Kuantitas Ika Baru

7/27/2019 Kuantitas Ika Baru

1/46

Perhitungan Kuantitas Mikroorganisme

Ika Indra Wijaya (15020110308) Ayyub Harly Nurung, S.Farm

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Dalam kehidupan sehari-hari selalu berhubungan dengan berbagai

macam mikroorganisme baik bakteri, kapang maupun khamir. Untuk

mempermudah dalam mempelajari jenis dan sifat mikroorganisme yang ada.

Jumlah mikroorganisme yang ada dalam suatu bahan sangat bervariasi

tergantung dari jenis bahan itu sendiri dan kondisi lingkungan. Jumlah

mikroorganisme dapat dihitung dengan berbagai cara.

Metode untuk pengujian suatu produk farmasi terbagi atas tiga yaitu uji

angka lempeng total bakteri, uji angka lempeng total kapang dan dengan

cara Most Probaable Number (MPN). Sediaan-sediaan farmasi yang dipilih

dalam praktikum karena merupakan sediaan kemasan yang banyak

dikonsumsi oleh manusia yang belum diketahui mutu bahannya, proses

pengawetannya bahkan jumlah jasad renik yang ada dalam sediaan tersebut.

Pengujian angka lempeng total bakteri diperlukan untuk

mengetahui jumlah bakteri yang terdapat dalam sediaan khususnya bakteri

aerob, sedangkan uji angka lempeng total kapang juga diperlukan untuk

mengetahui jumlah kapang yang terdapat dalam sediaan. Untuk uji Most

Probable Number bertujuan untuk mengetahui jumlah bakteri coliform yang

terdapat dalam setiap sediaan.


2/46



B. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas dapat disimpulkan rumusan

masalah sebagai berikut :

1. Bagaimana cara menentukan Angka Lempeng Total (ALT) Bakteri, Angka

kapang, dang nilai MPN (Most Probable Number) suatu sampel ?

2. Apakah sampel selai buah, kiranti, sup cream royco, marjan, dan

olay pelembab

layak untuk beredar dipasaran / masyarakat ?

C. Maksud Percobaan

Adapun maksud dari praktikum ini :

a. Mengetahui dan memahami cara menentukan Angka Lempeng Total

(ALT) bakteri dan Angka kapang suatu sampel.

b. Mengetahui dan memahami cara menentukan nilai MPN (Most Probable

Number) dari suatu sampel.

c. Mengetahui dan memahami syarat-syarat suatu produk agar bisa beredar

di masyarakat.

D. Tujuan praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah :

a. Untuk menentukan nilai ALT bakteri dan Angka kapang produk selai

buah, kiranti, sup cream royco, marjan, dan olay pelembab.

b. Untuk menentukan nilai MPN (Most Probable Number) produk selai

buah, kiranti

, sup cream royco

, marjan

, dan olay pelembab

.


3/46



c. Untuk menentukan kelayakan sampel selai buah, kiranti, sup cream

royco

, marjan

, dan olay pelembab

beredar di masyarakat.

F. Manfaat Praktikum

Adapun manfaat dari praktikum ini adalah

a. Mahasiswa dapat mengetahui metode-metode menghitung jumlah koloni

bakteri dan fungi.

b. Mahasiswa dapat menentukan layak atau tidaknya suatu sampel untuk

beredar di masyarakat.

c. Mahasiswa dapat memperoleh data-data tentang ALT bakteri, Angka

kapang dan nilai MPN sampel selai buah, kiranti, sup cream royco,

marjan, dan olay pelembab.


4/46



BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Teori Umum

Dalam analisis kuantitatif, ada beberapa cara yang dapat digunakan

untuk menghitung atau mengukur jumlah mikroorganisme didalam suatu

bahan atau sediaan farmasi, makanan minuman dan kosmetika (Natsir M,

2008).

Beberapa bakteri penyebab penyakit seringkali terdapat dalam jumlah

kecil di dalam makanan. Penyakit-penyakit yang dapat ditimbulkan karena

adanya mikroba tersebut dalam jumlah yang besar dapat mengakibatkan

terjadinya infeksi dari baKteri patogen atau keracunan oleh bakteri penghasil

racun. Oleh karena itu perlu dilakukan uji kuantitatif untuk mengetahui jumlah

bakteri tersebut yang terdapat di dalam makanan (Waluyo, 2008).

Kualitas mikrobiologis air susu sapi segar masih menjadi masalah

kesehatan masyarakat sampai saat ini. Kota Semarang merupakan salah

satu kota yang memiliki daerah penghasil air susu sapi dan tingkat konsumsi

susu sapi segar masyarakat mengalami peningkatan. Air susu merupakan

bahan pangan yang mengandung gizi seimbang yang diperlukan oleh tubuh,

namun air susu sangat rentan terjadi kontaminasi serta menjadi media

pertumbuhan bakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jumlah total

bakteri dan coliform dalam air susu sapi segar pada pedagang pengecer di


5/46



Kota Semarang berdasarkan standart SNI. Pengujian 13 sampel air susu dari

13 pedagang pengecer diuji di laboratorium untuk mengetahui jumlah total

bakteri dan coliform, metode pengujian untuk total bakteri menggunakan Pour

Plate Count dan pengujian coliform menggunakan metode Most Probable

Number. Hasil menunjukkan bahwa jumlah total bakteri tertinggi adalah 1,1 x

10 CFU/ml, angka tersebut melebihi batas maksimum standart SNI yaitu 1 x

106 CFU/ml. Keseluruhan sampel penelitian memiliki jumlah coliform (40

MPN/ml-24.000 MPN/ml) angka tersebut melebihi batas SNI yakni 20

MPN/ml, hal ini menunjukkan adanya cemaran kotoran pada produk air susu

dan sanitasi lingkungan yang buruk. Kualitas mikrobiologis air susu sapi

dipengaruhi oleh status kesehatan sapi, umur sampel dan penerapan

prosedur pemerahan dan penanganan air susu sapi segar pasca panen

secara tepat (Benito A.K,Tahun 2012).

