering dalam kemasannya. Tablet yang dapat
rusak oleh cahaya disimpan dalam wadah yang dapat menahan
masuknya sinar / cahaya agar dapat bertahan lebih lama (Ansel, 1989).
a. Keunggulan Bentuk Sediaan Tablet
Tablet merupakan salah satu bentuk sediaan farmasi yang sangat
populer, dimana hampir sebagian besar bentuk sediaan farmasi
terdapat dalam bentuk tablet. Hal ini didukung oleh beberapa
keunggulan yang dimiliki oleh tablet, yaitu :
a) Tablet merupakan bentuk sediaan yang utuh dan menawarkan
kemampuan terbaik dari semua bentuk sediaan oral untuk
ketepatan ukuran serta variabilitas kandungan yang paling rendah.
b) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling ringan dan
paling kompak.
c) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling mudah dan
murah untuk dikemas serta dikirim.
d) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang ongkos
pembuatannya paling rendah.
e) Pemberian tanda pengenal produk pada tablet paling mudah dan
murah, tidak memerlukan langkah pekerjaan tambahan bila
menggunakan permukaan pencetak yangbermonogram atau
berhiasan timbul.
f) Tablet paling mudah ditelan serta paling kecil kemungkinan
tertinggal ditenggorokan terutama bila bersalut yang
memungkinkan pecah atau hancurnya tablet tidak segera terjadi.
21
g) Tablet bisa dijadikan produk dengan profil pelepasan seperti
pelepasan di usus atau produk lepas lambat.
h) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling mudah
diproduksi dalam skala besar.
i) Tablet merupakan sediaan solid oral yang memiliki sifat
pencampuan kimia, mekanik, dan stabilitas mikroorganisme yang
paling baik (Lachman dkk, 2008)
b. Kelemahan Bentuk Sediaan Tablet
Adapun beberapa kelemahan dari bentuk sediaan obat
sebagai tablet adalah sebagai berikut:
a. Beberapa obat tidak dapat dikempa menjadi padat dan kompak,
tergantung pada keadaan amorfnya, flokulasi, atau rendahnya
berat jenis.
b. Obat yang sukar dibasahkan, lambat melarut, dosisnya cukup
tinggi, absorbs optimumnya tinggi melalui saluran cerna atau
setiap kombinasi dari sifat diatas, akan sukar larut atau tidak
mungkin diformulasi dan dipabrikasi dalam bentuk tablet yang
masih menghasilkan bioavaibilitasobat cukup.
c. Obat yang rasanya pahit, obat dengan bau yang tidak dapat
dihilangkan, atau obat yang peka terhadap oksigen atau
kelembapan udara perlu pengapsulan atau penyalutan terlebih
dahulu. Pada jalan ini kapsul dapat merupakan jalan keluar terbaik
serta lebih murah (Lachman dkk, 2008).
c. Bahan tambahan pada tablet
Untuk membuat obat dalam bentuk sediaan tablet, diperlukan
beberapa jenis zat tambahan berupa:
a) Zat pengisi, dimaksudkan untuk memperbesar volume tablet.
Biasanya digunakan saccharum lactis, amylum manihot, calcii
phospas, calcii carbonas, dan zat lain yang cocok.
b) Zat pengikat dimaksudkan agar tablet tidak pecah atau retak, dan
dapat merekat. Zat pengikat memberikan daya adhesi pada
massa serbuk sewaktu granulasi dan pada tablet kempa serta
22
menambah daya kohesi yang telah ada pada bahan pengisi. Zat
pengikat dapat ditambahkan dalam bentuk kering, tetapi lebih
efektif jika ditambahkan dalam larutan.
c) Zat penghancur, dimaksudkan agar tablet dapat hancur dalam
perut. Biasanya yang digunakan adalah manthot kering,
gelatinum, agar-agar, natrium alginate.
d) Zat pelican, dimaksudkan agar tablet tidak lekat pada cetakan.
Senyawa asam stearate dengan logam, asam stearate, minyak
nabati terhidrogenasi, dan talk digunakan sebagai zat pelican. Zat
pelican pada umumnya bersifat hidrofobik sehingga cenderung
menurunkan kecepatan disintegrasi dan disolusi tablet. Oleh
karena itu penambahan zat pelican tidak boleh terlalu banyak.
e) Bahan-bahan pembantu seperti zat pewarna, zat perasa dan zat
pemanis. Zat pewarna yang diizinkan sering ditambahkan pada
formulasi tablet untuk menambah nilai estetik atau untuk identitas
produk. Kebanyakan zat pewarna peka terhadap cahaya dan
warnanya akan memudar jika terpapar cahaya. (Wisnu, 2014)
d. Pembuatan tablet
Dalam pembuatan tablet, zat aktif dan zat-zat lain (kecuali
bahan pelicin) dibuat granul (butiran kasar) terlebih dahulu karena
serbuk halus tidak mengisi cetakan tablet dengan baik makan dibuat
granul agar mudah mengalir mengisi cetakan serta menjaga agar
tablet tidak mudah retak (Anief, 1994).
Granulasi adalah proses yang bertujuan untuk meningkatkan
kemampuan mengalir serbuk dengan jalan membentuk bulatan-
bulatan atau agregat-agregat dalam bentuk beraturan yang disebut
granul (Lachman dkk, 2008). Cara membuat granul ada 2 macam
(Anief 1994), yaitu:
1. Cara basah
Pembuatan granul cara basah dilakukan dengan cara zat
aktif, zat pengisi, dan zat penghancuran dicampur baik-baik, lalu
dibasahi dengan larutan bahan pengikat, bila perlu ditambah
bahan pewarna. Cara penambahan bahan pengikat tergantung
23
pada kelarutannya dan tergantung pada komponen campuran.
Setelah itu diayak menjadi granul dan dikeringkan dalam lemari
pengering pada suhu 40o-50o C. Setelah kering diayak kembali
uantuk memperoleh granul dengan ukuran yang diperlukan dan
ditambahkan bahan pelican dan dicetak menjadi tablet dengan
mesin tablet.
2. Cara kering atau disebut slugging atau pre compression.
Pembuatan granul dengan cara kering dilakuan dengan
cara zat aktif, zat pengisi, zat penghancur, bila perlu zat pengikat
dan zat pelican dicampur dan dibuat dengan cara kempa atau
cetak (slugging). Setelah itu tablet yang terbentuk dipecah menjadi
granul lalu diayak, lalu akhirnya tablet dapat dicetak.
Berdasarkan metode pembuatannya, tablet dapat
digolongkan sebagai tablet cetak dan tablet kempa. Sebagian
besar tablet dibuat dengan cara pengempaan dan merupakan
bentuk sediaan yang paling banyak digunakan. Tablet kempa
dibuat dengan cara memberikan tekanan tinggi pada serbuk atau
granul menggunakan cetakan baja. Tablet dapat dibuat dalam
berbagai ukuran, bentuk, dan penandaan permukaan tergantung
pada desain cetakan. Tablet berbentuk kapsul umumnya disebut
Kaplet. (Departemen Kesehatan RI, 1995).
Tablet cetak dibuat dengan cara menekan massa serbuk
lembab dengan tekanan rendah kedalam lubang cetakan.
Kepadatan tablet tergantung pada ikatan Kristal yang terbentuk
selama proses pengeringan selanjutnya dan tidak tergantung
pada kekuatan tekana yang diberikan (Departemen Kesehatan RI,
1995). Tablet yang dibuat dengan cara cetak biasanya lebih lunak
dibandingkan dengan yang dibuat dengan cara pengempaan,
sehingga tablet semacam itu akan lebih mudah larut (Lachman
dkk, 2008).
Untuk maksud dan tujuan tertentu, tablet biasanya disalut
dengan zat penyalut yang cocok, biasanya berwarna ataupun
tidak. Tablet disalut untuk berbagai alasan, antara lain melindungi
zat aktif dari udara, kelembapan ataupun cahaya, menutupi rasa
24
dan bau yang tidak enak, membuat penampilan lebih baik, dan
mengatur tempat pelepasan obat dalam saluran cerna. Berikut ini
adalah macam-macam tablet yang disalut:
1. Tablet bersalut gula. Tablet ini sering disebut dragee.
Penyalutan dilakukan dengan larutan gula dalam bejana
penyalutan untuk mengkilapkan yang diputar dengan motor
penggerak yang dilengkapi dengan alat penghisapdan sistem
penghembus udara panas.
2. Tablet bersalut kempa. Tablet inti yang sudah jadi mengalami
proses seperti, yaitu granul halus dan kering dikempa disekitar
tablet inti. Tablet seperti ini sering disebut tablet dalam tablet.
Tablet salut kempa lebih sepat proses pembuatannya dan
lebih ekonomis. Tetapi proses pembuatannya harus bebas
lembap serta tidak terjadi inkompati bilitas tablet karena
lembap.
3. Tablet bersalut selaput. Tablet ini dilapisi oleh lapisan tipis
dengan penyalut yang dikenakan atau disemprotkan pada
tablet.
4. Tablet bersalut enterik. Tablet ini adalah tablet yang disalut
dengan zat penyalut yang relatif tidak larut dalam asam
lambung tetapi larut dalam usus halus. Penyalutan enterik
dimaksudkan:
a) Agar obat tidak mengiritasi perut
b) Dikehendaki agar obat berkhasiat dalam usus.
c) Menghindari obat menjadi inaktif dalam cairan lambung,
yaitu karena pH rendah atau dirusak enzim digestif dalam
perut.
e. Penyimpanan Tablet
Penyimpanan tablet dilakukan dalam wadah tertutup rapat,
ditempatkan pada tempat yang sejuk dan terlindung cahaya. Wadah
yang digunakan harus diberi etiket. Dalam etiket wadah atau kemasan
25
tablet harus disebutkan nama tablet atau nama zat aktifnya dan
jumlah atau zat-zat yang berkhasiat dalam tiap tablet (Anief, 1994).
4. Uji Disolusi
a. Prinsip Uji Disolusi
Uji disolusi merupakan parameter penting dalam pengukuran
bioavailabilitas obat. Bioavailabilitas sendiri adalah persentase obat
yang mencapai sirkulasi sistemik dalam keadaan utuh/ aktif. Uji
disolusi didefenisikan sebagai proses suatu zat padat masuk ke
dalam pelarut menghasilkan suatu larutan. Secara sederhana,
disolusi adalah proses zat padat melarut. Secara prinsip, proses ini
dikendalikan oleh afinitas antara zat padat dan pelarut (Ansel, 1989).
Berdasarkan aspek farmakokinetik, obat yang masuk ke dalam
tubuh melalui berbagai cara pemberian akan mengalami proses
absorpsi, dan selanjutnya masuk ke dalam sirkulasi sistemik untuk
didistribusikan ke seluruh tubuh, sehingga dapat diperoleh efek terapi
yang diinginkan. Sebelum mengalami proses absorpsi, sediaan obat
yang diberikan secara oral di dalam saluran cerna harus mengalami
proses pelepasan dari sediaannya kemudian zat aktifnya akan
melarut. Kecepatan melarutnya zat aktif dari sediaan obat pada
waktu tertentu dalam kondisi tertentu (cairan lambung/ usus) disebut
dengan laju disolusi. Proses pelepasan zat aktif obat dari sediaannya
sangat dipengaruhi oleh sifat fisika dan kimia zat tersebut serta
formulasi sediaannya. Salah satu sifat zat aktif yang penting ialah
kelarutannya dalam saluran cerna. Oleh karena itu, salah satu usaha
untuk meningkatkan ketersediaan hayati suatu sediaan adalah
dengan meningkatkan kelarutan zat aktifnya. (Astuti dkk, 2007)
Obat yang telah memenuhi persyaratan kekerasan, waktu
hancur, keregasan, keseragaman bobot, dan penetapan kadar, belum
dapat menjamin bahwa suatu obat memenuhi efek terapi, karena itu
uji disolusi harus dilakukan pada setiap produksi tablet atau kapsul.
Uji disolusi adalah proses pemindahan molekul obat dari bentuk padat
kedalam larutan pada suatu medium. Uji disolusi menunjukkan jumlah
bahan obat yang terlarut dalam waktu tertentu. Uji disolusi
menggambarkan efek obat secara in vitro, jika disolusi memenuhi
26
syarat maka diharapkan obat akan memberikan khasiat secara in vitro
(Syukri, 2002).
Adapun tahapan disolusi obat dalam tubuh dapat dilihat dalam
gambar di bawah ini:
Gambar 2 Tahapan Penguraian Obat
Gambar 3 Tahapan Penguraian Obat di dalam Tubuh
b. Metode Uji Disolusi
Dalam United State Pharmacopeia cara pengujian disolusi
tablet dan kapsul dinyatakan dalam masing-masing monografi obat.
