LAPORAN AKHIR MIKROBIOLOGI FARMASI

8/16/2019 LAPORAN AKHIR MIKROBIOLOGI FARMASI

1/48

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI & VIROLOGI

DISUSUN OLEH :

NAMA : INARNINGTYAS ISMI KIRANA

NIM : 1408010057

GOLONGAN : II

KELOMPOK : V

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2015


2/48

BAB I

I I TU!UAN

1. STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIUMSetelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat a. Men!etahui tu"uan dan #ara $#ara sterilisasi.

%. Melakukan sterilisasi den!an men!!unakan aut&kla'.#. Men!etahui pen!!unaan dan ma#am medium.d. Mem%uat medium.

(. PENANAMAN) IS*LASI dan PEN+AMATAN PERTUMBU,AN MI-R*BASetelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat melakukan penanamandan is&lasi mikr&%a serta men!amati pertum%uhan %akteri.

. PER,ITUN+AN /UMLA, MI-R*BASetelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat a. Men!etahui #ara $ #ara perhitun!an "umlah mikr&%a) %aik se#ara lan!sun!

maupun tidak lan!sun!. %. Melakukan perhitun!an "umlah mikr&%a 0an! ada pada suatu %ahan.

. PEN+E2ATAN DAN M*R3*L*+I MI-R*BASetelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat a. Men!etahui tu"uan dari pen!e#atan.

%. Melakukan pen!e#atan terhadap mikr&%a.

4. M*R3*L*+I 3UN+ISetelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat men!enali %er%a!ai

"enis "amur %erdasarkan m&r'&l&!in0a.

5. S-RININ+ PRIMER UNTU- MENDAPAT-AN MI-R*BA RESISTENANTIBI*TI- Setelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat a. Melakukan %er%a!ai teknik mikr&%i&l&!i dalam skrinin! 6menanam) men!is&lasi

dan memurnikan %iakan) melakukan tes terhadap kemampuan %iakan terhadapanti%i&tik7.

%. Mendapatkan mikr&&r!anisme 0an! resisten terhadap anti%i&tik.

8. U/I SENSITI3ITAS MI-R*BA TER,ADAP ANTIBI*TI- 6MET*DE -IRB9BAUER7Setelah melakukan praktikum ini diharapkan mahasiswa dapat a. Melakukan u"i senditi'itas terhadap anti%i&tik den!an met&de -ir%0 Bauer.

%. Menentukan mir&%a u"i termasuk sensiti'itas atau resisten terhadap anti%i&tik 0an!diu"ikan


3/48

I II TIN!AUAN PUSTAKA

1. STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIUM

Sterilisasi 0aitu suatu pr&ses untuk mematikan:mem%unuh semua &r!anisme

0an! ada) sehin!!a "ika ditum%uhkan didalam suatu medium tidak ada la!i &r!anisme0an! dapat %erkem%an! %iak di lin!kun!an.Sterilisasi se#ara umum dpat dilakukan den!an %er%a!ai #ara) 0aitu a. Sterilisasi se#ara 'isik 0an! meliputi den!an pemanasan) sinar ;) sinar ultra


4/48

medium w&rtel) medium kentan!) ds%.#. Medium padat 0an! di#airkan 6 semi solid medium 7 medium 0an! dalam

keadaan keadaan panas %er%entuk #air) sedan! dalam keadaan din!in %er%entuk padat karena men!andun! a!ar $ a!ar atau !elatin.

. -lasi'ikasi medium %erdasarkan atas 'un!sin0a.

a. Medium diperka0a 6 enriched medium 7 medium 0an! ditam%ah @at $ @attertentu 6misaln0a serum) darah7 sehin!!a dapat di!unakan untuk menum%uhkan mikr&%a heter&tr&' tertentu.

%. Medium selekti' medium 0an! han0a dapat ditum%uhi &leh satu atau le%ih "enis mikr&%a) tapi akan men!ham%at atau mematikan "enis $ "enis 0an! lain)misaln0a medium SS 6Salm&nella Shi!ella7 a!ar untuk mikr&%a Salm&nelladan Shi!ella.

#. Medium di'erensial medium 0an! di!unakan untuk pertum%uhan mikr&%atertentu) den!an tu"uan untuk mem%edakan mikr&%a %erdasarkan si'at $si'atn0a.Misaln0a) medium a!ar darah 0an! di!unakan untuk menum%uhkan mikr&%ahem&litik) dimana mikr&%a n&n hem&litik diham%at pertum%uhann0a.

d. Medium pen!u"i medium 0an! di!unakan untuk pen!u"ian sen0awa atau %enda tertentu den!an %antuan mikr&%a.

e. Medium perhitun!an medium 0an! di!unakan untuk men!hitun! "umlahmikr&%a dalam suatu %ahan. Medium ini %isa %erupa medium umum) selekti')di'erensial atau pen!u"i.