Selama proses degradasi anaerobterjadi perubahan populasi mikroba

(Eulis T, 2009), pada tahap awal bahan organic komplek didekomposisi

dengan proses hidrolisa menjadi bahan organic sederhana, bakteri yang

berperan pada tahap ini adalah Clostridium acteinum, Bacteriodes

ruminicola, Bifidobacterium sp, Eschericia sp, Enterobacter sp, dan

Desulfobio sp. Kemudian pada tahapkedua bahan organic sederhana akan

didekomposisi menjadi asam organic oleh bakteri Lactobacillus sp,

Streptococcus sp.Selanjutnya pada tahap tiga asam organicdidekomposisi

menjadi gas methan dan CO2 oleh kelompok bakteri metanogenic


6/46



diantaranya Methanobacterium melianskii, Methanococcus sp, dan

Methanosarcina sp. Indicator sanitasi lingkunganselain jumlah bakteri total

juga jumlah koliform. Bakteri yang termasuk ke dalam kelompok koliform

adalah Escherichia coli, Edwardsiella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter,

Hafnia, Serratia, Proteus, Arizona, Providence, Pseudomonas dan Bacil

paracolon (Eulis T.M., 2008). Populasi mikroorganisme dalam sludge

dipengaruhi oleh kelangsungan proses pembentukan biogas, sedangkan

proses pembentukan biogas dipengaruhi oleh tersedianya bahan organic

dalam substrat(C/N rasio) dan aktivitas mikroorganisme. C/N rasio yang tinggi

akan memperlambat proses penguraian, sebaliknya jika C/N rasio terlalu

rendah maka karbon akan segera habis dan proses degradasi anaerob

berhenti dan akan mengakibatkan pertumbuhan mikroorganisme terganggu

(Bryant, 1976 dalam Yuli A.H. 1996). Perlakuan dengan berbagai kombinasi

kotoran ternak dalam digester biogas dapat menurunkan jumlah bakteri total

coliform (Ellin H, dkk,2008) (Ludfi Santoso, 2010).

Pertumbuhan dapat dimanipulasi dan dikendalikan dengan berbagai

cara yang memudahkan si peneliti yang sedang menyelidiki fenomena dasar

yang berkaitan dengan proses proses kehidupan. Sel dapat dipelajari pada

semua stadium pertumbuhan. Secara mikroskopis dan kimiawi, di dalam

usaha untuk mengkorelasikan substansi yang disintesis selama pertumbuhan

dengan struktur yang tampak di dalam sel. Hasil-hasil yang diperoleh dari

penelitian dengan sel bakteri memberikan petunjuk atau pedoman bagi


7/46



penelitian-penelitian serupa mengenai sel pada bentuk-bentuk kehidupan

lain, termasuk manusia (Pelczar, 2007).

Jumlah mikroba pada suatu bahan dapat ditentukan dengan berbagai

macam cara, tergantung dari bahan dan jenis mikroba yang ditentukan. Pada

umunnya ada 3 cara perhitungan jumlah mikroba, yakni perhitungan jumlah

sel, perhitungan massa sel secara langsung, dan perhitungan massa sel

secara tidak iangsung (Waluyo, 2008).

1. Perhitungan Jumlah Sel

Ada beberapa cara mengukur jumlah sel yaitu dengan hitungan

cawan (plate count), secara elektronik dengan bantuan alat Colony

Counter (Penghitung Koloni), dan MPN (Most Probable Number)

(Waluyo, 2008).

a. Metode Hitungan Cawan

Prinsip metode ini adalah apabila ada satu sel mikroorganisme

yang masih hidup ditumbuhkan pada medium yang sesuai, maka sel

tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat

dilihat langsung dan dihitung dengan mata pada media yang

digunakan dan setelah diiakukari inkubasi pada suhu dan waktu

tertentu(Natsir M, 2008).

Metode ini merupakan cara yang paling sensitif untuk

menentukan jumlah jasad renik, dengan alasan: (Natsir M, 2008).

1) Hanya sel mikroba yang hidup yang dapat dihitung.


8/46



2) Beberapa jasad renik dapat dihitung sekaligus.

3) Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba, karena

koloni yang terbentuk mungkin berasal dari mikroba yang

mempunyai penampakan spesifik

Selain keuntungan-keuntungan tersebut di atas, metode hitungan

cawan juga mempunyai kelemahan sebagai berikut: (Natsir M, 2008).

1) Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenamya,

karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk koloni.

2) Medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan

jumlah yang berbeda pula.

