Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

9

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOLAKAR, KULIT BATANG DAN DAUN TANAMAN SAMBILOTO

(Andrographis paniculata Ness.) DENGAN METODELINOLEAT – TIOSIANAT

Sri WardatunProgram Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan.

ABSTRAK

Antioksidan adalah senyawa yang dapat menghambat reaksi radikal bebas dalamtubuh. Salah satu tumbuhan obat tradisional Indonesia yang memiliki aktivitas sebagaiantioksidan adalah sambiloto ( Andrographis paniculata Ness.). Pengujian antioksidan dariekstrak etanol akar, kul it batang dan daun sambiloto dilakukan mengunakan metodeLinoleat-Tiosianat dengan vitamin E sebagai kontrol positif . Warna yang terbentuk diukursecara spektrofotometri pada 479 nm. Tiga ekstrak dengan daya antioksidan terbesarterdapat pada ekstrak akar dengan konsentrasi 0,25% sebesar 79,37%, ekstrak kulit batangdengan konsentrasi 0,5% memiliki daya antioksidan 75,93%, dan ekstrak daun memilikidaya antioksidan sebesar 76,63%, sedangkan vitamin E memiliki daya antioksidan 75,37%.

Kata kunci : Sambiloto, antioksidan, metode linoleat -tiosianat

PENDAHULUANObat tradisional digunakan oleh

masyarakat secara luas sejak zaman dahuludan saat ini pemakaiannya semakindigalakkan untuk tujuan pencegahan,pengobatan suatu penyakit danmeningkatkan daya tahan tubuh. Dalampenggunaannya sehari-hari kebanyakanmasih berdasarkan pengalaman danpengetahuan yang diperoleh secara turun -temurun (secara empirik).

Seiring dengan perkembangan zaman,pemakaian obat tradisional di Indonesiamengalami kemajuan yang pesat. Saat ini,obat-obatan tradisional kembali dilirikmasyarakat sebagai salah satu alternatifpengobatan, disamping obat -obat modernyang sudah beredar di pasaran. Alasannya,obat tradisional jauh lebih murah, selain itulebih aman digunakan, dan khasiatbeberapa jenis obat tradisional pun tidakkalah dibandingkan obat-obat modern(Prapanza dan Marianto, 2003)

Indonesia merupakan salah satu negarapenghasil tanaman obat, salah satunyaadalah sambiloto (Andrographis paniculataNess.). Sambiloto adalah salah satu jenistanaman yang mengandung senyawa aktif

dan sangat potensial untuk dikembangkansebagai bahan baku obat (Muliawati,2002).

Sambiloto memiliki khasiat antara lainuntuk menyembuhkan gatal -gatal,keputihan, antipiretik, dan diuretik (Heyne,1987) serta mengobati beberapa penyakitdegeneratif seperti diabetes, tekanan darahtinggi dan reumatik (Harti dkk, 1991). DiIndonesia, penyakit degeneratif cenderungmeningkat disebabkan karena adanyaperubahan gaya hidup masyarakat salahsatunya adalah menyukai makanan yangberkadar lemak tinggi, hal tersebut dapatmenimbulkan radikal bebas yangberdampak pada kerusakan sel, sehinggatimbul penyakit tersebut (Limyati danEssay , 2003).

Radikal bebas merupakan suatumolekul yang sangat reaktif karenamempunyai satu atau lebih elektron yangtidak berpasangan. Radikal bebas sangatreaktif karena kehilangan satu atau lebihelektron yang bermuatan listrik, dan untukmengembalikan keseimbangannya makaradikal bebas berusaha mendapatkanelektron dari molekul lain atau melepas

Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

10

elektron yang tidak berpasangan tersebut(Dalimartha dan Moeryati, 1998).