'. Medium khusus medium untuk menentukan tipe pertum%uhan mikr&%a dankemampuann0a untuk men!adakan peru%ahan $ peru%ahan kimia tertentu.

(. PENANAMAN) IS*LASI dan PEN+AMATAN PERTUMBU,AN MI-R*BA

Is&lasi mikr&%a adalah pemisahan mikr&%a 0an! dikehendaki darilin!kun!ann0a di alam dan menum%uhkann0a se%a!ai %iakan murni dalam medium

%uatan.Tu"uan pemisahan ini adalah untuk mempela"ari si'at si'at) pertum%uhan dan akti


5/48

Ada %erma#am ma#am #ara untuk men!is&lasi mikr&%a. Ada %e%erapa hal pentin! 0an! harus diperhatikan dalam is&lasi 0aitu a. Si'at $ si'at spesies mikr&%a 0an! akan ditanam.

%. Tempat hidup atau asal mikr&%a terse%ut.#. 2ara menanam dan #ara men!is&lasikannn0a.

d. 2ara men!u"i %ahwa mikr&%a 0an! diis&lasi telah %erupa %iakan murni dan sesuaiden!an 0an! dimaksud.

e. 2ara memelihara %iakan murni.

Bakteri menun"ukkan karakteristik p&la empat 'ase pertum%uhan pada kultur #air. 3ase awal) Lag adalah peri&de pertum%uhan lam%atdimana %akteri %eradaptasi

pada k&ndisi medium. 3ase ini diikuti &leh 'ase Logaritmik atau 'ase Log ) dimana pertum%uhan %ersi'at eksp&nensial den!an sel mem%elah men"adi dua pada setiapsiklus replikasi. 3ase stasioner ter"adi ketika nutrient men"adi sedikit atau k&nsentrasisampah meta%&lit men"adi tin!!i di dalam medium) dan la"u replikasi sama den!anla"u kematian sel. 3ase Kematian ter"adi ketika sel mati le%ih #epat di%andin!kanden!an sel %aru.

. PER,ITUN+AN /UMLA, MI-R*BA

Bakteri dapat ditemukan dimana mana) seperti di r&n!!a mulut) sela $ sela!i!i) tanah) sisa $ sisa makanan 0an! sudah %asi dan untuk memper&lehn0a) %iasan0adi%iakan dalam #awan petri 0an! %erisi nutrisi atau medium. -&l&ni 0an! tum%uh

pada media a!ar dapat dilihat se#ara


6/48


7/48

%ahan men!andun! 4?.??? mikr&%a. Untuk mem%antu men!hitun! "umlahk&l&ni dalam #awan petri %isa di!unakan colony counter 0an! dilen!kapiden!an electronic register . Pada perhitun!an den!an #ara ini diperlukan

%e%erapa s0arat 0an! harus dipenuhi) antara lain 1. /umlah k&l&ni dalam tiap #awan petri antara ? ?? k&l&ni) "ika meman!

tidak ada 0an! memenuhi s0arat dipilih 0an! "umlahn0a mendekati ??.(. Tidak ada spreader 6k&l&ni 0an! menutup le%ih %esar dari seten!ah luas

#awan petri7.. Per%andin!an "umlah %akteri dari hasil pen!en#eran se%elumn0a) "ika

sama atau le%ih ke#il dari ( hasiln0a di rata $ rata) tetapi %ila le%ih %esardari ( 0an! dipakai adalah "umlah mikr&%a dari hasil pen!en#eranse%elumn0a.

. /ika den!an ulan!an 6misal di 1? direplikasi7) setelah memenuhi s0arathasiln0a dirata rata.

. PEN+E2ETAN DAN M*R3*L*+I MI-R*BA

Bakteri atau mikr&%a 0an! hidup hampir tidak %erwarna dan k&ntras den!anair) dimana sel $sel %akteri terse%ut disuspensikan. Salah satu #ara untuk men!amati

%entuk sel %akteri sehin!!a mudah untuk diidenti'ikasi ialah den!an met&de pen!e#atan atau pewarnaan. ,al terse%ut "u!a %er'un!si untuk men!etahui si'at'isi&l&!isn0a 0aitu men!etahui reaksi dindin! sel %akteri melalui seran!kaian

pen!e#atan.Tu"uan dari pen!e#atan 0aitu

a. Mempermudah melihat mikr&%a) %aik %akteri) 0east ataupun kapan!. %. Memper"elas ukuran dan %entuk mikr&%a.#. Melihat struktur luar) apa%ila memun!kinkan struktur dalam) dari mikr&%a.d. Melihat reaksi mikr&%a terhadap #at 0an! di%erikan) sehin!!a si'at $ si'at 'isik

dan kimia 0an! ada %isa di deteksi.