3) mikroba yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium

padat dan membentuk koloni yang kompak, jelas, tidak menyebar.

4) Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga

pertumbuhan koloni dapat dihitung.

Pada hitungan cawan ini, bahan yang diperiksa yang

diperkirakan mengandung lebih dari 300 koloni mikroorganisme per

mL atau pergram atau per-cm, memerlukan perlakuan pengenceran

sebelum diinokulasi ke dalam media agar dalam cawan petri. Setelah

masa inkubasi selesai, maka akan terbentuk koloni-koloni pada

cawan tersebut dalam jumlah yang terbaik yang dapat dihitung

adalah 30-300 koloni percawan petri (Natsir M, 2008).


9/46



Syarat perhitungan jumlah bakteri dengan metode hitungan

cawan adalah sebagai berikut: (Natsir M, 2008).

l) Jumtah koloni tiap cawan antara 30-300 koloni, bila tidak ada,

dipilih yang mendekati.

2) Bila perbandingan jumlah bakteri antara pengenceran yang lebih

besar dengan pengenceran sebelumnya < 2, hasilnya dirata-rata,

tetapi bila > 2, yang dipakai jumlah bakteri dari pengenceran

sebelumnya.

3) Bila dengan ulangan dan hasil memenuhi syarat, hasilnya dirata-

rata.

b. Metode MPN (Most probable Number)

Pada metode ini digunakan medium cair dengan tabung-tabung

reaksi dan tabung durham. Perhitungannya dilakukan berdasarkan atas

jumlah tabung reaksi yang positif yaitu yang ditumbuhi oleh

mikroorganisme setelah dilakukan inkubasi pada suhu dan waktu tertentu.

Pengamatan terhadap tabung yang positif dapat dilihat dan diamati

dengan adanya perubahan warna dari medium dan terbentuknya gas

dalam tabung durham yang diletakkan secara terbalik (Natsir M, 2008).

Metode MPN biasanya digunakan untuk menghitung jumlah

mikroba di dalam sampel yang berbentuk cair, meskipun dapatjuga

digunakan untuk sampel yang berbentuk padat dengan terlebih dahulu

membuat suspensi 1 : 10 dari sampel tersebut. Kelompok mikroorganisme


10/46



yang dapat dihitung dengan metode MPN juga bervariasi tergantung dari

medium yang digunakan untuk pertumbuhan. Perhitungan MPN

berdasarkan pada jumlah tabung reaksi yang positif, yakni yang ditumbuhi

oleh mikroba setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Kriteria

tabung positif atau tidak ditandai dengan timbulnya kekeruhan atau gas

pada tabung Durham (Waluyo, 2008).

Nilai MPN sampel dapat dihitung sebagai berikut: (Natsir M, 2008).

MPN sampel = Nilai MPN x 1Pengenceran tabung tengah

c. Perhitungan Massa Sel secara Tidak Langsung

1. Analisis komponen sel (protein, ADN, ATP, dan sebagainya).

2. Analisis produk katabolisme (metabolit primer, metabolit sekunder,

panas).

3. Anaiisis konsumsi nutrien (karbon, nitrogen, mineral, oksigen, asam

amino, dan sebagainya).


11/46



B. Uraian Bahan

1. Air Suling (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : AQUA DESTILLATA

Sinonim : Aquades

RM / BM : H2O / 18,02

Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak

berasa.

Kegunaan : Sebagai pengencer pertama.

2. Alkohol 70 % (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : AETHANOLUM

Sinonim : Alkohol

Pemerian : Cairan tak berwarna, jernih, mudah menguap

dan mudah bergerak; bau khas rasa panas.

Mudah terbakar dengan memberikan nyala biru

yang tidak berasap.

Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, kloroform P dan

dalam eter P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari

cahaya; di tempat sejuk, jauh dari nyala api.

Kegunaan : Sebagai aseptis


12/46



3. Agar (Ditjen Pom, 1979)

Nama resmi : AGAR

Nama lain : Agar-Agar

Pemerian : Berkas potongan memanjang, berlekatan atau

berbentuk keping, serpih atau butiran, jingga

lemah kekuningan sampai kuning pucat atau

berwarna, tidak berbau atau lemah, rasa

berlendir.

Kelarutan : Praktis tidak larut dalam air , dan larut dalam air

mendidih.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan : Sebagai bahan pemadat medium.

4. Laktosa (Ditjen POM,1979)

Nama resmi : LACTOSUM

Sinonim : Laktosa

Pemerian : Serbuk hablur ; putih ; tidak berbau, rasa agak

manis

Kelarutan : Larut dalam 6 bagian air, larut dalam 1 bagian

air mendidih , sukar larut dalam etanol (95 %) P ,

praktis tidak larut dalam kloroform P dan dalam

eter P

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.


13/46



Kegunaan : Campuran medium LB

5. Pepton ( Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : PEPTON

Nama lain : Pepton daging

Pemerian : Serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau

khas tidak busuk

Kelarutan : Larut dalam air, memberikan larutan berwarna

coklat kekuningan yang bereaksi sedikit asam,

tidak larut dalam etanol (95 %) P dan dalam eter

P.

Kegunaan : Sebagai sumber makanan

6. Dekstrosa(Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Dextrosum

Nama lain : Dekstrosa, glukosa

RM / Bm : C6H12O6 / 180,16

Pemerian : Hablur tidak berwarna, serbuk hablur atau serbuk

granul putih, tidak berbau, manis.