Di dalam tubuh sendiri terdapatmekanisme antioksidan atau antiradikalbebas (Dyatmiko dkk., 2000), yangberfungsi melindungi tubuh terhadapserangan radikal bebas, yang dibentuk olehbeberapa enzim antioksidan dalam tubuhseperti superoksida dismutase, katalase danglutasion peroksidase. Radikal bebas inibisa dipunahkan oleh enzim antioksidantubuh tetapi memerlukan bantuan mineralZn, Cu, dan Se. Antioksidan alami yangberasal dari tumbuhan adalah senyawaflavonoid, fenol, polifenol, kurkuminoiddan tanin (Leswara dan Katrin, 1998).Senyawa golongan polifenol dapatmenghambat reaksi peroksidasi dalamtubuh sehingga dapat mencegah terjadinyaberbagai penyakit kronis seperti diabetes,kanker dan gangguan hati serta dapatmenghambat radikal bebas karena sifatantioksidannya. Senyawa antioksidan iniakan menyerahkan satu atau lebihelektronnya kepada radikal bebas sehinggadapat menghentikan kerusakan yangdisebabkan oleh radikal bebas, sebagaipenangkap radikal bebas dan mencegahterjadinya reaksi berantai (Dyatmiko dkk.,2000).

Agar obat tradisional dapatdipertanggungjawabkan secara medikmaka perlu dilakukan pengujian ilmiahtentang khasiat, keamanan, dan standarkualitasnya (Ma’at, 2000). Oleh karena ituperlu dilakukan penelitian uji aktivitasantioksidan dalam ekstrak sambiloto.Metode penentuan yang digunakan adalahmetode spektrofotometri. Hasil penentuandiharapkan dapat menjadi sumberinformasi dalam penggunaan sambilotosebagai antioksidan.

BAHAN DAN METODEAlat dan Bahan : akar, kulit batang dan

daun tanaman sambiloto (Andrographispaniculata Ness.), amil alkohol,ammonium tiosianida 30%, asam linoleat,akuades, besi(III) klorida, dapar fosfat 0,05

M, etanol 75%, besi(II) sulfat 0,02 Mdalam asam klorida 3,5%, asam kloridapekat, asam klorida 1% (encer), metanol ,serbuk magnesium, vitamin E (α -tokoferol), cawan porselin, gelas piala,pengayak no. 40, botol gelap, pipetvolumetri, desikator, grinder, komporlistrik, tabung reaksi, timbangan listrik (O-Haus), oven, spektrofotometer UV -VisGenesys.

Pembuatan Ekstrak Sambiloto :Ekstrak dibuat dengan cara maserasi

menggunakan 500 g simplisia keringmasing-masing akar, kulit batang dan daunyang telah diayak (dihitung terhadap %kadar air), dimaserasi dengan etanoldengan perbandingan 1:5, menggunakanbejana tertutup sambil diaduk secaramanual selama tiga jam, kemudiandiendapkan selama satu malam dandisaring dengan kertas saring kasarkemudian dikentalkan dengan rotavaporpada suhu 30ºC (sampai kental) kuranglebih selama delapan jam selanjutnyadikeringkan dengan oven pada suhu 40ºCsehingga diperoleh ekstrak kering.

Pembuatan Kontrol Positif dan KontrolNegatif

Kontrol positif digunakan vitamin E (α-tokoferol) dengan konsentrasi 0,25%.Sebanyak 0,25 g Vitamin E ditimbang dandilarutkan dalam labu ukur 100 mL denganetanol 75%, kemudian dipipet sebanyak 4mL dan dimasukkan ke dalam botol gelapdengan volume 25 mL. Setelah ituditambahkan 4 mL asam linoleat dalametanol 75%, 8 mL dapar fosfat 0,05 M dan3,9 mL akuades. Botol gelap ditutup dandimasukkan ke dalam oven dengan suhu40°C, dan didiamkan selama 24 jam.Kontrol negatif adalah 4 mL asam linoleatdalam etanol 75%, 8 mL dapar fosfat 0,05M dan 3,9 mL air suling tanpa penambahanα-tokoferol.