Disolusi merupakan pengujian yang objektif dalam hal menetapkan
sifat disolusi suatu obat yang berada dalam sediaan padat. Karena
kemampuan absorbs obat dipengaruhi oleh kemampuan melarutnya
obat dalam tubuh, maka uji disolusi merupakan pengujian yang harus
dilakukan untuk mengetahui kemampuan melarutnya obat dalam
tubuh (Ansel, 2008).
27
Secara singkat, alat untuk menguji karakteristik disolusi dan
sediaan padat kapsul atau tablet terdiri dari:
1. Motor pengaduk dengan kecepatan yang dapat diubah.
2. Keranjang baja stainless berbentuk silinder atau dayung untuk
ditempelkan ke ujung pengaduk
3. Bejana dari gelas atau bahan lain yang inert dan transparan
dengan volume 1000 mL, bertutup dan di tengah-tengahnya ada
tempat untuk menempelkan pengaduk da nada lubang tempat
masuk pada tiga tempat, dua untuk memindahkan sampel dan
satu untuk menempatkan termometer.
Berdasarkan United State Pharmacopeia, metode pengujian
laju disolusi yang digunakan dan dikembangkan adalah sebagai
berikut:
1) Metode Keranjang (Rotating Basket)
Alat ini terdiri dari bejana (vessel) bertutup yang terbuat
dari gelas atau bahan lain yang inert dan transparan dengan
volume 1000 ml, motor penggerak dengan kecepatan yang dapat
diatur, dan keranjang baja stainless berbentuk silinder. Bejana
direndam dalam penangas air yang sesuai untuk menjaga
temperatur pada media disolusi di dalam bejana pada 37 ± 0,5 ºC
selama pengujian. Tinggi bejana dengan volume 1 liter ialah 160-
210 mm dan diameter bagian dalam berukuran 98-106 mm,
berbentuk silinder dengan dasar hemisferik, serta memiliki tutup
yang terdapat lubang untuk pengaduk, termometer, dan tempat
memasukkan sampel. Sedangkan keranjang baja memiliki
diameter ± 1 inci dengan tinggi 1,375 inci, dan ukuran kasa 40
mesh yang dihubungkan ke motor penggerak oleh suatu tiang
silinder, serta dapat diputar dengan kecepatan antara 25-150 rpm.
(USP-NF 34, 2011)
Sebuah tablet atau kapsul diletakkan dalam keranjang
saringan stainless dan dicelupkan ke dalam media disolusi (sesuai
dalam monografi) yang terdapat dalam bejana 900-1000 ml.
Keranjang stainless dihubungkan kepada sebuah motor yang
kecepatannya konstan sesuai monografi selama pengukuran.
28
Suhu media di dalam bejana dipertahankan pada 37 ± 0,5 ºC.
Jarak antara bagian bawah bejana dengan keranjang di dalamnya
ialah 25 ± 2 mm. Pada waktu tertentu sampel pada media disolusi
diambil untuk analisis kimia dari bagian obat yang terlarut. (Wati,
2012)
Gambar 4 Alat disolusi metode basket
2) Metode Dayung (Paddle Apparatus)
Pada metode dayung pada dasarnya sama dengan
metode keranjang, hanya saja fungsi keranjang saringan stainless
diganti dengan dayung (paddle) untuk mengaduk sediaan obat.
Dayung yang digunakan berbentuk seperti pisau dan terdiri dari
tongkat sebagai elemen pengaduk. Sediaan obat dibiarkan
tenggelam ke dasar bejana berisi media disolusi sebelum diaduk
pada 37 ± 0,5 ºC.
29
Gambar 5 Alat disolusi metode paddle
c. Media Uji Disolusi
Media disolusi yang biasanya digunakan dalam pengujian,
yaitu sebagai berikut:
1) Air suling biasa digunakan untuk bahan aktif yang kelarutannya
tidak begitu dipengaruhi oleh pH.
2) Larutan ionik merupakan media yang paling banyak digunakan,
karena lebih mendekati cairan saluran pencernaan yang menjadi
tempat larutnya bahan aktif obat dalam tubuh, contohnya: larutan
HCl 0,1 N (pH= 1,2), larutan buffer dengan beragam nilai pH
sesuai dengan nilai pH cairan pada saluran pencernaan.
30
5. Natrium Diklofenak
a. Uraian Bahan
Gambar 6 Rumus Bangun Na Diklofenak
1) Rumus molekul: C14H10Cl2NNaO2
2) Berat molekul: 318,13
3) Nama kimia: asam benzeneasetat, 2-[(2,6-diklorofenil)amino]-
monosodium
4) Nama lain: Sodium [o-(dikloroanilino)fenil]asetat
5) Pemerian: serbuk hablur, berwarna putih, tidak berasa (USP 30
NF 25, 2007).
6) Kelarutan : Sedikit larut dalam air, larut dalam alkohol; praktis
tidak larut dalam kloroform dan eter; bebas larut dalam alkohol
metil. pH larutan 1% dalam air adalah antara 7.0 dan 8.
(Sweetman, 2009).
7) pKa : 4,2 (Moffat, 2005)
b. Farmakologi Natrium Diklofenak
Natrium Diklofenak adalah senyawa turunan asam fenilasetat.
Natrium Dikofenak yang biasa disebut Kaflam, merupakan obat
golongan AINS (Anti Inflamasi Non Steroid). Obat-obatan jenis AINS
sudah dikenal luas di dunia kedokteran yang digunakan sebagai obat
analgesic, antiinflamasi, dan antipiretik (Neal, M.J., 2006). Analgesik
atau analgetik adalah obat yang digunakan untuk mengurangi atau
menghilangkan rasa sakit atau obat-obat penghilang nyeri tanpa
mengurangi atau menghilangkan kesadaran. Antipiretik adalah obat
yang berkhasiat menurunkan suhu tubuh, dari suhu yang tinggi
menjadi kembali normal. Anti inflamasi adalah obat yang dapat
31
menghilangkan radang yang disebabkan bukan karena
mikroorganisme (non infeksi).
Obat yang termasuk dalam turunan diklofenak sampai saat ini
dianggap lebih aman dan bereaksi lebih cepat dibandingkan dengan
ibuprofen dan aktif lebih lama di dalam tubuh dibandingkan dengan
parasetamol. Obat golongan diklofenak merupakan COX-inhibitor
nonselektif yang bekerja dengan menghambat enzim siklooksigenase
(COX). Enzim siklooksigenase berpean dalam produksi sejumlah zat
kimia dalam tubuh, salah satunya prostaglandin. Prostaglandin ini
diproduksi oleh tubuh sebagai respon dari cedera sehingga syaraf
akan lebih sensitif terhadap rasa nyeri (Gunawan, 2009). Reaksi di
bawah ini merupakan reaksi pembentukan prostaglandin.
Gambar 7 Pembentukan Prostaglandin
Natrium diklofenak diabsorbsi secara maksimal di dalam tubuh
setelah pemberian peroral dengan kadar maksimal dalam plasma
pada waktu 2 – 3 jam. Obat ini 99% terikat pada protein plasma.
Metabolisme sebagian besar terjadi di dalam hati dan metabolit-
metabolitnya diekskresikan dalam urin sebesar 65% dan di dalam
empedu sebesar 35%.
Obat –obat AINS bekerja dengan cara menghambat sintesis
prostaglandin. Prostaglandin sendiri adalah suatu senyawa dalam
tubuh yang merupakan mediator nyeri dan radang/inflamasi.
Prostaglandin terbentuk dari asam arakidonat pada sel-sel tubuh
dengan bantuan enzim siklooksigenase (COX). Dengan
penghambatan pada enzim COX, maka prostaglandin tidak terbentuk,
dan nyeri atau radang dapat diatasi. COX itu sendiri ada dua jenis,
32
yaitu disebut COX-1 dan COX-2. COX-1 selalu ada dalam tubuh
secara normal, untuk membentuk prostaglandin yang dibutuhkan
yang dibutuhkan oleh proses-proses normal tubuh, antara lain
memberikan efek perlindungan terhadap mukosa lambung.
Sedangkan COX-2, adalah enzim yang terbentuk hanya pada saat
terjadi peradangan atau cedera, yang menghasilkan prostaglandin
yang menjadi mediator nyeri/radang. Jadi, sebenarnya yang perlu
dihambat hanyalah COX-2 saja yang berperandalam peradangan,
sedangkan COX-1 semestinya tetap dipertahankan. Tetapi,
kebanyakan obat AINS bersifat tidak selektif sehingga akan
menghambat enzim COX-1 dan COX-2 sekaligus (Gunawan, 2009).
Sehingga obat ini bersifat dapat menghambat pembentukan
prostaglandin pada peradangan sehingga dapat meredakan rasa
nyeri, namuan juga dapat menghambat pembentukan prostaglandin
yang dibutuhkan untuk melindungi mukosa lambung (Herlambang,
2014).
c. Efek Samping
Efek samping yang dapat terjadi meliputi distres
gastrointestinal, pendarahan gastrointestinal dan timbulnya ulserasi
lambung, sekalipun timbulnya ulkus lebih jarang terjadi daripada
dengan beberapa antiinflamasi non-steroid (AINS) lainnya.
Peningkatan serum aminotransferases lebih umum terjadi dengan
obat ini daripada dengan AINS lainnya. (Katzung, 2002).
d. Sediaan
Oral 3 kali sehari 25-50 mg garam-Na/K, rektal 1 kali sehari
50-100 mg, i.m. pada nyeri kolik atau serangan encok: 1-2 kali sehari
75 mg selama 1-3 hari. Pra dan pasca bedah dalam tetes mata 0,1%
3-5x 1 tetes, juga dalam krem/gel 1% (Tjay dan Rahardja, 2007).
e. Dosis
Dalam perdagangan natrium diklofenak tersedia dalam bentuk
tablet setara 25 mg, 50 mg dan 100 mg, tablet salut enterik setara 50
mg, injeksi setara 25 mg/ml, 75 mg/ml, supositoria setara 50 mg, 100
mg, dan gel setara 10 mg/g (ISO, 2007).
33
6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
1) Sejarah Singkat Kromatografi
Proses kromatografi ditemukan pertama kalinya oleh Michael
Tswett yang pada tahun 1906 berhasil melakukan pemisahan klorofil
dari ekstrak tumbuh-tumbuhan didalam kolom kalsium karbonat
menggunakan pelarut petroleum eter.
Tswett menempatkan ekstrak hijau daun tersebut pada bagian
atas kolom dan kemudian kedalam kolom tadi dituangkan petroleum
eter. Petroleum eter mengalir berdasarkan gaya gravitasi bumi.
Sambil bergerak, petroleum eter membawa serta komponen-
komponen hijau daun tadi melalui kolom dan masing-masing
komponen bergerak dengan kecepatan berbeda. Terjadilah
pemisahan dari komponen-komponen ekstrak hijau daun tersebut
didalam kolom, berupa pita-pita berwarna.
Gejala ini menyebabkan proses pemisahan diatas disebut
kromatografi. Nama kromatografi berasal dari dua kata yunani, kroma
yang berarti warna dan grafi yang berarti menulis. Tetapi timbulnya
warna tidak merupakan syarat mutlak agar suatu proses dapat
digolongkan kedalam kromatografi. Dalam perkembangannya, jenis-
jenis kromatografi makin banyak ditemukan dengan teknik pemisahan
yang berdeda-beda.
2) Perkembangan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Pada tahun 1941, karya Archer John Porter Martin dan
Richard Laurence Millington Synge yang membahas mengenai sistem
kromatografi gas membuahkan hadiah nobel. Hal inilah yang
membuat sistem kromatografi gas makin berkembang. Syarat utama
suatu sampel dapat dianalisis dengan kromatografi gas ialah harus
dapat dijadikan uap pada suhu kerja kolom. Namun pada
kenyataannya banyak senyawa yang tidak dapat dijadikan uap
bahkan tidak dapat dipanaskan, seperti bahan farmasi, protein,
polimer, dan zat warna. Oleh karena itu, diperlukan sebuah teknik
34
pemisahan beresolusi tinggi untuk menutupi kelemahan dari sistem
kromatografi gas.