Kelarutan : Mudah larut dalam air, sangat mudah larut dalam

air mendidih, larut dalam etanol mendidih, sukar

larut dalam etanol

Kegunaan : Sebagai sumber karbohidrat


14/46



C. Uraian Sampel

1.

Olay Pelembab

Nilai SNI : 5x 10-2 kol/g

ALT : Maks 105 kol/g

Komposisi : air, gliserin, ethylhexyl salicylate,

niacinamide, butyl

methoxydibenzolymethane, isopropyl

isostearate, octocrylene,

phenylbenzimidazole sulfonic acid,

polyacrylamide, triethanolamine, stearyl

alcohol, tocopheryl acetate, C13-14

isoparaffin, benzyl alcohol, panthenol, PTFE,

cetyl alcohol, titanium dioxide, behenyl

alcohol, sukrosa polycottonseedate,

karbomer, ethylparaben, fragrance,

methylparaben, laureth-7, cetaryl alcohol,

cetearyl gluciside, PEG-100 stearate,

propylparaben, sodium ascorbyl phosphate,

disodium EDTA, PEG-4 laurate, BHT, stearic

acid, zinc oxide, iodopropynyl

butylcarbamate, camellia sinensis leaf


15/46



extract, ammonium

polyacrylate,triethoxycaprylylsilane.

Produksi : PT. Procter & Gamble Home Products

Indonesia

2. Selai super sweet strawberry

Komposisi : Buah asli, gula, pektin, asam sitrat, sodium

benzoate

Diproduksi oleh C.V Mikasa

Nomor SNI : 01-3746-1995

Parameter Syarat

ALT Maks 5 x 102 kol/g

MPN E. Coli < 3 APM/g

Angka Kapang dan khamir Maks 50 kol/g

3. Kiranti

Komposisi : Curcumae domesticae Rhizoma (Kunyit)

30g, Tamarindi Pulpa (Asam Jawa) 6g,

Kaempferiae Rhizoma (Kencur) 2g,

Arengae pinnata Fructose (Gula Jawa)

2.5g, Zingiberis Rhizoma (Jahe) 0.8g,

Paullinia Cupana (Paulinia) 0.23g,


16/46



Cinnamomi Cortex (Kayu Manis) 0.1g,

Air/Water up to 150ml.

BPOM RI TR 042631971

Produksi : PT Ultra Prima Abadi

No SNI : 01-4452- 1998

ALT : maks 2.102 kol/ml

MPN Coliform : < 3 APM/ml

Angka Kapang Khamir : Maks 50 kol/ml

4. Sirup Marjan

Komposisi : gula pasir, air, konsentrat melon, pengatyr

keasaman asam sitrat, pewarna (Tartrazin

(CI 240) dan baru berlian CCI 42090)

Produksi : PT. Laselle Food Indonesia Depok

No SNI : 01 3544 1994

ALT : Maks 5.102

kol/ml

MPN Coliform : Maks 20 APM/ml

MPN E. coli :< 3 APM/ml

Angka Kapang Khamir : Maks 50 kol/ml

5. Sup cream royco

Komposisi : Tepung jagung, tepung gandum, tepung susu

skim, garam, gula, penguat rasa MSG


17/46



(Monosodium Glutamat), daging dan lemak

ayam, minyak sawit terhidrogenisasi, sayuran

yang dikeringkan, ekstrak ragi, penguat rasa

dinatrium iosinat & guanilat, dan bumbu

lainnya.

Produksi : PT. Unilever Indonesia

No SNI : 01-4967-1999

ALT : maks 1.105 kol/g

MPN Coliform : maks 10 APM/g

Angka Kapang Khamir : maks 1.103 kol/g


18/46



BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat-alat yang dipakai

Pada perobaan ini digunakan alat yaitu Botol Cokelat, Bunsen, Cawan

petri steril, Enkas, Erlenmeyer, Hand spray, Inkubator, Korek api, Sendok

tanduk, Spoit.

B. Bahan-bahan yang digunakan

Adapun bahan-bahan yang digunkan pada percobaan yaitu Olay

pelembab, kiranti, sirup marjan, selai super sweet strawberry, sup cream

royco, tissue, medium NA, medium PDA, medium LB, aquadest, kapas.

C. Cara Kerja

a. Pengenceran sampel

Dimasukkan Olay pelembab ke dalam botol coklat I sebanyak 1

gram yang berisi aquadest steril 9 mL. Dilarutkan hingga homogen.

Campuran tersebut dianggap sebagai larutan sampel untuk konsentrasi

10-1

. Diambil 1 mL larutan dari tabung reaksi I ke tabung reaksi II yang

berisi 9 mL aquadest steril. Dianggap sebagai larutan sampel konsentrasi

10-2,lalu dihomogenkan. Diambil 1 mL larutan dari tabung reaksi II ke

tabung reaksi III yang berisi 9 mL aquadest steril dan dianggap sebagai

larutan sampel konsentrasi 10-3

, lalu dihomogenkan. Diambil lagi 1 mL

larutan dari tabung reaksi III ke tabung reaksi IV yang berisi 9 ml aquadest


19/46



steril dan dianggap sebagai larutan sampel konsentrasi 10-4, lalu

dihomogenkan.

b. Pengujian

1. Metode ALT Bakteri

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Diambil

larutan Olay pelembab sebanyak 1 mL untuk konsentrasi 10 -4, 10-5

dan 10-6

. Kemudian dimasukkan pada masing-masing cawan petri.