Pengujian AntioksidanEkstrak kering akar, kulit batang dan

daun sambiloto yang telah diperoleh,

Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

11

dilarutkan dengan etanol 75%. Larutandibuat dalam tiga konsentrasi yaitu 0,1;0,25 dan 0,5% (dihitung terhadap % kadarair ekstrak). Masing-masing larutan ujidiambil sebanyak 4 mL, dimasukkan kedalam botol gelap dan ditambahkan 4 mLasam linoleat dalam etanol (75%), 8 mLdapar fosfat 0,05 M dan 3,9 mL akuades.Botol gelap ditutup rapat dan dima sukkanke dalam oven dengan suhu 40ºC laludidiamkan selama 24 jam. Setelah 24 jamlarutan uji, kontrol positif dan kontrolnegatif diambil sebanyak 0,1 mL dandimasukkan ke dalam tabung reaksiselanjutnya ditambahkan 9,7 mL etanol(75%), 0,1 mL ammonium tiosianat (30%),kemudian dikocok homogen dandidiamkan selama 3 menit. Selanjutnyaditambahkan 0,1 mL Fe(II) sulfat 0,02 Mdalam HCl (3,5%) dan dikocok kembalisampai homogen. Warna merah yangterjadi diukur menggunakanspektrofotometer UV-Vis pada panjanggelombang 479 nm dengan dua kaliulangan. Pengukuran tersebut dilakukansetiap 24 jam selama 10 hari (Kikuzaki etal, 1999).

Rancangan PenelitianUntuk mengetahui pengaruh ekstrak

etanol akar, kulit batang dan daun sebagaiantioksidan alami terhadap radikal bebasyang dibentuk oleh asam linoleat sertamenyimpulkan hasil percobaan, makadigunakan metode eksperimentalrancangan acak lengkap (RAL), dengan 11perlakuan dan dua ulangan. Pengujian datadilakukan berdasarkan analisis ragamuntuk RAL. Apabila uji F menunjukkanadanya pengaruh (F.05 Fh F.01), ujilanjut Duncant dilakukan untuk melihatperbedaan antar perlakuan.

HASIL DAN PEMBAHASANEkstrak yang diperoleh baik daun,

kulit batang dan akar berwarna hijaukehitaman- coklat dengan aroma yang khasdan berasa pahit. Setelah dipekatkandengan rotavapor ekstrak daun menjadi

hijau kehitaman, kulit batang tetapberwarna hijau dan akar berwarna coklat

Dalam penelitian ini substrat yangdigunakan adalah asam linoleat. Asamlinoleat akan dioksidasi oleh oksigen yangterdapat dalam botol gelap tersebut. Prosesoksidasi asam linoleat dikatalisis olehcahaya, suhu, pH, oksigen, ion logam danradikal lipid. Oleh karena itu, inkubasiasam linoleat dikondisikan pada suhu 40 oCagar suhu tinggi dapat mengkatalisisoksidasi asam linoleat.

Setelah diinkubasi selama 24 jamdilakukan pengukuran kompleksferitiosianat yang berwarna merahmenggunakan spektrofotometer denganpanjang gelombang maksimum yang dicaripada kisaran 450-550 nm. Panjanggelombang maksimum (maks) yangdiperoleh sebesar 479 nm.Adapun reaksiyang terjadi adalah:

2Fe3+ + 6SCN- FeFe(SCN)6Kompleks merah

Pada uji potensi antioksidan, dibuatbeberapa larutan antara lain kontrol negatif,kontrol positif dan larutan uji ekstrak akar,kulit batang dan daun pada konsentrasi 0,1;0,25 dan 0,5%. Kontrol positif dan larutanuji dengan berbagai konsentrasimenghambat laju oksidasi(hidroperoksida), tetapi kontrol negatifsama sekali tidak dapat menghambat lajuoksidasi, oloeh sebab itu absorbansi (A)pada kontrol negatif menentukan maksimalterbentuknya hidroperoksida.