Pada akhir tahun 1960-an, semakin banyak usaha dilakukan
untuk pengembangan kromatografi cair. Sistem kromatografi cair
yang dikembangkan merupakan perbaikan dari kinerja kromatografi
cair sebelumnya yang umumnya memiliki efisiensi kolom yang rendah
dan waktu pemisahan yang lama. Kromatografi cair sederhana, dalam
praktek ditampilkan dalam kolom gelas berdiameter besar, pada
dasamya dibawah kondisi atmosfer. Csaba Horvath pada tahun 1967
telah berhasil menyusun sebuah sistem kromatografi cair modern. Ia
melakukan analisis terhadap senyawa nukleotida .
Pada waktu yang sama sebuah kolom dengan ukuran mikro
juga telah ditemukan. Sehingga penggabungan dua penemuan ini
menghasilkan sebuah sistem kromatografi cair modern beresolusi
tinggi, berkecepatan tinggi, bertekanan tinggi, berkinerja tinggi
sehingga dinamakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Alasan pengembangan kromatografi cair modern ini ialah
dengan mempertimbangkan faktor penghambat perkembangan
kromatografi cair sebelumnya. Hal tersebut ialah mengenai
penurunan kecepatan difusi yang signifikan antara fase-fase
kromatografi jika digunakan fase gerak (mobile phase) berupa cairan.
Untuk meningkatkan kecepatan transfer massa dan kecepatan
kesetimbangan antara fase diam dan fase gerak, dapat dilakukan
dengan membuat partikel fase diam sekecil mungkin. Namun dengan
ukuran partikel fase diam yang sangat kecil, maka diperlukan suatu
sistem tekanan tinggi yang dapat mendorong cairan melewati kolom.
3) Kegunaan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Saat ini KCKT digunakan untuk pemisahan sejumlah senyawa
organik, anorganik, senyawa biologis, polimer alami dan sintetis,
analisis impuritis suatu zat, analisis formulasi industri farmasi, analisis
senyawa-senyawa non volatil, analisis molekul-molekul netral, ionik,
maupun zwitter ion, pemisahan senyawa yang strukturnya hampir
sama, serta pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah sedikit (trace
element) maupun dalam jumlah banyak. KCKT merupakan metode
35
yang tidak dekstruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis
kualitatif maupun kuantitatif.
Pada penerapannya KCKT sering kali digunakan untuk
analisis asam-asam amino, asam-asam nukleat, senyawa aktif obat,
produk sampingan suatu proses sintetis, atau produk-produk
degradasi dalam sediaan farmasi, monitor sampel-sampel lingkungan,
pemurnian senyawa dalam suatu campuran, memisahkan polimer dan
menentukan distribusi berat molekulnya dalam suatu campuran, serta
sebagai kontrol kualitas. Namun KCKT juga memiliki keterbatasan
yaitu jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit
diperoleh.
4) Keunggulan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
KCKT memiliki banyak keuntungan dibandingkan kromatografi
cair klasik, yaitu:
1) Waktu analisis relatif lebih cepat
Waktu analisis umumnya kurang dari 1 jam. Untuk analisis
senyawa yang tidak rumit dapat dilakukan kurang dari 5 menit.
Pada umumnya analisis sering dilakukan dalam 15-30 menit.
2) Sensitivitas Detektor
Detektor pada KCKT yang biasa digunakan yaitu detektor
absorbansi UV-VIS dapat mendeteksi berbagai senyawa dalam
jumlah nanogram (10-9 g). Detektor fluoresensi dan elektrokimia
dapat mendeteksi dalam jumlah pikogram (10-12g).
3) Kolom dapat digunakan kembali
Berbeda dengan kromatografi cair klasik, kolom pada
KCKT dapat digunakan kembali. Banyak analisis dapat dilakukan
dengan kolom yang sama. Akan tetapi, kolom tersebut turun
mutunya bergantung pada jenis analit yang disuntikkan,
kemurnian pelarut, dan jenis pelarut yang digunakan.
4) Pemisahan Molekul Besar dan Ion
Molekul besar tidak bisa dipisahkan dengan kromatografi
gas karena volatilitasnya yang rendah. Sedangkan untuk analisis
ion, biasanya pada kromatografi gas menggunakan senyawa
36
turunannya. KCKT dengan mekanisme pemisahan eksklusi dan
penukar ion ideal untuk memisahkan molekul besar dan ion.
5) Mudah memperoleh cuplikan kembali
Sebagian besar detektor yang digunakan pada KCKT tidak
bersifat dekstruktif sehingga komponen sampel dapat
dikumpulkan kembali dengan mudah ketika melewati detektor.
Untuk memperoleh cuplikan kembali biasanya pelarut dihilangkan
dengan penguapan.
5) Prinsip Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Sampel yang akan dianalisis secara KCKT dipisahkan dari
komponen sampel lainnya berdasarkan perbedaan distribusi
komponen antara fase diam dan fase gerak. Sejumlah kecil sampel
masuk ke dalam kolom pemisahan bersama aliran fase gerak.
Kecepatan elusi sampel tergantung pada perbedaan polaritasnya
dengan fase diam dalam kolom. Sehingga dapat dikatakan
mekanisme pemisahan yang terjadi dalam sistem KCKT ditentukan
oleh jenis kolom yang digunakan. Dibandingkan dengan kromatografi
gas, KCKT memiliki mekanisme pemisahan lebih banyak, terdapat
kemudahan untuk mengubah secara radikal sifat kimia dan kekuatan
elusi dari fase gerak, dan fase penunjang, serta dapat diikatkan
dengan lapisan sangat tipis bersifat polar atau nonpolar.
Waktu elusi suatu komponen sampel hingga keluar peak
komponen dalam kromatogram yang disebut dengan waktu retensi
(tR), bersifat spesifik untuk setiap komponen, sehingga dapat
digunakan untuk identifikasi suatu komponen. Selanjutnya dapat
dilakukan analisis kualitatif maupun kuantitatif terhadap komponen
sampel yang diinginkan dengan membandingkannya terhadap larutan
standar. Sampel yang mengandung banyak komponen di dalamnya
maka akan muncul banyak peak dalam kromatogram. Bahkan tak
jarang peak - peak yang muncul dapat saling bertumpuk (overlap).
Hal ini dapat menyulitkan proses identifikasi dan analisis komponen
sampel. Oleh karena itu, dalam KCKT ini diperlukan tahapan
preparasi yang baik agar komponen sampel dapat terpisahkan, dan
tidak terganggu oleh impuritis lainnya.
37
Proses elusi (pemisahan) dapat dilakukan baik secara
isokratik maupun elusi gradien. Cara isokratik ialah apabila
pemisahan menggunakan satu jenis pelarut dalam keadaan konstan
atau komposisi fase gerak tetap selama proses elusi. Sedangkan
elusi gradien ialah apabila komposisi fase gerak berubah-ubah
selama proses elusi. Biasanya elusi gradien digunakan untuk
meningkatkan resolusi pemisahan suatu campuran kompleks yang
memiliki kisaran polaritas yang luas.
f. Mekanisme Pemisahan dalam Sistem KCKT
Pemisahan dalam sistem KCKT dapat dilakukan dengan fase
normal maupun fase terbalik. Fase normal menunjukkan fase diam
yang digunakan lebih polar dibandingkan dengan fase geraknya.
Sebaliknya fase terbalik menunjukkan fase diamnya kurang polar
dibandingkan fase geraknya. Berdasarkan pada kedua pemisahan ini,
sering kali KCKT dikelompokkan menjadi KCKT fase normal dan
KCKT fase terbalik.
Selain klasifikasi di atas, KCKT juga dapat dikelompokkan
berdasarkan pada sifat fase diam dan atau berdasarkan pada
mekanisme interaksi komponen dengan fase diam, yaitu Pemisahan
cara Adsorpsi, Fase terikat, Penukar ion, dan Eksklusi (Arifin, 2014).
38
g. Instrumentasi KCKT
KCKT mempunyai prinsip yaitu pemisahan komponen dari
suatu campuran yang didasarkan pada perbedaan
interaksi/kecepatan migrasi komponen (polar dan non polar) terhadap
dua fasa, fasa gerak (eluent) dan fasa diam .
Gambar 8 Instrumentassi KCKT
1) Penampung Fase Gerak (Chamber)
Penampung eluen harus digunakan suatu wadah yang
tahan terhadap pelarut-pelarut organik/pelarut buffer lainnya.
Biasanya wadah ini digunakan erlenmeyer atau botol yang
dilengkapi dengan penutup dari teflon atau plastik.
2) Pompa
Pompa berfungsi untuk mengalirkan eluen ke dalam
kolom. Semua penghubung dalam sistem kromatografi harus
terbuat dari bahan yang secara kimiawi tahan terhadap fase
gerak. Bahan yang umum digunakan adalah gelas, baja, teflon,
dan batu nilam. Pada sistem kromatografi cair yang relatif murah
membutuhkan pompa yang baik. Syarat-syarat pompa yang baik
antara lain:
a) Dapat memompa fasa gerak secara konstan (0,1-10
mL/menit).
b) Dapat memberikan tekanan yang cukup tinggi.
c) Stabil/ tekanan bisa diatur.
39
d) Memberikan gangguan noise yang rendah, tidak berdenyut,
dan fluktuasi tekanan seminimal mungkin.
e) Cara kerja sederhana.
f) Cukup inert terhadap pelarut-pelarut umum yang digunakan.
Ada tiga jenis pompa yang digunakan dalam sistem HPLC,
yaitu :
a) Pompa resiprokating
b) Pompa sistem pergantian (displacement pump)
c) Pompa tekanan udara (pnumatic pump)
Pompa yang umum digunakan dalam HPLC adalah tipe
resiprokating (pompa dengan tekanan balik). Pompa ini
menghasilkan pulse sehingga ditambah dengan alat pulse damper
sehingga tidak berdenyut. Ada dua tipe resiprocating yaitu tipe
piston tunggal dan tipe piston ganda. Biasanya tekanan maksimal
yang dihasilkan pompa HPLC sekitar ± 5000 psi. (Arifin, 2014)
3) Injektor
Injektor adalah alat yang digunakan untuk memasukan
contoh yang akan dianalisis. Sistem injeksi sampel merupakan
keterbatasan dari sistem kromatografi cair. Masalah ini
menyebabkan pelebaran puncak sebagai akibat kolom yang
kelebihan kapasitas. Sebagai akibatnya volume injeksi harus
dibatasi hingga kisaran maksimum 500µl. Ada dua sistem
pemasukan sampel :
a) Sistem septum (menggunakan syring). Syiring yang digunakan
harus memiliki kemampuan melawan tekanan 1500 psi. Aliran
diberhentikan sementara saat injeksi dan dikembalikan setelah
sampel masuk ke aliran fasa gerak.
b) Sistem loop (loop sampler), sampel dimasukan kedalam alat
dengan bantuan komputer. Kapasitas dari sistem loop sampler
ini beragam, berkisar antara 0,5 hingga 500µL.
40
4) Kolom
Kolom merupakan tempat pemisahan zat dari komponen-
komponen yang dianalisis. Kolom merupakan jantung dari HPLC,
keberhasilan atau kegagalan suatu analisis tergantung dari
pemilihan yang tepat untuk sampel yang akan dianalisis. Kolom
secara umum dibuat dari bahan tabung stainless steel, walaupun
untuk tekanan dibawah 600 psi kolom kaca dapat digunakan.
Kolom standar mempunyai diameter dalam antara 4-5 mm.
Isi kolom harus berukuran homogen dan stabil secara mekanik.
Diameter partikel berkisar antara 4-7 µm. Panjang kolom standar
berkisar antara 10-30 cm. Bila kecepatan analisis merupakan
pertimbangan utama misalnya pada pekerjaan kontrol kualitas,
kolom pendek (3-6 cm) akan sangat membantu.
Kolom dengan diameter dalam yang kecil (2 mm) di
bandingkan dengan kolom standar pada kondisi isokratik akan
menghasilkan waktu analisis yang sama. Beberapa kelebihan
kolom berdiameter kecil dibandingkan dengan kolom standar:
a) Konsumsi eluen 4 kali lebih hemat
b) Pelarut dengan kemurnian tinggi dapat digunakan mengingat
konsumsinya yang rendah.
c) Kepadatan pengemasan kolom lebih homogen
d) Dengan permeabilitas kolom yang lebih baik pengemasan
partikel kecil lebih mudah
e) Penyebaran panas lebih merata, sehingga gradient atau
perbedaan suhu sepanjang kolom lebih kecil.
f) Sejumlah kolom pendek dapat digabung tanpa kehilangan
efisiensi kolom.
5) Detektor
Detektor adalah alat untuk mendeteksi komponen-
komponen yang telah dipisahkan dalam kolom. Pendeteksi ini
digunakan untuk menentukan komponen-komponen baik secara
41
kualitatif maupun secara kuantitatif. Didalam analisis kuantitatif
sinyal detektor tergantung pada konsentrasi contoh.