Pewarnaan merupakan !ram !ram 0an! tersusun atas i&n p&siti' dan ne!ati' 0an! salah satun0a %erwarna dan dise%ut kr&m&'&r. Bila kr&m&'&r %erada padai&n p&siti' 6pewarna %asa7 dan i&n ne!ati' 6pewarna asam7.Pr&sedur pewarnaan di%a!i men"adi 0aitu a. Pewarnaan sederhana 6simple stainin!7

Pewarnaan ini di!unakan satu ma#am pewarna untuk mewarnai seluruh

mikr&&r!anisme sehin!!a %entuk seluler dan struktur dasarn0a dapat dilihat.2&nt&h pewarnaan ini adalah larutan #at sa'ranin atau crystal #iolet dan #ar%&l'u#shin.

%. Pewarnaan di'erensial 6di''erential stainin!7Dalam pewarnaan ini men!!unakan le%ih dari satu pewarna dan memiliki

reaksi 0an! %er%eda untuk setiap %akteri untuk mem%edakan %akteri. 2&nt&h pewarnaan !ram 0an! mem%edakan !ram p&siti' dan !ram ne!ati'.Per%edaan struktur pada dindin! seln0a) !ram p&siti' le%ih %an0ak men!andun!

peptid&!likan sedan!kan !ram ne!ati' le%ih %an0ak men!andun! lip&p&lisakarida.#. Pewarna khusus 6dpe#ial stainin!7

Mewarnai den!an men!is&lasi %a!ian spesi'ik dari mikr&&r!anisme misaln0a

end&sp&ra) kapsul dan 'la!ella.


8/48

4. M*R3*L*+I 3UN+I

3un!i merupakan &r!anisme kem&heter&tr&' 0an! memerlukan sen0awa&r!anik untuk nutrisin0a 6sum%er kar%&n dan ener!i7. /amur merupakan kel&mp&kmikr&&r!anisme 0an! memiliki inti) tidak %erkl&r&'il) memiliki sp&ra) umumn0a

%erkem%an! %iak se#ara seksual dan aseksual) %er%entuk 'ilamen) struktur s&matikn0a %er#a%an! $ #a%an!) dindin! seln0a terdiri dari selul&sa) kitin atau k&m%inasi darikeduan0a.

Berdasarkan #ara memper&leh makanan) "amur di%a!i men"adi ti!a) 0aitu "amur %ersi'at parasit artin0a memper&leh makanan dari &r!anisme hidup lain. /amur %ersi'at sapr&'it) 0aitu memper&leh makanan dari sisa $ sisa &r!anisme 0an! telahmati. Dan "amur 0an! %ersi'at mutual 0aitu hidup salin! men!untun!kan 6sim%i&sismutualisme7 den!an &r!anisme inan!n0a.

Ada ti!a !&l&n!an "amur 0aitu kapan! 6"amur %enan!7) khamir 6 yeast 7) dan#endawan 6 mushroom 7.1. -apan! 6m&ld7 0aitu 'un!i 0an! %er'ilamen dan multiseluler.

M&'&l&!i kapan! se%a!ai %erikut a. Tu%uh kapan! ter%a!i men"adi dua 0aitu miselium merupakan kumpulan

%e%erapa 'ilamen 6hi'a7. Ada hi'a


9/48

Seirin! den!an penemuan dan perkem%an!an anti%i&tik dan a!en antimikr&%alainn0a) resisten adalah k&nsekuensi alami dari pen!!unaan antimikr&%a itu sendiri.Ale ander 3lemin! 61 1 $ 1>447 pada tahun 1>( ) dia adalah se&ran! mahasiswa0an! tidak sen!a"a menemukan anti%i&tik dari staph0l#us. /adi) pada saat diamelakukan penelitian di la% den!an %e%erapa kultur staph0l#us ter"adi adan0a

k&ntaminasi "amur dan menim%ulkan seperti tetesan em%un disekitar "amur.Ditemukan suatu %akteri sidial atau %akteri&statik 0an! kemudian dinamakan

peni#ilin.