Daya antioksidan menggambarkanbesarnya potensi masing-masing ekstrakuntuk berperan sebagai antioksidan. Dapatdikatakan, semakin besar konsentrasi,semakin besar pula aktivitasantioksidannya terhadap proses oksidasiasam linoleat.Absorban kontrol positif dan larutan ujidapat dilihat pada Tabel 1, sedangkan dayaantioksidan dapat dilihat pada Tabel 2.Berdasarkan tabel 1 dapat dilihat bahwaabsorban kontrol positif dan larutan ujisetelah diinkubasi selama 10 hari semakin

Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

12

menurun yang berbanding terbalik dengandaya antioksidan.

Berdasarkan Tabel 2 dapat dilihatbahwa daya antioksidan untuk kontrol

positif adalah sebesar 75,37% hampirsetara dengan ekstrak daun 0,5%, ekstrakkulit batang 0,5% dan ekstrak akar 0,25%

Tabel 1. Serapan larutan selama 10 hari

Absorban Kontrol+

Kontrol-

Daun(%) Kulit Batang (%)

Akar(%)

Hari ke0,10 0,25 0,50 0,10 0,25 0,50 0,10 0,25 0,50

10,145 0,516 0,458 0,298 0,141 0,255 0,255 0,372 0,134 0,129 0,118

20,188 0,673 0,591 0,321 0,179 0,321 0,319 0,428 0,169 0,137 0,144

30,185 0,67 0,589 0,305 0,178 0,321 0,319 0,425 0,169 0,143 0,143

40,179 0,619 0,549 0,299 0,156 0,287 0,293 0,388 0,155 0,124 0,129

50,161 0,587 0,515 0,281 0,137 0,271 0,281 0,367 0,149 0,122 0,127

60,135 0,505 0,44 0,251 0,128 0,248 0,245 0,315 0,141 0,121 0,115

70,125 0,47 0,414 0,231 0,123 0,225 0,225 0,285 0,123 0,119 0,114

80,125 0,48 0,417 0,231 0,115 0,225 0,235 0,275 0,122 0,101 0,112

90,126 0,495 0,425 0,237 0,113 0,231 0,235 0,284 0,121 0,105 0,107

100,117 0,475 0,405 0,221 0,111 0,213 0,223 0,27 0,116 0,098 0,103

Tabel 2. Daya antioksidan selama 10 hari

Dayaantioksidan Kontrol +

Daun(%) Kulit batang (%)

Akar(%)

Hari(%) 0,10 0,25 0,50 0,10 0,25 0,50 0,10 0,25 0,50

171,90 11,24 42,25 72,67 50,58 50,58 38,71 74,03 75,00 77,13

272,07 12,18 52,30 73,40 52,30 52,60 57,24 74,89 79,64 78,60

372,39 12,09 54,48 73,43 52,09 52,39 57,65 74,78 78,66 78,66

471,08 11,31 51,70 74,80 53,63 52,67 59,54 74,96 79,97 79,16

572,57 12,27 52,13 76,66 53,83 52,13 59,95 74,62 79,22 78,36

673,27 12,87 50,30 74,65 50,89 51,49 60,32 72,08 76,04 77,23

773,40 11,91 50,85 73,83 52,13 52,13 64,91 73,83 74,68 75,74

873,96 13,13 51,88 76,04 53,13 51,04 74,55 74,58 78,96 76,67

974,55 14,14 52,12 77,17 53,33 52,53 74,30 75,56 78,79 78,38

1075,37 14,74 53,47 76,63 55,16 53,05 75,93 75,59 79,37 78,32

% daya antioksidan dihitung berdasarkan rumus sbb:

% Daya antioksidan = Absorban kontrol negatif – Absorban sampel x 100%Absorban kontrol negatif

Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

13

Hasil analisis statistik dengan ujiDuncan (=0,01) diperoleh bahwa potensiantioksidan dari ekstrak daun 0,5%, ekstrakkulit batang 0,5% dan akar padakonsentrasi (0,1; 0,25; dan 0,5%) tidakberbeda nyata dengan kontrol positif.Berdasarkan hasil tersebut ekstrak daunpada konsentrasi 0,5%, ekstrak kulit batangpada konsentrasi 0,5% dan ekstrak akarpada konsentrasi 0,1; 0,25 dan 0,5%memiliki aktivitas antioksidan yang lebihbesar dibanding vitamin E dan memilikikemampuan sebagai antioksidasi yanglebih baik dibanding ekstrak daun dan kulitbatang sambiloto pada konsentrasi yanglebih rendah