Detektor yang ideal mempunyai syarat-syarat sebagai
berikut :
a) Sensitif.
b) Mempunyai kestabilan dan keterulangan yang tinggi.
c) Harus linier dengan kepekatan
d) Mempunyai respon yang cepat
e) Tidak merusak analit
f) Mudah digunakan dan dalam perawatannya.
Berbagai macam detektor yang telah dikembangkan untuk
kromatografi cairan, antara lain :
a) Detektor Refraksi Indeks (RI)
Detektor ini bekerja berdasarkan perbedaan refraksi
indeks contoh dengan refraksi indeks fase gerak. Oleh karena
itu, fase gerak yang digunakan harus dipilih sehingga fase
gerak tidak memiliki nilai refraksi indeks yang sama atau
berdekatan dengan refraksi indeks contoh.
b) Detektor Serapan Optik
1) Detektor serapan UV dengan panjang gelombang tetap,
mendeteksi pada 254 atau 280 nm, atau pada keduanya.
Detektor ini sangat cocok untuk teknik elusi gradien.
Detektor ini mampu mendeteksi senyawa hayati seperti
asam amino aromatik, protein, dan enzim pada panjang
gelombang 254 nm.
2) Detektor serapan UV dengan panjang gelombang dapat
diubah-ubah. Detektor ini beroperasi pada berbagai
panjang gelombang bergantung pada panjang gelombang
maksimum contoh. Sebagian besar analisis yang
menggunakan detektor ini dilakukan pada daerah UV 195-
400 nm.
3) Detektor inframerah
Detektor inframerah digunakan untuk mendeteksi gugus
fungsional yang ada pada contoh. Detektor ini kurang
42
populer dalam kromatografi cair. Hal ini disebabkan oleh
sifat contoh dan pelarut yang menyulitkan pemakaiannya
secara umum dan membatasi cakupan pemakaian.
b. Detektor Flouresence
Detektor jenis ini disebut juga detektor fluorometer.
Sensitivitas detektor ini lebih baik dibandingkan dengan
detektor absorban. Akan tetapi detektor ini hanya dapat
mendeteksi komponen-komponen yang dapat berfluoresensi.
Pembacaan respon didasarkan pada intensitas sinar emisi
yang disebabkan oleh gejala fluorensi.
c. Detektor Hantaran/Elektrokimia
Detektor dengan mendasarkan kerjanya pada pengukuran
arus listrik. Perubahan arus akan dideteksi terhadap waktu
dan ditampilkan dalam bentuk kromatogram. Detektor
elektrokimia cocok digunakan untuk analisis senyawa-
senyawa penukar ion (Johnson dan Stevenson, 1991).
6) Rekorder
Rekorder/Data Prosesor/Pencatat adalah alat mencatat
hasil pemisahan komponen-komponen zat yang dianalisis. Alat
pencatat harus dapat mencatat puncak-puncak yang tajam yang
dipisahkan dengan cepat, tidak dipengaruhi oleh noise dari aliran
listrik.
E. Metode Analisis
1. Preparasi Reagent
a) Media disolusi untuk tahap asam
Asam Klorida 0,1 N:
1) Sebanyak 78,20 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam piala
gelas 6000 mL.
2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 6000 mL
sambil diaduk.
b) Pelarut untuk tahap asam
43
Asam Klorida 0,1 N:
1) Sebanyak 13,04 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam labu
takar 1000 mL.
2) Ditambahkan air hingga tanda tera kemudian dihomogenkan.
Natrium Hidroksida 5 N:
1) Ditimbang sebanyak 20,00 gram Natrium Hidroksida pellet,
kemudian dimasukkan ke piala gelas 100 mL.
2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 100 mL
sambil diaduk.
Campuran HCl 0,1 N dan NaOH 5 N (900:20):
1) Campurkan HCl 0,1 N dan NaOH 5 N dengan perbandingan
900:20 kemudian dihomogenkan.
c) Media disolusi untuk tahap buffer
Larutan A (Larutan Trisodium fosfat dodekahidrat 76 mg/mL):
1) Ditimbang 114 gram Trisodium fosfat dodekahidrat, kemudian
dimasukkan ke dalam piala gelas 2000 mL.
2) Dilarutkan dengan air hingga volumenya 1500 mL, kemudian
dihomogenkan.
Asam Klorida 0,1 N:
1) Sebanyak 58,7 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam piala
gelas 5000 mL.
2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 4500 mL
sambil diaduk.
Media Disolusi tahap buffer (Buffer fosfat pH 6,8):
1) HCl 0,1 N dan Larutan A dicampurkan dengan perbandingan 1 : 3
2) Larutan dihomogenkan kemudian pH-nya diatur hingga mencapai
pH 6,8.
d) Pelarut untuk tahap buffer
Buffer fosfat pH 6,8:
1) HCl 0,1 N dan Larutan A dicampurkan dengan perbandingan 1 : 3.
2) Larutan dihomogenkan kemudian pH-nya diatur hingga mencapai
pH 6,8.
44
e) Fase Gerak
Larutan AH:
1) Asam fosfat 0,01 M dicampurkan dengan larutan Natrium
Dihidrogen Fosfat 0,01 M dengan volume yang sama kemudian
dihomogenkan.
2) pH larutan kemudian diatur hingga pH nya ± 2,5
Fase Gerak Natrium Diklofenak:
1) Larutan AH dan Metanol dicampurkan dengan perbandingan 700 :
300 kemudian larutan dihomogenkan.
2. Preparasi Larutan Standar
a) Larutan standar stok
1) Sebanyak 12,5 mg Standar Natrium Diklofenak ditimbang
kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 50 mL.
2) Dilarutkan dengan 5 mL NaOH 0,1 N, kemudian diencerkan
dengan air hingga tanda tera, lalu dihomogenkan.
b) Larutan standar untuk tahap asam
1) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan Larutan Sa1
3) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan Sa1 kemudian dimasukkan ke
dalam labu ukur 20 mL.
4) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan Larutan Sa2
5) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm, kemudian
dimasukkan kedalam vial.
c) Larutan standar untuk tahap buffer
1) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan.
3) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
45
d) Larutan Standar untuk Uji Linearitas Tahap Asam
a. Larutan Standar Stok Linearitas 50% tahap asam
1) Dipipet 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan.
b. Deret Standar untuk uji linearitas tahap asam:
1) Dibuat deret standar dengan konsentrasi larutan sesuai tabel
dibawah ini:
Tabel 1 Tabel 1 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap asam
No. Tingkatan
Konsentrasi (%)
Volume Larutan LSa
(mL)
Volume akhir
larutan (mL)
Konsentrasi Larutan (ppm)
LSa1 1,0 1,0 50,0 0,2 LSa2 2,0 1,0 25,0 0,4 LSa3 5,0 2,0 20,0 1,0 LSa4 10,0 5,0 25,0 2,0 LSa5 12,0 10,0 20,0 4,0
2) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
e) Larutan Standar untuk Uji Linearitas Tahap Buffer
a. Larutan standar stok linearitas 250% tahap buffer
1) Dipipet 10,0 mL larutan standar stok Natrium Diklofenak
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50,0 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan.
b. Deret Standar untuk uji linearitas tahap buffer:
1) Dibuat deret standar dengan konsentrasi larutan sesuai tabel
dibawah ini:
Tabel 2 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap buffer
No. Tingkatan Konsentrasi
(%)
Volume Larutan LSa
(mL)
Volume akhir
larutan (mL)
Konsentrasi Larutan (ppm)
LSb1 30,0 3,0 25,0 6,0 LSb2 60,0 6,0 25,0 12,0 LSb3 100,0 10,0 25,0 20,0 LSb4 110,0 11,0 25,0 22,0 LSb5 120,0 12,0 25,0 24,0
46
2) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
3. Kondisi Disolusi
a. Tahap Asam:
Media : HCl 0,1 N
Volume : 900 mL
Metode : Metode 2 (Metode Dayung)
RPM : 50 rpm
Waktu : 2 jam
Suhu : 37oC
b. Tahap Buffer:
Media : Buffer fosfat pH 6,8
Volume : 900 mL
Metode : Metode 2 (Metode Dayung)
RPM : 50 rpm
Waktu : 45 menit
Suhu : 37oC
4. Kondisi Kromatografi
Kolom : 4,6-mm x 25-cm; packing L7. „LiChroCART®
LiChrospher®‟ 60 Rp-select B (5 µm)
Volume Injeksi : 10 µL
Laju Alir : 1,0 mL/menit
Fase Gerak : Metanol dan Buffer pH 2,5 (7 : 3)
Detektor : UV – VIS λ = 254 nm
Waktu Pembacaan : 13 menit
Waktu Retensi : Natrium Diklofenak : ± 11 menit
5. Preparasi Larutan Spike untuk Uji Akurasi
a. Larutan Spike Stok
1) Sebanyak 50,0 mg Standar Natrium Diklofenak ditimbang
kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL.
2) Dilarutkan dengan 10 mL NaOH 0,1 N, kemudian diencerkan
dengan air hingga tanda tera, lalu dihomogenkan (Larutan A).
47
b. Larutan Spike Tahap Asam
1) Dipipet sebanyak 25,0 mL Larutan A kemudian dimasukkan
kedalam labu ukur 100 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera, lalu
dihomogenkan (Larutan Aa1).
c. Larutan Spike Tahap Buffer
1) Dipipet sebanyak 2,0 mL Larutan A kemudian dimasukkan
kedalam labu ukur 20 mL.
2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera, lalu
dihomogenkan (Larutan Ab1).
6. Preparasi Sampel
a. Preparasi Sampel Tahap Asam
1) Dimasukkan satu tablet ke masing-masing bejana yang telah diisi
dengan media disolusi tahap asam.
2) Disolusi dilakukan sesuai dengan kondisi yang ditetapkan.
3) Setelah dua jam, tablet dari masing-masing bejana dikeluarkan
dari bejana berisi media disolusi tahap asam, untuk selanjutnya
tablet akan melalui proses disolusi tahap buffer.
4) Sebanyak 20,0 mL NaOH 5 N ditambahkan ke dalam masing-
masing bejana.
5) Sebanyak 10,0 mL larutan sampel di dalam bejana dipipet
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.
6) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan.
7) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
d. Preparasi Sampel Tahap Buffer
1) Dimasukkan tablet yang telah melalui disolusi tahap asam ke
masing-masing bejana yang telah diisi dengan media disolusi
tahap buffer.
2) Disolusi dilakukan sesuai dengan kondisi yang ditetapkan.
3) Setelah 45 menit, diambil ± 20 mL larutan sampel di dalam bejana
kemudian disaring dengan kertas saring.
48
4) Filtrat yang didapatkan kemudian dipipet sebanyak 10,0 mL, lalu
dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.
5) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan.
6) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
e. Preparasi Sampel untuk Uji Akurasi Tahap Asam
1) Dimasukkan sejumlah plasebo dan larutan spike sesuai tabel
dibawah ini, kedalam labu ukur 500,0 mL.
Tabel 3 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap asam
Tingkatan Konsentrasi
(%)
Nama Spl.
Jumlah Plasebo yang ditambahkan
(mg)
Vol. lar. spike.
(mL)/lar. spike
Konsentrasi lar. Spike (mg/mL)
Kadar di dalam tablet
(mg/tab)
Konsentrasi Lar. (µg/mL)
1% SAa 301.4 2.0 / Lar.
Aa1 0.14 0.5 0.2
10% SBa 298.9 2.0 / Lar.
A 1.4 5.0 2.0
25% SCa 294.8 5.0 / Lar.
A 1.4 12.5 5.0
2) Dilarutkan dengan HCl 0,1 N kemudian diaduk selama 5 menit.
3) Ditambahkan 11,0 mL NaOH 5 N kemudian diaduk lagi selama 3
menit.
4) Larutan disaring dengan kertas saring
5) Kemudian filtratnya dipipet sebanyak 10,0 mL dan dimasukkan ke
dalam labu ukur 25 mL.
6) Diencerkan dengan pelarut tahap asam kemudian dihomogenkan.
7) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
f. Preparasi Sampel untuk Uji Akurasi Tahap Buffer
1) Dimasukkan sejumlah plasebo dan larutan spike sesuai tabel
dibawah ini, kedalam labu ukur 500,0 mL.
49
Tabel 4 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap buffer
Tingkatan Konsentrasi
(%)
Nama Spl
Jumlah Plasebo yang ditambahkan
(mg)
Vol. lar. spike.