Ditambahkan medium NA sebanyak 9 mL pada tiap-tiap cawan petri

kemudian dihomogenkan lalu dipadatkan. Diinkubasikan dalam

inkubator selama 1 x 24 jam pada suhu 37 C. Dihitung jumlah

koloninya.

2. Metode ALT Kapang

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Diambil

larutan Olay pelembab sebanyak 1 mL untuk konsentrasi 10-3

, 10-4

,

10-5. Kemudian dimasukkan pada masing-masing cawan petri.

Ditambahkan medium PDA sebanyak 10 mL pada tiap-tiap cawan petri

kemudian dihomogenkan lalu dipadatkan. Diinkubasikan dalam

inkubator selama 1 x 24 jam pada suhu 25 C. Dihitung jumlah

koloninya.

3. Metode MPN

Metode MPN ini dibedakan atas 2 seri (A,dan B) diamati tiap-

tiap seri masing-masing terdiri atas 3 tabung reaksi yang berisi 10 mL


20/46



medium LB dengan tabung durham terbalik di dalamnya. Seri A, untuk

konsentrasi 10

-2

dan seri B untuk konsentrasi 10

-3

. Untuk seri A,

diambil 1 mL larutan olay pelembab dengan konsentrasi 10-2

kemudian dimasukkan pada tiap-tiap tabung reaksi yang telah

diberikan medium LB sebelumnya lalu dihomogenkan. Diberikan

perlakuan yang sama pada seri B untuk larutan olay pelembab

konsentrasi 10-3

. Diinkubasi dalam inkubator selama 1 x 24 jam pada

suhu 37 C. Diamati perubahan warna medium yang terjadi (hijau

menjadi kuning) dan timbulnya gas dalam tabung durham.


21/46



BAB IV

KAJIAN HASIL PRAKTIKUM

A. Hasil Praktikum

1. Tabel Hasil Pengamatan

a. Hasil analisis data jumlah Angka Lempeng Total Bakteri

Sampel

Hasil

perhitungan

(koloni/g)

Persyaratan

(koloni/g) /

(koloni/mL)

Keterangan

Olay Pelembab 0,1 x 103 Maks 105Memenuhi

syarat

Selai Buah 0 Maks 5 x 102Memenuhi

syarat

Kiranti 0 maks 2.102

Memenuhi

syarat

Sup cream

royco

0 maks 1.10

5Memenuhi

syarat

Sirup Marjan0

Maks 5.102Memenuhi

syarat


22/46



b. Hasil analisis data jumlah Angka Lempeng Total Kapang

Sampel

Hasil

perhitungan

(koloni/g)

Persyaratan

(koloni/g)/

(koloni/mL)

Keterangan

Kiranti

0 Maks 50Memenuhi

syarat

Sup cream

royco0 maks 1.10

3

Memenuhi

syarat

c. Hasil analisis data jumlah bakteri kolioform (MPN)

Sampel

Nilai MPN

sampel hasil

perhitungan

(APM/g)

Persyaratan

(APM/g)/

(APM/mL)

Keterangan

Selai Buah 0,3 x 102 < 3

Memenuhi

syarat

Kiranti

1,20 x 102 < 3Memenuhi

syarat

Sup cream

royco 0,93 x 102 maks 10

Memenuhi

syarat


23/46



Sirup Marjan

0,03 x 102 < 3Memenuhi

syarat

2. Gambar Hasil Pengamatan

a. Perhitungan ALT bakteri

LABORATORIUM

MIKROBIOLOGI FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

NA (Nutrien Agar) 10-

Jumlah koloni : 1

Keterangan :1. Koloni2. cawan petri

1

2


24/46



Keterangan :1. Koloni2. cawan petri

LABORATORIUM




Jumlah koloni : 0

Keterangan :1. cawan petri

1

LABORATORIUM




Jumlah koloni : 1

2

1


25/46



B. Pembahasan

Perhitungan kuantitas mikroorganisme dapat dilakukan secara

langsung dan tidak langsung. Perhitungan ini dilakukan untuk mengetahui

jumlah sel dalam bakteri, massa sel dan kapang.

Perhitungan mikroorganisme dapat dilakukan dengan dua cara yaiu

metode MPN dan metode SPC di mana metode SPC ini meliputi ALT bakteri.

ALT bakteri adalah bilangan yang menunjukan jumlah koloni bakteri yang

mencemari tiap gram/ml sample produksi yang diuji. Satuan dalam pengujian

ALT bakteri adalah CFU. ALT kapang adalah bilangan yang menunjukan

jumlah koloni kapang tiap gram ml sample yang diperikasa. Satuan dalam

pengujian ALT kapang adalah CFU. MPN (Most Probable Number) adalah uji

kualitas mikrobiologi air yang mana digunakan kelompok kolioform sebagai

indicator. Satuan dalam pengujian MPN adalah APM / mL.