Anti%i&tik sendiri dide'inisikan se%a!ai sen0awa 0an! dipr&duksi &leh mikr&&r!anisme 0an! dalam "umlah ke#il mampu men!ham%at &r!anisme lain 6T&rt&radkk)(?1?7. A!en antimikr&%a 0an! ideal memiliki t&ksisitas selekti') 0aitu &%at

%ersi'at mem%aha0akan hidup pat&!en tanpa mem%aha0akan inan!.Berdasarkan spektrum akti


10/48


11/48

BAB II

II I ALAT DAN BAHAN

1. STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIUMa. Sterilisasi den!an Aut&kla'

Air sulin!Sterilisat&r

adah Aluminium

%. Pem%uatan Medium Nutrien 2air Ekstrak Da!in!Pept&nPemanasPen0arin!

#. Pem%uatan Medium Nutrien A!ar Ekstrak da!in!Pept&nA!ar $ a!ar Ta%un! reaksi

d. Pem%uatan Medium Nutrien Ta&!e 2air Ta&!eSukr&saAGuades

e. Pem%uatan Medium Ta&!e A!ar Ta&!eSukr&saAGuadesA!ar $a!ar

(. PENANAMAN) IS*LASI DAN PEN+AMATAN PERTUMBU,AN MI-R*BAAlat *se run#in!

*se tumpulLampu spirtus2awan petriPipet sterilSpektr&'&t&meter -u


12/48

Medium nutrien a!ar te!ak) medium a!ar mirin! dan medium nutrien #air

%. Is&lasi Mikr&%aSuspensi mikr&%a : #ampuran mikr&%a

Nutrien a!ar te!ak

#. Pen!amatan Pertum%uhan Mikr&%a-ultur %akteri %&colidalam medium nutrien a!ar 1??ml medium pertum%uhan nutrien %ee' dalam (4?ml erlenme0er Media tanpa %akteri se%a!ai %lank&

. PER,ITUN+AN /UMLA, MI-R*BAa. Plate 2&unt

2awan petri+elas ukur Ta%un! reaksiPipet tetesSampel %ahanAGuadesMedium a!ar

%. *pti#al Densit0 5?? 6*D 5??7 Ta%un! reaksiSpektr&'&t&meter U=AGuadesSuspensi %akteri

. PEN+E2ATAN DAN IDENTI3I-ASI MI-R*BAa. Pen!e#atan Sederhana

*%"ek !lassLampu spirtus*seBiakan murni B&subtilisLarutan #at kristal


13/48


14/48


15/48

Saat men#u#i tutupn0a "a!a a!ar alat pen!ukur tidak terkena air

%. Pem%uatan Medium Nutrien 2air

Larutkan !r ekstrak da!in! 4!r pept&n d! 1 L aGuadest

Panaskan selama 4 menit

Din!inkan

Netralkan d! Na*, 1N ad Ph 8)() #ek d! p, meter

Tam%ahkan aGuadest ad 1 liter la!i

Sarin! larutan medium den!an kain pen0arin! 0! %ersih

Sterilkan den!an aut&kla') PC( atm) TC1(1J2) tC(? menit

#. Pem%uatan Medium Nutrien A!ar

Medium nutrien #air 14 (? !r a!ar untuk 1 liter aGuadest

Masukkan a!ar a!ar ke dlm medium 0an! dipanaskan selama (? ? menit

-em%alikan


16/48

Sterilkan den!an aut&kla') PC( atm) TC1(1J2) tC14 menit

e. Pem%uatan Medium Ta&!e A!ar

Medium nutrien #air 14 (? !r a!ar untuk 1 liter aGuadest

Masukkan a!ar a!ar ke dalam medium 0an! dipanaskan selama (? ? menit

-em%alikan


17/48

Biakan A!ar Mirin!

Mensterilkan "arum &se tumpul diatas n0ala api spirtus

Men!am%il %iakan murni den!an #ara mem%uka kapas penutup ta%un! den!an

kelin!kin! tan!an kanan) p&sisi ta%un! a!ak di mirin!kan

Men!am%il in&kulum den!an men!!unakan "arum &se tumpul. Panaskan %i%ir ta%un! den!an n0ala api spirtus) lalu tutup kem%ali

Men!am%il media a!ar mirin! 0an! akan di in&kulasi

Melepas tutup kapasn0a dan men!!&reskan a!ar mirin! den!an "arum &se)in&kulasi sampai ke permukaan ta%un!

-emudian menarik "arum &se hati hati

Memanaskan %i%ir ta%un!) lalu tutup kem%ali

Mem%eri etiket ta%un! %iakan %ertuliskan nama mikr&%a dan tan!!al in&kulasi

Men!inku%asi pada suhu 8J2

Biakan 2air

Mensterilkan "arum &se tumpul diatas n0ala api spirtus

Men!am%il %iakan murni den!an #ara mem%uka kapas penutup ta%un! den!ankelin!kin! tan!an kanan) p&sisi ta%un! a!ak di mirin!kan

Men!am%il in&kulum den!an men!!unakan "arum &se tumpul. Panaskan %i%ir ta%un! den!an n0ala api spirtus) lalu tutup kem%ali

Men!am%il media a!ar #air 0an! akan di in&kulasi

Melepas tutup kapasn0a dan men!!&reskan a!ar #air den!an "arum &se)in&kulasi sampai ke permukaan ta%un!