(mL)/lar. spike
Konsentrasi lar. Spike (mg/mL)
Kadar di dalam tablet
(mg/tab)
Konsentrasi Lar. (µg/mL)
30% SAb 293,4 6.0 / Lar.
Ab1 1,4 15,0 6,0
100% SBb 273,9 5.0 / Lar.
A 5,6 50.0 20.0
120% SCb 268,4 6.0 / Lar.
A 5,6 60,0 24.0
2) Dilarutkan dengan Buffer pH 6,8 kemudian diaduk selama 5 menit.
3) Larutan disaring dengan kertas saring
4) Kemudian filtratnya dipipet sebanyak 10,0 mL dan dimasukkan ke
dalam labu ukur 25 mL.
5) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer kemudian dihomogenkan.
6) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian
dimasukkan ke dalam vial.
7. Sampel
a. Sampel untuk uji selektifitas:
1) Blako pelarut (pelarut tahap asam dan pelarut tahap buffer)
2) Fase Gerak Fase gerak Na Diklofenak ( buffer pH 2,5 :
methanol 300 : 700)
3) Larutan Standar Larutan Standar tahap asam dan larutan
standar tahap buffer
4) Plasebo A plasebo yang disimpan pada kondisi ambien (suhu :
25oC Kelembapan: 60%)
5) Plasebo B plasebo yang telah disimpan pada stress condition
(suhu : 40oC Kelembapan: 75%) selama 7 hari
6) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan
pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)
7) Sampel NP2 Sampel obat tablet salut enterik yang telah
disimpan pada stress condition (suhu : 40oC Kelembapan: 75%)
selama 7 hari
b. Sampel untuk uji Presisi
1) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan
pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)
50
c. Sampel untuk uji ketahanan
1) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan
pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)
d. Sampel untuk uji linearitas
1) Larutan Standar linearitas (L1 – L5) pada tahap asam dan tahap
buffer
e. Sampel untuk uji akurasi
1) Larutan A, B, dan C pada tahap asam dan tahap buffer
8. Penetapan validasi
a. Uji Kesesuaian Sistem
Uji Kesesuaian Sistem dilakukan dengan cara menerapkan metode
pengukuran kepada larutan standar kemudian dilihat kesesuaian
sistemnya (meliputi : faktor ikutan (T), resolusi (R), faktor kapasitas
(k‟), jumlah plat (N), RSD luas puncak, dan RSD waktu retensi)
kemudian dibandingkan dengan syarat keterimaan yang telah
ditetapkan. Pengukuran dilakukan sebanyak lima kali pengulangan.
b. Uji Spesifisitas
Uji Speifisitas atau Selektivitas dilakukan dengan mengukur luas
puncak fase gerak, pelarut, placebo, standar, dan sampel, kemudian
kromatogram yang didapatkan dibandingkan. Pengukuran dilakukan
masing-masing satu kali terhadap pelarut tahan asam & tahap basa,
fase gerak, placebo A dalam tahap asam & tahap basa, larutan
standar konsentrasi 100% dalam tahap asam & basa, dan larutan
sampel NP1 dan NP2 dalam tahap asam & tahap basa.
c. Uji Presisi
1) Uji Keterulangan (Repeatability)
Uji Keterulangan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak
sampel homogen yang telah melalui tahap disolusi, kemudian
dihitung laju disolusinya. Pengukuran dilakukan masing-masing
dua kali terhadap enam kali pengulangan disolusi (enam bejana
disolusi).
2) Uji Ketertiruan (Reproducibility)
Uji Ketertiruan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak
sampel homogen yang telah melalui tahap disolusi, kemudian
51
dihitung laju disolusinya. Pengukuran dilakukan di laboratorium
yang berbeda dan oleh analis yang berbeda. Pengukuran
dilakukan masing-masing dua kali terhadap enam kali
pengulangan disolusi (enam bejana disolusi).
d. Uji Akurasi
Uji Akurasi dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel
yang mengandung konsentrasi zat aktif yang berbeda pada masing-
masing tahap (tahap asam : 1%, 10%, dan 25% ; tahap basa : 30%,
100%, dan 120%). Pengerjaan dilakukan sebanyak tiga kali
pengulangan dan dua kali pengukuran pada setiap masing-masing
tingkatan konsentrasi. Untuk akurasi tahap asam, dihitung RSD %
perolehan kembalinya (recovery rate), dan untuk tahap buffer dihitung
rata-rata % perolehan kembali (recovery rate), dan % RSD
keseluruhannya.
e. Uji Linearitas
Uji Linearitas dilakukan dengan cara mengukur deret larutan standar
yang konsentrasinya berbeda-beda (deret standar tahap asam : 1%,
2%, 5%, 10%, dan 25% ; deret standar tahap buffer : 30%, 60%,
100%, 110%, dan 120%). Hubungan linearitas antara respon dari
analat dengan konsentrasinya ditunjukan dalam persamaan garis
regresi dan % Y intersep. Pengerjaaan dilakukan dua kali
pengulangan dengan dua kali pengukuran untuk masing-masing
tingkatan konsentrasi pada larutan standar tahap asam dan tahap
buffer.
f. Uji Ketahanan
1) Stabilitas Sampel dan Standar
Uji Stabilitas Sampel dan Standar ini dilakukan dengan
menginjeksikan larutan sampel dan larutan standar Natrium
Diklofenak dalam waktu analisis yang berbeda. Analisis dilakukan
dengan satu kali injeksi sampel dan standar setiap selang waktu
selama 72 jam. Injeksi dilakukan pada jam ke- 0, 4, 8, 12, 24, 48,
dan 72.
2) Variasi Prosedur
Uji ketahanan ini dilakukan dengan menguji kestabilan metode
dengan cara melakukan sedikit modifikasi yang berbeda dari
52
kondisi normalnya. Analisis dilakukan sebanyak enam kali
pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-masing
dilakukan pengukuran sebanyak dua kali. Variasi metode
dilakukan pada dua parameter, yaitu:
a) Variasi Prosedur pada parameter KCKT
Dilakukan Variasi prosedur pada pada parameter KCKT
sesuai dengan kondisi dibawah ini:
Tabel 5 Variasi Prosedur Paameter KCKT
Parameter Kondisi Normal
Uji Ketegaran
(-) (+)
Laju Alir (ml / menit) 1.0 0.95 1.05
Komposisi Fase Gerak Metanol : Larutan A
700 : 300 693 : 297 707 : 303
pH Larutan A 2.5 2.45 2.55
53
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan uji yang telah dilakukan terhadap parameter-parameter
validasi pada uji disolusi Natrium Diklofenak didalam tablet salut enterik, hasilnya
dapat dijelaskan sebagai berikut
A. Uji Kesesuaian Sistem
Uji Kesesuaian Sistem dilakukan untuk mengetahui keefektifan sistem
kromatografi sehingga data analisis yang dihasilkan cukup handal untuk
dipakai dalam menyimpulkan suatu hasil pengujian. Uji Kesesuaian Sistem
dilakukan dengan cara menerapkan metode pengukuran kepada larutan
standar yang diinjeksikan sebanyak lima kali pengulangan kemudian dilihat
kesesuaian sistemnya (meliputi : faktor ikutan (T), resolusi (R), faktor
kapasitas (k‟), jumlah plat (N), RSD luas puncak, dan RSD waktu retensi)
kemudian dibandingkan dengan syarat keterimaan yang telah ditetapkan.
Tabel di bawah ini merupakan hasil dari Uji Kesesuaian Sistem untuk Validasi
Disolusi Natrium Diklofenak pada Tahap Asam dan Tahap Buffer.
Tabel 6 Hasil Uji Kesesuaian Sistem
Parameter Syarat Keberterimaan
Hasil
Tahap Asam Tahap Buffer
Faktor Ikutan (T) < 2,0 1,0 1,1
Faktor Kapasitas (k’) > 2,0 8,2 8,2
Efisiensi Kolom (N) ≥ 2000 8719 7897
RSD Luas Area Puncak (%)
≤ 2,0 0,8 0,2
RSD Waktu Retensi (%) ≤ 1,0 0,1 0,05
Dari hasil Uji Kesesuaian Sistem yang didapatkan, seluruh parameter
memenuhi kriteria keberterimaan yang ditetapkan, hasil ini menujukan bahwa
keefektivitas sistem kromatografinya cukup baik, sehingga data analisis yang
dihasilkan cukup handal untuk dipakai dalam menyimpulkan suatu hasil
pengujian.
54
B. Uji Spesifisitas
Uji spesifisitas dilakukan untuk mengetahui adanya gangguan pada
luas puncak pembacaan pada sampel yang disebabkan oleh pelarut, fase
gerak, ataupun produk degradasi yang terdapat didalam sampel. Uji
spesifisitas ini dilakukan dengan menginjeksikan pelarut tahap asam dan
buffer, fase gerak, Sampel NP1 dan NP2 pada tahap asam dan buffer, serta
plasebo A dan B pada tahap asam dan buffer. Kemudian kromatogram yang
didapatkan dibandingkan dan dilihat apakah ada puncak dari komponen lain
yang dapat mengganggu pembacaan luas puncak pada sampel.
Kromatogram hasil uji selektifitas dapat dilihat pada lampiran.
Dari hasil uji selektifitas yang dilakukan, tidak ditemukan adanya
puncak dari komponen lain yang mengganggu puncak pembacaan dari
Natrium diklofenak di dalam sampel. Hal ini menunjukan bahwa metode ini
dapat memisahkan Natrium Diklofenak dari komponen lain dengan baik tanpa
adanya puncak pembacaan yang bercampur ataupun bertumpukan.
C. Uji Linearitas
Uji Linearitas dilakukan untuk mengetahui kemampuan metode
analisis untuk menunjukan respon/hasil uji secara langsung terhadap
konsentrasi analit dalam sampel dan dalam rentang konsentrasi yang
digunakan. Pengujian linearitas dilakukan terhadap beberapa tingkatan
konsentrasi zat aktif. Tingkatan konsentrasi zat aktif pada tahap asam adalah
sebesar 1%, 2%, 5%, 10%, dan 25% sedangkan pada tahap buffer sebesar
60%, 80%, 100%, 120% dan 140%. Hubungan linear antara respon analit
dengan konsentrasi analit ditampilkan sebagai persamaan regresi dan
dihitung %Y intersepnya. Berikut ini merupakan kurva hasil uji linearitas untuk
tahap asam dan tahap buffer.
55
Gambar 9 Kurva Linearitas Standar tahap asam
Uji Linearitas tahap asam, koefisien korelasi yang didapatkan sebesar
1,000, nilai tersebut memenuhi syarat keterimaan sebesar ≥ 0,995. Hal ini
menunjukan bahwa korelasi antara luas puncak dan konsentrasi Natrium
diklofenak dalam rentang 0,2 – 0,6 µg/Ml intersep yang didapatkan sebesar –
1,069 angka tersebut menunjukan simpangan baku respon analit terhadap
larutan sampel dengan konsentrasi nol. %Y intersep didapatkan sebesar –
0,5%, % Y intersep dapat dihitung dari pembagian antara nilai intersep
dengan luas area Natrium Diklofenak pada konsentrasi 100%. Karena pada
saat pengujian tidak dilakukan pengukuran luas area larutan Natrium
Diklofenak pada tingkat konsentrasi 100%, maka nilai luas area konsentrasi
100% didapatkan dari ekstrapolasi persamaan garis yang didapatkan. Syarat
keterimaan %Y intersep adalah ≤ 3,0% agar garis linear tetap proporsional.
Nilai slope didapatkan sebesar 9,921, nilai tersebut menunjukan besaran
kenaikan respon pada setiap tingkatan konsentrasi.
y = 9,921x - 1,069 R² = 1.000
15006500
115001650021500265003150036500415004650051500
0.1 0.6 1.1 1.6 2.1 2.6 3.1 3.6 4.1 4.6 5.1 5.6
Are
a (A
U)
Konsentrasi Sebenarnya (µg/mL)
Kurva Linearitas Natrium Diklofenak (Tahap Asam)
56
Gambar 10 Kurva Linearitas Standar tahap buffer
Uji Linearitas tahap buffer, koefisien korelasi yang didapatkan
sebesar 0.9999, nilai tersebut memenuhi syarat keterimaan sebesar ≥ 0,995.