Metode MPN merupakan metode untuk menguji apakah di dalam

sampel terdapat bakteri koliform maka akan terjadi perubahan warna dari

hijau menjadi kuning. Bakteri bersifat merombak karbohidrat melalui proses

fermentasi yang menghasilkan karbondioksida dan senyawa akohol yang

bersifat asam sehingga warna medium berubah menjadi kuning.

Syarat untuk menghitung koloni pada cawan adalah ;

1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni

antara 30-300 untuk bakteri dan 10-150 untuk kapang.


26/46



2. Beberapa koloni yang brgabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan

koloni yang besar di mana jumlah koloninya diragukan sebagai suatu

koloni.

Pada percobaan ini dilakukan pengujian terhadap bahan baku,

dalam hal ini sampel yang digunakan yaitu Olay pelembab. Percobaan ini

bertujuan untuk mengetahui bagaimana tingkat pertumbuhan jumlah koloni

bakteri dan jamur yang ada dalam suatu medium yang telah diinkubasi 1 x 24

jam untuk bakteri dan 3 x 24 jam untuk jamur.

Dalam percobaan ini juga dilakukan pengenceran untuk memudahkan

dalam perhitungan mikroorganisme yang terdapat dalam suatu sample

sehingga pertumbuhan koloni tidak terlalu rapat satu sama lain. Dimana

pengenceran juga dapat berfungsi untuk mengnonaktikan zat pengawet.

Untuk menentukan tingkat kontaminasi mikroba, digunakan metode

SPC (Standard Plate Count), dimana dengan metode ini dapat diketahui

jumlah koloni bakteri patogen yang terdapat pada medium yang telah

diinkubasikan. Angka Lempeng Total yang diperoleh menunjukkan jumlah

koloni dimana dari angka ini dapat diketahui apakah sampel tersebut

memenuhi syarat kontaminasi atau tidak.

Pada uji Angka Lempeng Total bakteri, medium yang digunakan

adalah medium NA (Nutrient Agar), sebab medium ini mengandung karbon

dan nitrogen yang dapat digunakan oleh bakteri. Selain itu, medium NA juga

mengandung protein yang merupakan nutrisi bagi bakteri, dan juga


27/46



merupakan campuran agar yang mana dapat memadatkan medium sehingga

apabila medium telah memadat maka akan memudahkan kita untuk

menghitung jumlah bakteri yang tumbuh pada medum ini.

Pada pengujian ALT kapang medium yang digunakan adalah medium

PDA (Potato Dextrose Agar), yang mengandung karbohidrat yang dapat

digunakan oleh kapang. Sama halnya pada uji ALT bakteri sampel dibuat

dalam 4 tingkat pengenceran.

Pada pengujian ALT bakteri sample diinkubasi selama 1 x 24 jam

waktu yang optimum pertumbuhan bakteri biasanya 1 hari. Sedangkan ALT

kapang diinkubasi selama 3 x 24 jam karena waktu optimum

pertumbuhannya biasanya 2 3 hari.

Pada praktikum ini dilakukan perhitungan kuantitas mikroba terhadap

suatu sample, yang mana sample ini banyak beredar dimasyarakat luas.

Jumlah mikroba yang ada didalam bahan / sample sangat bervariasi,

tergantung dari jenis bahan itu sendiri dan kondisi lingkungannya. Jumlah

mikroba dapat dihitung dengan beberapa cara, misalnya perhitungan ALT

kapang, perhitungan ALT bakteri dan uji MPN.

Dari hasil percobaan diperoleh jumlah bakteri, yaitu ALT bakteri dari

olay pelembab adalah 1 koloni pada pengenceran 10-4 dan 0 koloni pada 10-

5 dan 1 koloni pada pengenceran 10-6.

ALT kapang tidak didapatkan karena cawan petri yang digunakan

dicuci sehingga pertumbuhan koloni pada cawan petri tidak dihitung.


28/46



Dari hasil percobaan terdapat beberapa kesalahan yang dapat

mempengaruhi hasil dari praktikum antara lain :

1. Pengerjaan yang kurang aseptis

2. Pengenceran yang kurang teliti

3. Kesalahan dalam pengamatan.


29/46



BAB V

KESIMPULAN DAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Dari hasil pengamatan yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan

bahwa:

1. JumLah koloni bakteri pada uji ALT bakteri pada sampel Olay

Pelembab yaitu hanya 1 koloni bakteri yang mana didapat nilai hasil

SPC 0,1 x 10-3

koloni/mL.

2. JumLah koloni bakteri pada uji ALT bakteri pada sampel Selai Buah

yaitu 0 koloni bakteri yang mana didapat nilai hasil SPC 0 koloni/mL.

3. JumLah koloni bakteri pada uji ALT bakteri pada sampel Kiranti yaitu

0 koloni bakteri yang mana didapat nilai hasil SPC 0 koloni/mL.

4. JumLah koloni bakteri pada uji ALT bakteri pada sampel Sup cream

royco yaitu 0 koloni bakteri yang mana didapat nilai hasil SPC 0

koloni/mL.

5. JumLah koloni bakteri pada uji ALT bakteri pada sampel Sirup Marjan

yaitu 0 koloni bakteri yang mana didapat nilai hasil SPC 0 koloni/mL.

6. JumLah koloni kapang pada uji ALT kapang pada sampel Kiranti yaitu

0 koloni kapang yang mana didapat nilai hasil SPC 0 koloni/mL.