KESIMPULAN1. Daya antioksidan ekstrak etanol daun

pada konsentrasi 0,5%, memiliki dayaantioksidan sebesar 76,63%, ekstrakkulit batang pada konsentrasi 0,5%memiliki daya antioksidan 75,93%, danekstrak akar pada konsentrasi 0,1; 0,25dan 0,5% masing-masing memilikidaya antioksidan 75,59; 79,37; dan78,32%. Sedangkan daya antioksidanvitamin E sebesar 75,37%.

2. Ekstrak etanol daun pada konsentrasi0,5%, ekstrak kulit batang padakonsentrasi 0,5% serta ekstrak akarpada konsentrasi 0,1; 0,25 dan 0,5%memiliki aktivitas antioksidan lebihbaik dibandingkan aktivitas antioksidanvitamin E.

SARANPerlu dilakukan penelitian lanjutan

untuk mengetahui senyawa bioaktif yangberperan sebagai antioksidan danmenentukan kadarnya.

DAFTAR PUSTAKA

Dalimartha, S dan S.Moeryati. 1998. AwetMuda Dengan Tumbuhan Obat danDiet Suplemen. Trubus Agrawidya .Jakarta.Hal: 120-125.

Dyatmiko, W,. MH Sentosa dan AF Hafid.2000. Aktivitas Penangkapan RadikalBebas Dalam Sistem Molekuler danSeluler Sari Rimpang Tanaman ObatZingiberaceae. Lembaga PenelitianUniversitas Airlangga. Pusat PenelitianObat Tradisional UniversitasAirlangga. Surabaya.

Harti, S., S.Zuraina dan E.Sukarti, 1991.Survey Produsen Jamu Gendong diSurabaya. Pusat Penelitian ObatTradisional Unika Widya Mandala.Surabaya.

Heyne, K. 1987 Tumbuhan BergunaIndonesia.. Jilid 3. Yayasan SaranaWana jaya. Jakarta.

Limyati, A.D dan Y.S. Essay. 2003. UjiAntioksidan, Antiradikal Bebas DanPenentuan EC 50 EkstrakDiklorometana Serta Ekstrak MetanolHerba Sambiloto (Andrographispaniculata Burn.F.Ness.). Jurnal ObatBahan Alam.Vol.1. No.2. Surabaya.

Leswara, D., dan N. Katrin. 1998.Perbandingan Daya AntioksidanBeberapa Jenis Benalu MenggunakanMetode Spektrofotometri. WartaTumbuhan Obat. Jakarta. Vol 4. Hal10-12.

Kikuzaki, H., S.Hara., K.Yayoi., dan N.Nakatani. 1999. AntioxidativePhenylpropanoids From Berries OfPimenta dioica. Journal OfPhytochemistry. 52 : 1307-1312.

Maat. 2001 Manfaat Tanaman Obat AsliIndonesia Bagi Kesehatan. LokakaryaPengembangan Agribisnis BerbasisBiofarmaka. Jakarta

Muliawati, E.S. 2002. Kajian Tingkat SerapanHara, Pertumbuhan dan ProduksiSambiloto (Andrographis paniculataNess) pada Beberapa Komposisi MediaTanam dan Tingkat Penyiraman.Prosiding Simposium Nasional IITumbuhan Obat dan aromatikAPINMAP. Bogor. Hal 251-252

Prapanza, I dan L.A Marianto, SP. 2003.Khasiat dan Manfaat Sambiloto : RajaPahit Penakluk Penyakit . Agromedia .

Fitofarmaka, Vol. 1 No.2 , Pebruari 2011: 9-13

31