Hal ini menunjukan bahwa korelasi antara luas puncak dan konsentrasi
Natrium diklofenak dalam rentang 6,6768 – 26,7073 µg/Ml intersep yang
didapatkan sebesar – 1474,5 angka tersebut menunjukan simpangan baku
respon analit terhadap larutan sampel dengan konsentrasi nol. %Y intersep
didapatkan sebesar – 0,7%, % Y intersep dapat dihitung dari pembagian
antara nilai intersep dengan luas area Natrium Diklofenak pada konsentrasi
100%. Syarat keterimaan %Y intersep adalah ≤ 3,0% agar garis linear tetap
proporsional. Nilai slope didapatkan sebesar 9897,4 nilai tersebut
menunjukan besaran kenaikan respon pada setiap tingkatan konsentrasi.
D. Uji Akurasi
Pengujian Akurasi dilakukan untuk menunjukan kedekatan antara
hasil percobaan dengan nilai sebenarnya, mengukur kesesuaian antara hasil
dan nilai sebenarnya, dan dapat menggambarkan kesalahan sistematis. Uji
Akurasi dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel yang
mengandung konsentrasi zat aktif yang berbeda pada masing-masing tahap
(tahap asam : 1%, 10% dan 25% ; tahap basa : 30%, 100%, dan 120%).
y = 9897.4x - 1474.5 R² = 0.9999
50000
100000
150000
200000
250000
300000
5.0 12.0 19.0 26.0 33.0
Are
a (A
U)
Konsentrasi Sebenarnya (µg/mL)
Kurva Linearitas Natrium Diklofenak (Tahap Asam)
57
Pengerjaan dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dan dua kali
pengukuran pada setiap masing-masing tingkatan konsentrasi.
Pengujian akurasi menggunakan larutan dengankadar zat aktif yang
berbeda ini bertujuan untuk mengetahui tingkat akurasi metode pada
beberapa tingkat konsentrasi. Berikut ini adalah tabel hasil uji akurasi pada
tahap asam dan tahap buffer.
Tabel 7 Hasil Uji Akurasi tahap asam
Nama Spl.
Tingkat Konsentrasi
(%)
Uji Disolusi Natrium Diklofenak
Laju Disolusi Teoritis (%)
Laju Disolusi
Aktual (%)
Perolehan Kembali (%)
Rata-rata Perolehan Kembali
RSD Perolehan Kembali
SAa.1.1
1,00
0,9985 1,0900 109,16%
109% 1.6%
SAa.1.2 0,9985 1,0800 108,16%
SAa.2.1 0,9985 1,0900 109,16%
SAa.2.2 0,9985 1,0600 106,16%
SAa.3.1 0,9985 1,1100 111,17%
SAa.3.2 0,9985 1,1000 110,17%
SBa.1.1
10,00
9,9882 8,6500 86,60%
89% 1.3%
SBa.1.2 9,9882 8,8500 88,60%
SBa.2.1 9,9882 8,9000 89,11%
SBa.2.2 9,9882 8,9900 90,01%
SBa.3.1 9,9882 8,9300 89,41%
SBa.3.2 9,9882 8,9300 89,41%
SCa.1.1
25,00
24,9704 24,2900 97,28%
95% 1.9%
SCa.1.2 24,9704 24,4500 97,92%
SCa.2.1 24,9704 23,8400 95,47%
SCa.2.2 24,9704 23,5600 94,35%
SCa.3.1 24,9704 23,3900 93,67%
SCa.3.2 24,9704 23,4700 93,99%
Rata-rata 97,77%
RSD (≤ 10.0%) 9,0%
58
Tabel 8 Hasil Uji Akurasi tahap buffer
Nama Spl.
Tingkat Konsentrasi
(%)
Laju Disolusi Natrium Diklofenak
Laju Disolusi Teoritis(%)
Laju Disolusi
Aktual (%)
Perolehan Kembali
(%)
Rata-rata Perolehan Kembali
RSD Perolehan Kembali
SAb.1.1
30,00
29,9645 29,7700 99,35%
99% 0.5%
SAb.1.2 29,9645 29,7700 99,35%
SAb.2.1 29,9645 29,5900 98,75%
SAb.2.2 29,9645 29,6300 98,88%
SAb.3.1 29,9645 29,3600 97,98%
SAb.3.2 29,9645 29,4700 98,35%
SBb.1.1
100,00
99,8818 98,7700 98,89%
99% 0.2%
SBb.1.2 99,8818 98,8600 98,98%
SBb.2.1 99,8818 98,7700 98,89%
SBb.2.2 99,8818 99,1300 99,25%
SBb.3.1 99,8818 99,0000 99,12%
SBb.3.2 99,8818 99,1400 99,26%
SCb.1.1
120,00
119,8581 118,9900 99,28%
100% 0.2%
SCb.1.2 119,8581 119,3200 99,55%
SCb.2.1 119,8581 119,7300 99,89%
SCb.2.2 119,8581 119,6600 99,83%
SCb.3.1 119,8581 119,5200 99,72%
SCb.3.2 119,8581 119,3600 99,58%
Rata-rata 99,16%
Rentang perolehan kembali (95 - 105%) 97,98% - 99,89%
RSD (≤ 5.0%) 0,5%
Hasil pengujian akurasi pada tahap asam, didapatkan nilai RSD
sebesar 9,0% hasil ini memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤
10,0%, sedangkan pada tahap buffer, didapatkan RSD sebesar 0,5% dengan
rentang persentase perolehan kembali 97,98% - 99,89%. Hasil dari %
perolehan kembali menunjukan bahwa pada pengujian akurasi pada masing-
masing tingkat konsentrasi tidak terjadi kesalahan sistematis, melainkan
hanya terdapat kesalahan acak yang tidak dapat dikendalikan namun tidak
terlalu berpengaruh pada hasil analisis. Nilai % RSD yang memenuhi syarat
keberterimaan menunjukan bahwa hasil analisis memiliki nilai keterulangan
yang cukup baik. Oleh karena itu metode ini akurat untuk mengukur laju
disolusi natrium diklofenak.
59
E. Uji Presisi
1. Keterulangan (Repeatability)
Uji Keterulangan dilakukan untuk mengukur keragaman nilai hasil
uji yang dilakukan pada kondisi operator, alat, sampel, dan laboratorium
yang sama dalam interval waktu pemeriksaan yang singkat. Uji
Keterulangan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel
homogen yang telah melalui tahap disolusi sesuai metode yang telah
ditetapkan, kemudian dihitung laju disolusinya. Pengerjaan dilakukan
sebanyak enam kali pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-
masing diinjeksikan dua kali. Berikut ini adalah tabel hasil dari uji
Keterulangan Disolusi Natrium Diklofenak pada tahap asam dan tahap
buffer (total laju disolusi).
Tabel 9 Hasil Uji Keterulangan tahap asam
Nama Sampel
Tingkatan Konsentrasi (%) Laju Disolusi Na Diklofenak (%)
NPa.1 1
100%
0,0000
NPa.1 2 0,0000
NPa.2 1 0,0000
NPa.2 2 0,0000
NPa.3 1 0,0000
NPa.3 2 0,0000
NPa.4 1 0,0000
NPa.4 2 0,0000
NPa.5 1 0,0000
NPa.5 2 0,0000
NPa.6 1 0,0000
NPa.6 2 0,0000
Rata-rata Laju Disolusi 0,0000
Simpangan Baku 0,0000
RSD (≤ 10.0%) 0,0%
60
Tabel 10 Hasil Uji Keterulangan tahap buffer
Nama Sampel
Tingkatan Konsentrasi (%) Laju Disolusi Na Diklofenak (%)
NPb.1 1
100%
96,0789
NPb.1 2 96,3946
NPb.2 1 99,3434
NPb.2 2 99,8921
NPb.3 1 97,1325
NPb.3 2 97,8900
NPb.4 1 96,3642
NPb.4 2 96,1272
NPb.5 1 92,0833
NPb.5 2 92,6428
NPb.6 1 89,4110
NPb.6 2 89,3604
Rata-rata Total Laju Disolusi 95,2267
Simpangan Baku 3,5474
RSD (≤ 5.0%) 3,7%
Dari pengujian keterulangan yang telah dilakukan, diperoleh hasil
nilai %RSD pada disolusi tahap asam sebesar 0,0% hasil ini telah
memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤ 10,0% dan hasil %RSD
total laju disolusi sebesar 3,7% hasil tersebut juga memenuhi syarat
keberterimaan yaitu ≤ 5,0%. Berdasarkan hasil yang didapatkan, dapat
dinyatakan bahwa metode tersebut memiliki keterulangan yang cukup
baik. Keterulangan metode menggambarkan adanya pengaruh akibat
kesalahan acak seperti ketidakstabilan instrument, variasi suhu/pereaksi,
keseragaman teknik dan operator yang berbeda, namun masih dapat
diterima dan tidak secara signifikan mempengaruhi hasil analisis.
2. Ketertiruan (Reproducibility)
Uji Ketertiruan dilakukan untuk memastikan bahwa metode akan
menghasilkan hasil yang sama meskipun dikerjakan dilaboratorium yang
berbeda. Validasi ketertiruan penting dilakukan jika metode akan
digunakan di laboratorium yang berbeda. Uji Reproduksibilitas dilakukan
dengan cara mengukur luas puncak sampel homogen yang telah melalui
61
tahap disolusi, kemudian dihitung laju disolusinya. Uji Ketertiruan
dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel homogen yang
telah melalui tahap disolusi sesuai metode yang telah ditetapkan,
kemudian dihitung laju disolusinya. Pengerjaan dilakukan oleh dua analis
yang berbeda di laboratorium yang berbeda pula, pengerjaan dilakukan
sebanyak enam kali pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-
masing diinjeksikan dua kali. Berikut ini adalah tabel hasil dari uji
Ketetiruan Disolusi Natrium Diklofenak pada tahap asam dan tahap
buffer.
Tabel 11 Hasil Uji Ketertiruan tahap asam
Tingkat Konsentrasi (%)
Analis 1 Tanggal analisis:
19/12/2014
Analis 2 Tanggal analisis:
23/01/2015
Nama Sampel
Laju disolusi Na Diclofenak
(%)
Nama Sampel
Laju disolusi Na Diclofenak (%)
100%
NPa 1.1 0,0000 NPa 1.1 0,0000
NPa 1.2 0,0000 NPa 1.2 0,0000
NPa 2.1 0,0000 NPa 2.1 0,0000
NPa 2.2 0,0000 NPa 2.2 0,0000
NPa 3.1 0,0000 NPa 3.1 0,0000
NPa 3.2 0,0000 NPa 3.2 0,0000
NPa 4.1 0,0000 NPa 4.1 0,0000
NPa 4.2 0,0000 NPa 4.2 0,0000
NPa 5.1 0,0000 NPa 5.1 0,0000
NPa 5.2 0,0000 NPa 5.2 0,0000
NPa 6.1 0,0000 NPa 6.1 0,0000
NPa 6.2 0,0000 NPa 6.2 0,0000
Rata-rata masing-masing
0,0000 0,0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0,0% 0,0%
Rata-rata keseluruhan 0,0000
RSD keseluruhan (≤ 10.0%)
0,0%
62
Tabel 12 Hasil Uji Ketertiruan tahap buffer
Tingkat Konsentrasi (%)
Analis 1 Tanggal analisis:
19/02/2014
Analis 2 Tanggal analisis:
23/01/2015
Nama Sampel
Total laju disolusi Na
Diclofenak (%)
Nama Sampel
Total laju disolusi Na
Diclofenak (%)
100%
NPa 1.1 96,0789 NPa 1.1 96,4639
NPa 1.2 96,3946 NPa 1.2 96,7682
NPa 2.1 99,3434 NPa 2.1 96,7639
NPa 2.2 99,8921 NPa 2.2 97,0644
NPa 3.1 97,1325 NPa 3.1 97,4318
NPa 3.2 97,8900 NPa 3.2 97,7559
NPa 4.1 96,3642 NPa 4.1 99,1175
NPa 4.2 96,1272 NPa 4.2 98,8753
NPa 5.1 92,0833 NPa 5.1 99,2599
NPa 5.2 92,6428 NPa 5.2 99,5589
NPa 6.1 89,4110 NPa 6.1 97,8368
NPa 6.2 89,3604 NPa 6.2 98,0849
Rata-rata masing-masing 95,2267 97,9151
RSD masing-masing (≤ 5.0%)
3,7% 1,1%
Rata-rata keseluruhan 96,5709
RSD keseluruhan (≤ 5.0%)
3,0%
Dari hasil uji keteriruan yang dilakukan, pada tahap asam
didapatkan RSD data Laju disolusi pada masing-masing laboratorium dan
RSD percobaan keseluruhan sebesar 0,0%. Hasil tersebut memenuhi syarat
keberterimaan yaitu sebesar ≤ 10,0%. Pada tahap basa, didapatkan RSD
total laju disolusi di lab PD sebesar 3,7% dan di lab QC sebesar 1,1%, untuk
RSD keseluruhan didapatkan sebesar 3,0% hasil tersebut memenuhi syarat
keberterimaan yaitu sebesar ≤ 5,0%. Dari hasil uji ketertiruan tersebut, dapat
diketahui bahwa metode uji disolusi yang dilakukan memiliki keterulangan
yang baik serta dapat menghasilkan nilai yang tidak jauh berbeda apabila
dilakukan oleh analis yang berbeda, pada waktu yang berbeda, ataupun di
Laboratorium yang berbeda.