30/46



7. JumLah koloni kapang pada uji ALT kapang pada sampel Sup cream

royco

yaitu 0 koloni kapang yang mana didapat nilai hasil SPC 0

koloni/mL.

8. Nilai MPN pada sampel Selai Buah adalah 0,3 x 102 APM diamana

nilai tersebut memenuhi syarat.

9. Nilai MPN pada sampel Kiranti

adalah 1,20 x 102

APM diamana

nilai tersebut memenuhi syarat.

10. Nilai MPN pada sampel Sup cream royco

adalah 0,93 x 102

APM

diamana nilai tersebut memenuhi syarat.

11. Nilai MPN pada sampel Sirup Marjan adalah 0,03 x 102 APM

diamana nilai tersebut memenuhi syarat.

B. Saran

Saran saya untuk praktikkm kali ini, sebaiknya cara perhitungan

mikroorganismenya lebih diperjelas lagi.


31/46



DAFTAR PUSTAKA

Ditjen POM, 1979, Famakope Indonesia Edisi III, Depkes RI, Jakarta.

Ditjen POM, 1995, Famakope Indonesia Edisi IV, Depkes RI, Jakarta.

Anonim. 2013, Penuntun Mikrobiologi Farmasi Dasar, LaboratoriumMikrobiologi Farmasi, Fak. Farmasi UMI, Makassar.

Irianto, 2006. Mikrobiologi : Menguak Dunia Mikroorganisme. YramaWidya : Bandung.

Ludfi Santoso, dkk. 2012. JURNAL KESEHATAN MASYARAKAT, Volume 1,Nomor 2, Tahun 2012, Halaman 402 412. JUMLAH TOTALBAKTERI DAN COLIFORMDALAM AIR SUSU SASEGAR PADAPEDAGANG PENGECER DI KOTA SEMARANG

Benito A.K, dkk. 2012. Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Peternakan Februari, 2010,Vol. XIII, No. 5. Deteksi Jumlah Bakteri Total dan Coliform padaSludge dari Proses Pembentukan Biogas Campuran Feses SapiPotong dan Feses Kuda

Waluyo, Lud. 2008. Teknik dan Metode Dasar Dalam Mikrobiologi.Universitas Muhammadiyah Malang Press, Malang.

Natsir, M dan Sartini. (2008), Analisis Mikrobiologi Farmasi, UNHAS :Makassar.


32/46



SKEMA KERJA

MPN

ALT Kapang

ALT Bakteri

LB

NA

PDA

9999

1 g/ml

Sampel

1

1 ml1ml

10-

4

10-

3

10-

2


33/46



LAMPIRAN

A. Komposisi medium

1. Medium PDA (Potato Dekstrosa Agar)

a. Komposisi untuk 1000 ml

Potato 200 gram

Dekstrosa 10 gram

Agar 15 gram

Aquades ad 1000 ml

b. Komposisi untuk 250 ml

Potato 200 / 1000 x 250 gr = 50 gram

Dekstrosa 10 / 1000 x 250 gr = 2,5 gram

Agar 15 / 1000 x 250 gr = 3,75 gram

Aquades Ad 250 ml

2. NA (Natrium Agar)

a. Komposisi untuk 1000 ml

Agar 15 gram

Pepton 5 gram

Ekstrak beef 3 gram

Aquades ad 1000 ml

b. Komposisi untuk 250 ml

Agar 15 / 1000 x 250 gr = 3,75 gram

Pepton 5 / 1000 x 250 gr = 1,25 gram


34/46



Ekstrak beef 3 / 1000 x 250 gr = 0,75 gram

Aquades Ad 250 ml

3. Lactosa Broth (LB)

Komposisi untuk 1000 ml :

Ekstrak Beef 3 g

Pepton 5 g

Laktosa 5 g

Brom Thymol Blue 1 ml

Aquades ad.1000 ml

B. Cara Pembuatan

1. Nutrien Agar (NA)

Disiapkan semua alat dan bahan, kemudian ditimbang ekstrak

beef sebanyak 3 gram, pepton 5 gram, dan agar 1,5 gram. Ekstrak

beef, pepton, dan agar dilarutkan dalam sedikit air, kemudian

dipanaskan hingga semua zat tersebut larut sempurna. Dimasukkan

dalam erlenmeyer dan dicukupkan volumenya dengan aquades

sampai 250 ml kemudian erlenmeyer ditutup dengan kapas. Kemudan,

disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121o

C selama 15 menit. Untuk

medium agar tegak diisikan 10 ml medium dalam tabung reaksi dan

untuk medium agar miring diisikan 5 ml medium dalam tabung reaksi.


35/46



Tabung reaksi ditutup dengan kapas kemudian disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121

o

C selama 15 menit.

2. Potato Dekstrosa Agar (PDA)

Disiapkan semua alat dan bahan. Kentang dikupas dan dipotong

kecil-kecil, dicuci sampai bersih. Ditimbang kentang sebanyak 50 g,

dextrosa 15 g, dan agar 5 g. Kentang dimasak sampai mendidih,

selama 15 menit. Kemudian disaring, dan ekstraknya dicampur

dengan dextrosa dan agar, lalu dipanaskan kembali sampai zat

tersebut larut sempurna. Dimasukkan dalam erlenmeyer dan

dicukupkan volumenya dengan aquades sampai 250 ml kemudian

erlenmeyer disumbat dengan kapas. Disterilkan dalam autoklaf pada

suhu 121o C selama 15 menit.