-emudian menarik "arum &se hati hati

Memanaskan %i%ir ta%un!) lalu tutup kem%ali

Mem%eri etiket ta%un! %iakan %ertuliskan nama mikr&%a dan tan!!al in&kulasi



18/48

%. Is&lasi Mikr&%a

Men#airkan nutrien a!ar te!ak dalam penan!as air

Mendin!inkan sampai suhu K 4?J2

Menuan!kan medium a!ar kedalam #awan petri steril se#ara aseptik. Biarkansampai din!in dan padat

Men!am%il satu &se suspensi %ahan 0an! men!andun! mikr&%a terse%ut se#araaseptik dan %uatlah !&resan pada permukaan a!ar

Mem%alik #awan petri 0an! telah di%eri etiket dan mem%un!kus kem%ali den!ankertas


#. Pen!amatan Pertum%uhan Mikr&%a

Men!am%il satu &se k&l&ni %akteri dari media NA

Men!in&kulasikan kedalam media pertum%uhan NB pada Erlenme0er

Men!am%il 1 mL suspensi %akteri dan memindahkan dalam kuml aGuades à ta% ( 6pen!en#eran 1? (7

1ml susp. ta% ( >ml aGuades à ta% 6pen!en#eran 1? 7

Ad p!nen#eran 1? 5 1? 8

Panaskan medium a!ar 6am%il 1? ml7

2ampur medium suspensi pen!en#eran dalam #awan petri


19/48

+&0an!kan de!an arah an!ka se#ara hati hati

Bun!kus de!an kertas lalu inku%asi selama ( "am

Din!inkan hitun! k&l&ni 0an! tum%uh pada masin! masin! #awan petri

%. *pti#al Densit0 5?? 6*D 5??7

Am%il 1 ml suspensi %akteri dari medium #air dan tempatkan pada ta%un!

En#erkan %ila perlu untuk mendapatkan *D 5?? kuran! dari 1

Masukkan sampel ke ku


20/48

Am%il se#ara aseptik 1 &se suspensi %iakan B& subtilisdan % coli ratakan kira kira1#m

-erin! an!inkan preparat terse%ut) kemudian 'iksasi den!an melewatkann0a %e%erapakali di atas n0ala lampu spiritus

Setelah din!in tetesi de!an #at #at !ram A se%an0ak ( tetes dan diamkan selama 1menit

2u#i de!an air men!alir) kemudian kerin!an!inkan

Teteskan #at !ram B)%iarkan selama 1 mnt #u#i de!an air men!alir kemudian kerin!an!inkan

2u#i den!an larutan peluntur 6!ram 27 selama ? detik) kemudian di#u#i den!an air men!alir dan kerin! an!inkan

Beri larutan #at penutup 6!ram D7 selama ( menit #u#i den!an air men!alir dan kerin!an!inkan

Amati den!an mikr&sk&p den!an min0ak emersi) kemudian !am%arkan preparat

4. M*R3*L*+I 3UN+Ia. Pen!amatan M&r'&l&!i -apan!

Bersihkan !elas %enda den!an alk&h&l sampai %e%as lemak dan de%u) kemudianteteskan 1 tetes lakt&'er&l pada %a!ian ten!ah

Am%il %iakan "amur den!an "arum prerarat dan kemudian letakan pada !elas &%"ek 0an! sudah di%eri lakt&'en&l

/ika massa miselium men!umpul) pisahkan den!an men!!unakan ( %uah "arum preparat

Tutup den!an !elas penutup) hindari pem%entukan !el&m%an! udara di dalam preparat

Amati di %awah mikr&sk&p

+am%ar dan %eri keteran!an 0an! len!kap

%. Pen!amatan M&r'&l&!i -hamir

Bersihkan !elas %enda den!an alk&h&l sampai %e%as de%u dan lemak) kemudianteteskan ( tetes methilen %lue pada %a!ian ten!ahn0a

Am%il %iakan "amur den!an "arum preparat dan kemudian letakan pada !elas&%"ek 0an! sudah di%eri methilen %lue