63
F. Uji Ketahanan
Uji ketahanan metode dilakukan untuk mengetahui ketahanan metode
terhadap perubahan kecil dari kondisi pada prosedur. Uji ketahanan ini
terbagi menjadi dua yaitu:
1. Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel
Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel dilakukan dengan
pengukuran analit dalam larutan standar dan sampel pada waktu yang
berbeda selama jangka waktu tertentu. Pengujian ini juga bisa digunakan
untuk mengetahui masa simpan dari larutan standar dan sampel. Berikut
ini merupakan hasil dari pengujian stabilitas larutan standar dan sampel.
Gambar 11 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap asam
Berdasarkan hasil uji stabilitas pada larutan standar, seluruh
deviasi luas area puncak yang dibandingkan dengan nilai awal memenuhi
syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini menunjukan bahwa Natrium
diklofenak didalam larutan standar tahap asam dapat stabil hingga 72
jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-24 dengan nilai deviasi
sebesar 1,7%.
19000
19500
20000
20500
21000
0 12 24 36 48 60 72
Luas
Pu
nca
k (A
U)
Waktu Analisis (jam)
Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan standar (Tahap Asam)
Na Diklofenak
Batas Atas
Batas Bawah
Nilai Awal
64
Gambar 12 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap buffer
Untuk hasil uji stabilitas pada larutan standar buffer, seluruh
deviasi luas area puncak yang dibandingkan dengan nilai awal juga
memenuhi syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini menunjukan bahwa
Natrium diklofenak didalam larutan standar tahap buffer dapat stabil
hingga 72 jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-72 dengan nilai
deviasi sebesar 0,8%.
Gambar 13 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap asam
Pada larutan sampel tahap asam, tidak terdeteksi adanya zat aktif
Natrium Diklofenak dalam larutan sampel. Sehingga tidak terdapat deviasi
terhadap laju disolusi awal.
210000
220000
230000
240000
0 12 24 36 48 60 72
Luas
Pu
nca
k (A
U)
Waktu Analisis (jam)
Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Standar (Tahap Buffer)
Na Diklofenak
Batas Atas
Batas Bawah
Nilai Awal
19000
19500
20000
20500
21000
0 12 24 36 48 60 72
Laju
Dis
olu
si (
%)
Waktu Analisis (jam)
Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Sampel (Tahap Asam)
Na Diklofenak
Batas Atas
Batas Bawah
Nilai Awal
65
Gambar 14 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap buffer
Untuk hasil uji stabilitas Natrium Diklofenak dalam larutan sampel
tahap buffer seluruh deviasi Total Laju disolusi yang dibandingkan
dengan nilai awal memenuhi syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini
menunjukan bahwa Natrium diklofenak didalam larutan sampel tahap
buffer dapat stabil hingga 72 jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-
24 dengan nilai deviasi sebesar 1,8%.
2. Variasi Prosedur
a. Variasi Prosedur pada parameter KCKT
Uji ketahanan terhadap variasi prosedur ini dilakukan dengan
cara menganalisis sampel menggunakan prosedur yang sudah sedikit
dimodifikasi dari kondisin normalnya, dalam hal ini variasi prosedur
dilakukan pada parameter kondisi KCKT. Berikut ini merupakan hasil
dari uji ketahanan variasi prosedur pada parameter kondisi KCKT.
Tabel 13 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap asam
Hasil
Tahap Asam
Parameter
Laju alir (ml/menit) pH larutan A Komposisi Fase Gerak
Kondisi Normal
Variasi Kondisi Normal
Variasi Kondisi Normal
Variasi
1,00 0,95 1,05 2,50 2,45 2,55 700 : 300 693 : 297 707 : 303
RSD masing-masing (%)
0,0
0,0 0,0
0,0
0,0 0,0
0,0
0,0 0,0
RSD keseluruhan
(%) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
Syarat Keberterimaan
90.0000
92.0000
94.0000
96.0000
0 12 24 36 48 60 72Tota
l Laj
u D
iso
lusi
(%
)
Waktu analisis (jam)
Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Sampel (Tahap Buffer)
Na Diklofenak
Batas Atas
Batas Bawah
Nilai Awal
66
RSD masing-masing (%)
≤ 10,0
RSD keseluruhan
(%) ≤ 10,0
Pada tahap asam, tidak terdeteksi adanya zat aktif Natrium
Diklofenak pada kondisi normal maupun kondisi variasi pada seluruh
parameter. Sehingga laju disolusi Natrium diklofenak di dalam larutan
sampel tahap asam sama dengan 0,0% dan tidak terdapat
penyimpangan nilai pada setiap pengerjaan dengan variasi prosedur.
Tabel 14 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap buffer
Hasil
Tahap Buffer (Total Disolusi)
Parameter
Laju alir (ml/menit) pH larutan A Komposisi Fase Gerak
Kondisi Normal
Variasi Kondisi Normal
Variasi Kondisi Normal
Variasi
1,00 0,95 1,05 2,50 2,45 2,55 700 : 300 693 : 297 707 : 303
RSD masing-masing (%)
3,7
3,8 3,6
3,7
3,5 3,3
3,7
4,0 3,6
RSD keseluruhan
(%) 3,7 3,6 3,6 3,5 3,8 3,6
Syarat Keberterimaan
RSD masing-masing (%)
≤ 5,0
RSD keseluruhan
(%) ≤ 5,0
Pada tahap buffer, RSD total laju disolusi masing-masing pada
kondisi normal maupun variasi, memenuhi syarat keberterimaan yaitu
sebesar ≤ 5,0%. Hal ini menunjukan bahwa dengan adanya variasi
pada parameter KCKT, hasil analisis masih memiliki nilai
keterulangan yang baik. Untuk RSD total laju disolusi keseluruhan
yang dibandingkan dengan kondisi normalnya, seluruh nilai RSD-nya
memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤ 5,0%. Hal tersebut
menunjukan bahwa dengan adanya variasi pada parameter KCKT,
hasil analisis masih memiliki nilai ketertiruan yang cukup baik karena
nilai penyimpangan dari kondisi normalnya tidak terlalu besar.
67
BAB V SIMPULAN DAN SARAN
A. SIMPULAN
Berdasarkan hasil validasi metode yang telah dilakukan dapat
disimpulkan bahwa metode disolusi Natrium Diklofenak dalam obat tablet salut
enterik telah memenuhi syarat keberterimaan yang ditetapkan oleh PT Merck
Tbk. Maka, metode ini valid dan dapat digunakan untuk analisis rutin di
laboratorium Product Development dan laboratorium Quality control di PT Merck
Tbk oleh analis yang sudah terkualifikasi.
B. SARAN
Saran penulis mengenai analisis uji disolusi Natrium Diklofenak ini ialah
agar ke depannya dapat terus berkembang peralatan dari disolusi sendiri, yaitu
pengambilan sampel secara otomatis sehingga dalam proses sampling dapat
efisien dan dilakukan secara serentak tanpa alat manual seiring dengan
perkembangan penemuan di bidang ilmu pengetahuan.
Sedangkan saran umum penulis selama prakerin ini ialah agar penerapan
K3 di laboratorium dapat dijalankan dengan lebih baik lagi, dokumentasi
pemakaian alat ataupun bahan kimia dapat dijalankan dengan lebih disiplin dan
ditata agar lebih baik lagi, serta kebersihan dan kerapihan laboratorium tetap
terjaga dan ditingkatkan lagi. Dengan demikian, diharapkan dapat tercapainya
kelancaran dan keselamatan kerja di laboratorium. Serta saran untuk sekolah
agar kedepannya terus membina hubungan kerjasama dengan institusi-institusi
lain sehingga dapat memperluas hubungan dengan dunia industri selaku
penyerap tenaga kerja analis kimia.
68
DAFTAR PUSTAKA
Agoes, G. 2008. Pengembangan Sediaan Farmasi. Edisi Revisi dan Perluasan.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Anief, M. 1994. Farmasetika. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Ansel, Howard. C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi IV.
Diterjemahkan oleh Farida Ibrahim. Jakarta: UI Press.
Ansel, Howard C. 2008. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi edisi 4. Jakarta. UI-
Press.
Arifin, Zaenal, dan Krisnandi Ismail. 2014. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
(KCKT). Bogor: Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri Sekolah
Menengah Analis Kimia Bogor.
Astuti, Ika Yuni, Iskandar Sudirman, dan Umi Hidayat, 2007, Jurnal Pharmacy
Vol. 05 No. 01 “Pengaruh Konsentrasi Adeps Lanae dalam Dasar Salep
Cold Cream Terhadap Pelepasan Asam Salisilat”. Purwokerto:
Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2001. Pedoman Cara Pembuatan Obat
yang Baik (CPOB). Jakarta : BPOM.
Clark, Jim. 2007. “Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC)”. Tanpa Kota:
http://www.chem-is-
try.org/materi_kimia/instrumen_analisis/kromatografi1/kromatografi_cair_k
inerja_tinggi_hplc/, Artikel 6 Oktober 2007, diakses pada Januari 2015
pukul 20.00.
Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia Edisi ke IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia..
Gunawan, Gan S. 2009. Farmakologi dan Terapi edisi 5. Jakarta: Departemen
Farmakologi dan Teurapeutik FKUI.
Herlambang, Wisnu Satrio. 2014. Uji Disolusi Natrium Diklofenak Pada Sampel
Obat Tablet Secara KCKT. Bogor: Pusdiklat Industri Akademi Kimia
Analisis.
69
Jatnika, Eka Dian. 2007. Pembuatan Perangkat Lunak Sistem Validasi Metode
Analisis Kromatografi. Bandung. Institut Teknologi Bandung.
Joenoes, Nanizar Zaman. 2001. Ars Prescribendi (Resep Yang Rasional).
Surabaya : Airlangga University Press.
Johnson, Edward L., dan Robert Stevenson. 1991. Dasar Kromatografi Cair.
Bandung: Penerbit ITB
Katzung, Bertram G. 2004. Farmakologi Dasar dan Klinik . Jakarta : Penerbit
Buku Kedokteran EGC.
Laboratorium Product Development PT Merck Tbk. 2014. Protokol Validasi
Disolusi Natrium Diklofenak secara KCKT. Jakarta: PT Merck Tbk.
Lachman, L., Lieberman, H. A. and Kanig, J.L. 2008, Teori dan Praktek Farmasi
Industri edisi 3 Jilid 2, diterjemahkan dari bahasa Inggris oleh Suyatmi, S.
Jakarta: Universitas Indonesia Press.
Moffat, A.C., dkk. 2005. Clarke„s Analysis Of Drug And Poisons. Thirth edition
London: Pharmaceutical Press.
Neal, M. J. 2006. Farmakologi Medis (70 -71). Jakarta: Erlangga.
Nurbandini, Amalia. 2014. Laporan Prakerin di PT Merck Tbk. Bogor :
Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri SMK SMAK Bogor
Sari, Bina Lohita. 2011. Modul Analisis Kimia Farmasi Praktikum Kimia Terpadu
3. Bogor: Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri Sekolah
Menengah Analis Kimia Bogor.
Sweetman, S.C. 2009. Martindale The Complete Drug Reference 36. London:
Pharmaceutical Press.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., dan Glajch, J.L. 1997. Practical HPLC Method
Development. Edisi 2. New York: A John Willey & Sons Inc.
Syamsuni. 2006. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi. Jakarta : Penerbit
Buku Kedokteran EGC.
70
Syukri, Y. 2002. Biofarmasetika. Jogjakarta: UII Press.
Tjay, T. H., dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan,
dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi ke VI. Jakarta: PT Elex Media
Komputindo .
United States Pharmacopeia Convention. 2007. United States Pharmacopoeia
National Formulary, USP 30/NF 25. Twinbrook Parkway: United States
Pharmacopeial Convention.