3. Laktosa Broth (LB)

Pembuatan media cair ini dilakukan dengan cara : memasukan

reagen ke dalam gelas ukur dan ditambah aquades sebanyak 100 cc

dan dipanaskan dengan api diatas lampu spiritus, setelah itu

mengukur dengan pH, kemudian menambahkan BTB dan juga KOH,

setelah itu mengisi tabung reaksi dengan larutan diatas sebanyak 5 cc,

demikian pula dengan tabung durham diisi 3 cc, dan tabung durham

tersebut dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan terakhir ditutup

tabung reaksi dengan kapas dan sterilkan. Jika hasil positif maka akan


36/46



menjadi asam dan berwarna kuning serta tabung durham akan

membentuk gas/naik ke atas.

C. Perhitungan

a. ALT bakteri (NA)

Jumlah koloni bakteri 30 300

Rumus ALT bakteri

1

SPC = V x Jumlah koloni xFaktor pengenceran

1. Olay Pelembab

10-4 10-5 10-6

1 0 1

Jika dalam pengenceran tidak ada yang memenuhi syarat, dan semua

dibawah range, maka pengenceran terendah yang dilaporkan.

1SPC = 1 x 1 x

10-1

= 0,1 x 103

koloni/mL

2. Selai Buah

10-1 10-2 10-3

0 0 0


37/46





1SPC = 1 x 0 x

10-1

= 0 koloni/mL

3. Kiranti

10-1 10-2 10-3

0 0 0



1

SPC = 1 x 0 x 10-1

= 0 koloni/mL

4. Sup cream royco

10-3 10-4 10-5

0 0 0




38/46



1SPC = 1 x 0 x

10

-1

= 0 koloni/mL

5. Sirup Marjan

10-1 10-2 10-3

0 0 0



1SPC = 1 x 0 x

10-1

= 0 koloni/mL

b. ALT kapang (PDA)

Jumlah koloni kapang 10-150 koloni/ml

Rumus ALT kapang

1SPC = V x Jumlah koloni x

Faktor pengenceran

1. Kiranti

10-0 10-1 10-2

1 0 2


39/46





1SPC = 1 x 1 x

10-0

= 1 koloni/mL

2. Sup cream royco

10

-2

10

-3

10

-4

19 1 2

Jika dalam pengenceran hanya satu yang memenuhi syarat, maka

pengenceran tersebut yang dilaporkan.

1SPC = 1 x 19 x

10-2

= 19 x 102

koloni/ml

= 1,9 x 103 koloni /ml


40/46



c. Uji APM

Rumus 1MPN = Nilai MPN x

Faktor pengenceran tabung tengah

1. Selai Buah

10-2 10-3 10-4

0 0 0

1MPN = Nilai MPN x

Faktor pengenceran tabung tengah

1

= 0,03 x10

-3

= 0,03 x 103

= 0,3 x 102 APM

2. Kiranti

10-1 10-2 10-3

3 1 2

1

MPN = Nilai MPN xFaktor pengenceran tabung tengah

1= 1,20 x

10-2


41/46



= 1,20 x 102APM

3. Sup cream royco

10-1 10-2 10-3

3 2 0

1

MPN = Nilai MPN x Faktor pengenceran tabung tengah

1

= 0,93 x10-2

= 0,93 x 102 APM

4. Sirup Marjan

10-1 10-2 10-3

0 1 0

1

MPN = Nilai MPN xFaktor pengenceran tabung tengah

1= 0,03 x

10-2

= 0,03 x 102APM


42/46



D. Gambar Pengamatan

- Kelompok IV (Sirup Marjan

)

- Pengenceran

LABORATORIUM



Sirup Marjan

LABORATORIUM



ALT kapang (10-

)


43/46



ALT Kapang (10-1)

LABORATORIUM



ALT Kapang (10-1)

LABORATORIUM



ALT Kapang (10- )


44/46



LABORATORIUM



ALT K ALT Bakteri (10-2)

LABORATORIUM



ALT Bakteri (10-3

)


45/46



- Kelompok I (Selai Buah)

1. Metode ALT bakteri

Keterangan :

1. Pengenceran 10-2

2. Pengenceran 10-3

3. Cawan Petri

4. Pertumbuhan koloni

5. Medium NA

2. Metode ALT kapang

Keterangan :

1. Pengenceran 10-2

2. Pengenceran 10-3

3. Pengenceran 10-4

4. Cawan Petri

5. Pertumbuhan koloni

6. Medium PDA

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASIFAKULTAS FARMASI


Sampel : Selai buah super sweetNama medium : Medium PDA

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASIFAKULTAS FARMASI


Sampel : Selai buah super sweetNama medium : Medium NA


46/46


3. Uji MPN

Keterangan :1. Pengenceran 10-2

2. Pengenceran 10-3

3. Tabung reaksi

4. Tabung durham

5. Kapas

6. Medium LB

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASIFAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

Sampel : Selai buah super sweetNama medium : Medium LB

Kuantitas Ika Baru

Documents

Transcript of Kuantitas Ika Baru