21/48

Tutup den!an !elas penutup) hindari pem%entukan !el&m%an! udara didalam preparat

Amati di %awah mikr&sk&p

+am%ar dan %eri keteran!an 0an! len!kap

5. S-RININ+ PRIMER UNTU- MENDAPAT-AN MI-R*BA RESISTENANTIBI*TI- a. Tahap I

Suspensikan 1! sempel tanah den!an larutan salin dalam ta%un! steril

En#erkan hin!!a k&nsentrasi 1? 4

Tuan! ?)4 ml suspensi terse%ut dalam petri steril 0an! telah dituan!kan media padat den!an anti%i&tik

Ratakan den!an speader!lass

Inku%asi pada suhu 8 & 2 selama ( "am

%. Tahap II

Pilih salah satu k&l&ni 0an! d&minan) am%il den!an men!!unakan &se) tanam pada media pertum%uhan tanpa anti%i&tik


#. Tahap III

Siapkan dan sterilkan 1?ml media dalam erlenme0er) setelah din!in #ampurkanden!an suspensi is&lat %akteri) h&m&!enkan

Tuan! dalam #awan petri) tun!!u hin!!a %eku

Taruh peper disk diatas permukaan media


Tetesi den!an 1? l larutan anti%i&tik

Ukur diameter ham%at untuk masin! masin! anti%i&tik ) interpretasikan hasilden!an anti%i&tik


22/48

8. U/I SENSITI3ITAS MI-R*BA TER,ADAP ANTIBI*TI- 6MET*DE -IRB9BAUER7a. Tahap I

Siapkan dan sterilisasi 1?ml media kaldu:a!ar dalam erlenme0er

Setelah a!ak din!in) #ampur den!an suspensi %akteri u"i tuan!kan dalam #awan petri)h&m&!enkan. Tun!!u sampai mem%eku

Masuk ke LA3

%. Tahap II

Buka #awan) letakkan paper disk di atas medium men!!unakan pinset) masin! masin! #awan ( paper disk

Teteskan anti%i&tik Ampi#illin dan +entamisin

Tutup #awan

#. Tahap III Bun!kus #awan dan inku%asi pada suhu 8 2

Ukur @&na ham%at men!!unakan "an!ka s&r&n!

Intepretasikan hasil den!an anti%i&!ram


23/48

BAB III

III I HASIL


+am%ar Medium Nutrien A!ar Te!ak

+am%ar Medium Nutrien A!ar Te!ak akan disterilkan den!an alat aut&kla'


24/48

(. PENANAMAN) IS*LASI DAN PEN+AMATAN MI-R*BAa. Penanaman

%. Is&lasi

+am%ar Pen!!&resan pada permukaan a!ar 2atatan Salah pem%erian nama etiket) seharusn0a kel&mp&k = 6lima7

#. Pen!amatan pertum%uhan mikr&%a/am ke I 1( ??-el&mp&k %&Coli B&$ubtilis

1 ?)4 ?)514( ?)4 ? ?) ?1

?)4 ? ?)45>?)888 ?)514

4 ?)4 ? ?)8>8

5 ?)4 ?)85>


25/48

/am ke II 14 ??-el&mp&k %&Coli B&$ubtilis

1 ?)45? ?) 54( ?)44( ?)>((

?)45> ?) 15?) 1 1)?5>

4 ?)45 ?) 5>5 ?)48 ?)> 5

/am ke III 1 ??-el&mp&k %&Coli B&$ubtilis

1 ?)5>( 1)4?(( ?)5?4 1)?5

?)88? ?)>4?1)8(5 1) 1?

4 ?)8 ? 1)?1(5 ?)?45 1)(?(

/am ke I= 1 ??-el&mp&k %&Coli B&$ubtilis

1 ()4>1 () 41( ()(>?

() ( () ?1)? 8 1)( >

4 ()(8? () ?5 ()1( ?)4 (

/am ke = 15 (?-el&mp&k %&Coli B&$ubtilis

1 ()414 () (( () 48

() ?( () ??)5 > ?) >

4 ()( ? () 555 ?)588 ?)4 8

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

E.Coli

Column1

+am%ar +ra'ik hu%un!an antara a%s&r%ansi


26/48

. PER,ITUN+AN /UMLA, MI-R*BAa. Plate #&unt

+am%ar Pen!en#eran 1? 1 1?4

Perhitun!an1 1? 5 1 1? 8

Replikasi 1 8 4>Replikasi ( 1(> >

Pen!en#eran 1?5

6A7 C 68 1(> 1 1?5

7 ( C 1?1 1?5

Pen!en#eran 1? 86B7 C 64> > 1 1?57 ( C 4 1?8 C 4 ? 1? 5

/adi) B A C 4 ? 1? 5 1?1 1?5 C 4) 23U:mlB:A O ( 0an! dipakai adalah "umlah mikr&%a dari hasil pen!en#eran se%elumn0a