United States Pharmacopeia Convention. 2011. United StatesPharmacopoeia
National Formulary, USP 34 /NF 29. Rockville USA: United
States Pharmacopeial Convention.
Voight, Rudolf. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta : Gadjah
Mada University Press.
Wati, Wulan Sadat. 2012. Laporan Prakerin di PT Taisho Pharmaceutical
Indonesia Tbk. Bogor : Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri SMK
SMAK Bogor.
71
LAMPIRAN
Lampiran 1 Rumus Perhitungan laju disolusi
Tahap asam:
% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050
x 22
9x
Px
mx
Astd
Aspl
a
a
Tahap buffer:
% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050
4 x
Px
mx
Astd
Aspl
b
b
Keterangan:
Aspla : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap asam
Astda : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap
asam
Asplb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap
buffer
Astdb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap
buffer
m : Bobot standar Na Diklofenak (mg)
P : Kemurnian standar Na Diklofenak
72
Lampiran 2 Rumus Perhitungan laju disolusi untuk uji akurasi
Tahap asam:
% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050
x 318W
65 x
Px
mx
Astd
Aspl
a
a
Tahap buffer:
% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 100
x 25W
xP
xm
xAstd
Aspl
b
b
Laju Disolusi Teoritis:
% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 50
7,301
Vs x Csxx
Perolehan Kembali:
% Perolehan Kembali = %100 Teoritis DisolusiLaju
Aktual DisolusiLaju x
Keterangan:
Aspla : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap asam
Astda : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap
asam
Asplb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap
buffer
Astdb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap
buffer
m : Bobot standar Na Diklofenak (mg)
W : Bobot sampel (placebo) (mg)
ω : Bobot rata-rata tablet (543 mg)
Cs : Konsentrasi spike solution (mg / mL)
Vs : Volume Ispike solution yang ditambahkan (mL)
74
Lampiran 3 Kromatogram Uji Spesifisitas
Kromatogram Fase Gerak
Kromatogram Blanko tahap asam
Kromatogram Blanko tahap buffer
Kromatogram Larutan Plasebo A tahap asam
75
Kromatogram Larutan Plasebo A tahap buffer
Kromatogram Larutan Plasebo B tahap asam
Kromatogram Larutan Plasebo B tahap buffer
Kromatogram Larutan Standar tahap asam
76
Kromatogram Larutan Standar tahap buffer
Kromatogram Larutan Sampel NP1 tahap asam
Kromatogram Larutan Sampel NP1 tahap buffer
Kromatogram Larutan Sampel NP2 tahap asam
78
Lampiran 4 Tabel Uji Linearitas
Tahap Asam
Nama Sampel Tingkat Konsentrasi
(%) Laju disolusi (%) Luas Puncak (AU)
L1-1 1% 0.2220 1125
L1-2 1% 0.2220 1761
L2-1 2% 0.4440 3628
L2-2 2% 0.4440 3610
L3-1 5% 1.1100 8858
L3-2 5% 1.1100 8581
L4-1 10% 2.2200 20495
L4-2 10% 2.2200 20117
L5-1 25% 5.5500 54900
L5-2 25% 5.5500 54734
Ext 100% 22.2000 222122
R2 1.000
R (≥ 0.995) 1.000
Y Intersep -1446.0
Luas Puncak pada konsentrasi 100% 222122
%Y Intersep (≤ 5.0% Luas Puncak Kons. 100%) -0.7%
TahapBuffer
Nama Sampel Tingkat Konsentrasi
(%) Laju disolusi (%) Luas Puncak (AU)
L1-1 30% 6.6768 64530
L1-2 30% 6.6768 64489
L2-1 60% 13.3537 130426
L2-2 60% 13.3537 131294
L3-1 100% 22.2561 218486
L3-2 100% 22.2561 219493
L4-1 110% 24.4817 240618
L4-2 110% 24.4817 240066
L5-1 120% 26.7073 263896
L5-2 120% 26.7073 262287
R2 1.000
R (≥ 0.995) 1.000
Y Intersep -1474.5
Luas Puncak pada konsentrasi 100% 218990
%Y Intersep (≤ 5.0% Luas Puncak Kons. 100%) -0.7%
79
Lampiran 5 Tabel Hasil Uji Ketegaran
Uji Stabilitas Larutan Standar
Larutan Standar (Tahap Asam)
Nama Sampel Waktu Analisis
(jam)
Tingkat Konsentrasi
(%)
Luas Puncak (IU)
% Deviasi
Ket.
SDRa-1 0 100.00 20028 - -
SDRa-2 4 100.00 20341 1.56%
SDRa-3 8 100.00 20134 0.53% -
SDRa-4 12 100.00 19929 -0.49% -
SDRa-5 24 100.00 20361 1.66% Maks
SDRa-6 48 100.00 20069 0.20% -
SDRa-7 72 100.00 20069 0.20% -
Deviasi Maksimal 1.7%
Larutan Standar (Tahap Buffer)
Nama Sampel Waktu Analisis
(jam)
Tingkat Konsentrasi
(%)
Luas Puncak (IU)
% Deviasi
Ket.
SDRb-1 0 100.00 225840 - -
SDRb-2 4 100.00 224909 -0.41%
SDRb-3 8 100.00 225854 0.01% -
SDRb-4 12 100.00 226229 0.17% -
SDRb-5 24 100.00 223596 -0.99% Maks
SDRb-6 48 100.00 225449 -0.17% -
SDRb-7 72 100.00 224143 -0.75% -
Deviasi Maksimal 0.8%
Uji Stabilitas Larutan Sampel
Larutan Standar (Tahap Asam)
Nama Sampel Waktu Analisis
(jam)
Tingkat Konsentrasi
(%)
Laju Disolusi (%)
% Deviasi
Ket.
SPRa-1 0 100.00 0 - -
SPRa-2 4 100.00 0 0.00%
SPRa-3 8 100.00 0 0.00% -
SPRa-4 12 100.00 0 0.00% -
SPRa-5 24 100.00 0 0.00% -
SPRa-6 48 100.00 0 0.00% -
SPRa-7 72 100.00 0 0.00% -
Deviasi Maksimal 0.00%
80
Larutan Standar (Tahap Buffer)
Nama Sampel Waktu Analisis
(jam)
Tingkat Konsentrasi
(%)
Total Laju Disolusi (%)
% Deviasi
Ket.
SPRb-1 0 100.00 93.0218 - -
SPRb-2 4 100.00 93.3620 -
SPRb-3 8 100.00 93.4462 0.37% -
SPRb-4 12 100.00 93.4645 0.46% -
SPRb-5 24 100.00 91.3521 0.48% -
SPRb-6 48 100.00 91.6344 -1.79% maks
SPRb-7 72 100.00 91.8611 -1.49% -
Deviasi Maksimal 1.8%
81
Uji Variasi Metode Parameter KCKT
Variasi Laju Alir (0,95 ml/mnt)
Tahap Asam
Sampel
Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 0.95 ml/mnt
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
Tahap Buffer
Sampel
Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 0.95 ml/mnt
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 95.5191
1-2 96.3946 1-2 96.1635
2-1 99.3434 2-1 99.3936
2-2 99.8921 2-2 99.1294
3-1 97.1325 3-1 97.1689
3-2 97.8900 3-2 97.5980
4-1 96.3642 4-1 95.8502
4-2 96.1272 4-2 96.0386
5-1 92.0833 5-1 92.6213
5-2 92.6428 5-2 92.4628
6-1 89.4110 6-1 89.0251
6-2 89.3604 6-2 89.3128
Rata-rata masing-masing 95.2267 95.0236
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
3.7% 3.6%
83
Variasi Laju Alir (1,05 ml/mnt)
Tahap Asam
Sampel
Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 1.05 ml/mnt
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
TahapBuffer
Sampel
Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 1.05 ml/mnt
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 95.8639
1-2 96.3946 1-2 95.3051
2-1 99.3434 2-1 99.0395
2-2 99.8921 2-2 98.3997
3-1 97.1325 3-1 96.9362
3-2 97.8900 3-2 97.4941
4-1 96.3642 4-1 95.1477
4-2 96.1272 4-2 95.3084
5-1 92.0833 5-1 92.1865
5-2 92.6428 5-2 92.1653
6-1 89.4110 6-1 88.8432
6-2 89.3604 6-2 89.2540
Rata-rata masing-masing 95.2267 94.6620
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
3.7% 3.5%
Rata-rata keseluruhan 94.9443
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.6%
84
Variasi pH Larutan A (pH 2.45)
Tahap Asam
Sampel
pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.455
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
Tahap Buffer
Sampel
pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.45
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 97.7576
1-2 96.3946 1-2 97.0139
2-1 99.3434 2-1 95.7310
2-2 99.8921 2-2 96.0277
3-1 97.1325 3-1 91.7292
3-2 97.8900 3-2 91.6186
4-1 96.3642 4-1 97.6756
4-2 96.1272 4-2 98.0526
5-1 92.0833 5-1 93.6061
5-2 92.6428 5-2 93.8766
6-1 89.4110 6-1 101.8082
6-2 89.3604 6-2 101.9391
Rata-rata masing-masing 95.2267 96.4030
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
3.7% 3.5%
Rata-rata keseluruhan 95.8149
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.6%
85
Variasi pH Larutan A (pH 2.55)
Tahap Asam
Sampel
pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.55
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
Tahap Buffer
Sampel
pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.55
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 97.8223
1-2 96.3946 1-2 98.2972
2-1 99.3434 2-1 96.4523
2-2 99.8921 2-2 96.3261
3-1 97.1325 3-1 91.7631
3-2 97.8900 3-2 92.2999
4-1 96.3642 4-1 98.2743
4-2 96.1272 4-2 98.3651
5-1 92.0833 5-1 93.9379
5-2 92.6428 5-2 93.3850
6-1 89.4110 6-1 101.2420
6-2 89.3604 6-2 101.1832
Rata-rata masing-masing 95.2267 96.6124
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
3.7% 3.3%
Rata-rata keseluruhan 95.9195
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.5%
86
Variasi Komposisi Fase Gerak (MeOH : Lar. A 693 : 297)
Tahap Asam
Sampel
Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (693 : 297)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
Tahap Buffer
Sampel
Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (693 : 297)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 95.9276
1-2 96.3946 1-2 95.8774
2-1 99.3434 2-1 99.2692
2-2 99.8921 2-2 98.4625
3-1 97.1325 3-1 97.5320
3-2 97.8900 3-2 98.0187
4-1 96.3642 4-1 95.5904
4-2 96.1272 4-2 96.1467
5-1 92.0833 5-1 91.7661
5-2 92.6428 5-2 91.9984
6-1 89.4110 6-1 88.3431
6-2 89.3604 6-2 88.2391
Rata-rata masing-masing 95.2267 94.7643
RSD masing-masing (≤ 5.0%) 3.7% 4.0%
Rata-rata keseluruhan 94.9955
RSD Keseluruhan (≤ 5.0%) 3.8%
87
Variasi Komposisi Fase Gerak (MeOH : Lar. A 707 : 303)
Tahap Asam
Sampel
Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (707 : 303)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 0.0000 1-1 0.0000
1-2 0.0000 1-2 0.0000
2-1 0.0000 2-1 0.0000
2-2 0.0000 2-2 0.0000
3-1 0.0000 3-1 0.0000
3-2 0.0000 3-2 0.0000
4-1 0.0000 4-1 0.0000
4-2 0.0000 4-2 0.0000
5-1 0.0000 5-1 0.0000
5-2 0.0000 5-2 0.0000
6-1 0.0000 6-1 0.0000
6-2 0.0000 6-2 0.0000
Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000
RSD masing-masing (≤ 10.0%)
0.0% 0.0%
Rata-rata keseluruhan 0.0000
RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%
Tahap Buffer
Sampel
Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (707 : 303)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
Repl. Anal.- Injeksi
Total Laju Disolusi (%)
NP1
1-1 96.0789 1-1 95.4308
1-2 96.3946 1-2 95.6733
2-1 99.3434 2-1 98.3363
2-2 99.8921 2-2 98.8194
3-1 97.1325 3-1 97.0851
3-2 97.8900 3-2 97.0392
4-1 96.3642 4-1 95.5518
4-2 96.1272 4-2 95.6715
5-1 92.0833 5-1 92.1343
5-2 92.6428 5-2 92.1402
6-1 89.4110 6-1 88.5081
6-2 89.3604 6-2 88.7448
Rata-rata masing-masing 95.2267 94.5946
RSD masing-masing (≤ 5.0%) 3.7% 3.7%
Rata-rata keseluruhan 94.9106
RSD Keseluruhan (≤ 5.0%) 3.6%