. PEN+E2ATAN DAN M*R3*L*+I MI-R*BAa. Pen!e#atan Sederhana

+am%ar B&cereus


27/48

%. Pen!e#atan +ram

+am%ar B&Cereus !ram p&siti'

+am%ar %&Coli!ram ne!ati'

4. M*R3*L*+I /AMUR a. Pen!amatan m&r'&l&!i kapan! den!an men!!unakan #at lakt&'en&l

%. Pen!amatan m&r'&l&!i kapan! den!an men!!unakan #at methilen %lue


28/48

5. S-RININ+ PRIMER UNTU- MENDAPAT-AN MI-R*BA RESISTENANTIBI*TI- Tahap 1 Pen!en#eran

Se%elum dituan! ke #awan petri pen!en#eran 1? 1 $1? 4

Tahap (

Tahap Sampel TanahB C ?)81= C 1)(5 1) 5 ( C 1)45


29/48

8. U/I SENSITI3ITAS MI-R*BA TER,ADAP ANTIBI*TI- 6MET*DE -IRB9BAUER7

+am%ar etiket sampel tanah pada tahap ) per#&%aan 5.Etiket %&Colidan B&Cereus per#&%aan 8.

%&Coli B C ?)5>= C 6()1 ()(17 ( C ()144

B&'ureus *B C )5> ) > ( C )(>= C () 1 () ( ( C () 14

III II PEMBAHASAN


Dalam per#&%aan sterilisasi dan pem%uatan medium)mahasiswa diharapkandapat men!etahui tu"uan dan #ara $ #ara sterilisasi) melakukan sterilisasi den!anmen!!unakan aut&kla') men!etahui pen!!unaan dan ma#am medium serta mem%uatmedium.Sterilisasi 0aitu pr&ses pen!hilan!an semua "enis &r!anisme hidup) dalam halini adalah mikr&&r!anisme 6pr&t&@&a) 'un!i) %akteri) m0#&plasma)


30/48

1. Sterilisasi se#ara 'isik a. Pemanasan

Air dan uap adalah media panas 0an! %aik. Dalam waktu relati' sin!kat) alat0an!akan disterilakan akan men#apai suhu 0an! diin!inkan. Udara adalah pen0alur

panas 0an! kuran! %aik. *leh karena itu) untuk men#apai suhu 0an!diin!inkan akan mem%utuhkan waktu 0an! #ukup lama.Pemi"aran 6den!an api lan!sun!7 0aitu mem%akar alat pada api se#aralan!sun!) #&nt&h alat "arum in&kulum) pinset) %atan! L)dll. Panas kerin! 0aitusterilisasi den!an &


31/48

alk&h&l ke seluruh permukaan tan!an ketika hendak mulai %eker"a. Letakkanlampu spirtus dalam keadaan n0ala api lalu %iarkan.

. Sterilisasi se#ara mekanik 3iltrasi atau pen0arin!an di!unakan untuk sterilisasi larutan 0an! term&la%il.

Pen0arin!an ini men!!unakan 'ilter %akteri. Met&de ini tidak dapat mem%unuhmikr&%a ) mikr&%a han0a akan tertahan &leh p&ri $ p&ri 'ilter dan terpisah dari'iltratn0a. Di%utuhkan pen!uasaan teknik aseptik 0an! %aik dalam melakukanmet&de ini. 3ilter %iasan0a ter%uat dari as%es) p&rselen. 3iltrat %e%as dari %akteritetapi tidak %e%as dari


32/48

tempat:wadah nutrien a!ar te!ak dan aGuadest 0an! sudah mendidih. Rak ta%un!untuk meletakkan ta%un! reaksi a!ar p&sisin0a te!ak. Aut&kla' adalah suatu alat

pemanas tertutup 0an! di!unakan untuk mensterilisasi suatu %enda men!!unakan uap %ersuhu dan %ertekanan tin!!i61(1 27 selama kuran! le%ih 14menit. Suhu 0an! tin!!iinilah 0an! akan mem%unuh mikr&&r!anisme.

Tahap $ tahap per#&%aan pem%uatan medium nutrien a!ar) 0aitumen#ampurkan Nutrien a!ar te!ak 1 ?ml ditam%ahkan pelarut %erupa aGuadest1(?ml ke dalam !elas %eker. Lalu) memanaskan #ampuran terse%ut diatas pemanasden!an suhu 1?? 2 sam%il diaduk men!!unakan %atan! pen!aduk sampai mendidih.Tu"uan dari pemanasan dan pen!adukan ini adalah untuk men!h&m&!enkan Nutriena!ar den!an aGuadest) dimana den!an pemanasan dapat memper#epat pelarutan dari

Nutrien a!ar den!an aGuadest. Setelah mendidih) pindahkan #ampuran terse%ut kedalam ta%un! reaksi masin! $ masin! 1?ml) "adi "umlah ta%un! 0an! %erisi #ampuranterse%ut ada 1( ta%un! reaksi. -emudian mulut ta%un! ditutup den!an kapas den!an

p&sisi te!ak dan diletakkan di rak ta%un!. Setelah selesai itu) masukkan 1( ta%un!terse%ut ke dalam plastik) dalam satu plastik terdapat ti!a ta%un! reaksi. Lalu)masukkan ke dalam aut&kla' selama (?menit den!an suhu 1(1 2 untuk disterilkan.Pem%uatan medium nutrien a!ar te!ak ini untuk %ahan tahap per#&%aan selan"utn0a.

3un!si medium 6NA7 %erdasarkan susunan kimian0a merupakan medium n&nsintetik atau semi ilmiah) %erdasarkan k&nsistenn0a merupakan medium padat) untuk menum%uhkan %akteri. Medium 0an! telah disterilkan tidak ditum%uhi &leh mikr&%akarena k&ntaminan telah hilan! setelah sterilisasi. Media te!ak dimaksudkan untuk mrlihat pertum%uhan %akteri dalam meresp&n &ksi!en dari luar dalam arah te!ak.

(. PENANAMAN) IS*LASI DAN PEN+AMATAN PERTUMBU,AN MI-R*BA

Per#&%aan penanaman) is&lasi dan pen!amatan pertum%uhan mikr&%a %ertu"uan a!ar mahasiswa dapat melakukan penanaman dan is&lasi mikr&%a sertamen!amati pertum%uhan %akteri. Teknik penanaman 6in&kulasi7 merupakan suatu

peker"aan memindahkan %akteri dari medium lama ke medium 0an! %aru den!antin!kat ketelitian 0an! san!at tin!!i) den!an demikian akan diper&leh %iakanmikr&&r!anisme 0an! dapat di!unakan untuk pem%ela"aran mikr&%i&l&!i.Teknik is&lasi mikr&%a adalah suatu usaha untuk menum%uhkan mikr&%a diluar darilin!kun!an alamiahn0a. Pemisahan mikr&&r!anisme dari lin!kun!an ini %ertu"uan

untuk memper&leh %iakan %akteri 0an! sudah tidak %er#ampur la!i den!an %akterilainn0a dan dise%ut %iakan murni. Prinsip dari is&lasi mikr&%a adalah memisahkansatu "enis mikr&%a den!an mikr&%alainn0a 0an! %erasal dari #ampuran %erma#am $ma#am mikr&%a. ,al ini dapat dilakukan den!an menum%uhkann0a dalam media

padat) sel $ sel mikr&%a akan mem%entuk k&l&ni sel 0an! tetap pada tempatn0a.Dikenal %e%erapa #ara atau met&de untuk memper&leh %iakan murni dari suatu %iakan#ampuran. Dua diantaran0a 0an! palin! serin! di!unakan 0aitu met&de #awan !&resdan met&de #awan tuan!.Be%erapa 'akt&r 0an! perlu diperhatikan dalam melakukan is&lasi mir&%a 0aitu antaralain se%a!ai %erikut 1. Si'at setiap "enis mikr&%a 0an! akan diis&lasi.

(. Tempat hidup atau asal mikr&%a terse%ut.. Medium pertum%uhan 0an! sesuai.


33/48

. 2ara men!inku%asi mikr&%a.4. 2ara men!in&kulasi mikr&%a5. 2ara men!u"i %ahwa mikr&%a 0an! diis&lasi telah %erupa kultur murni dan sesuai

den!an 0an! dimaksud.8. 2ara memelihara a!ar mikr&%a 0an! telah diis&lasi tetap merupakan kultur murni.

Alat $ alat 0an! perlu dipersiapkan) 0aitu &se rantin!) &se tumpul) lampuspirtus) #awan petri steril) pipet steril) spektr&'&t&meter) ku


34/48

permukaan media #air) meskipun media ini %er%entuk #air dan %er%usa) tapi %akteriini %er!erak keatas untuk mendapatkan &ksi!en le%ih %an0ak. Medium nutrien a!arte!ak) medium a!ar mirin! dan medium nutrien #air se%a!ai media penanaman

%akterin0a.

Melakukan is&lasi mikr&%a %ahan $ %ahan 0an! di!unakan) 0aitu suspensimikr&%a:#ampuran mikr&%a dan nutrien a!ar te!ak. Suspensi mikr&%a:#ampuranmikr&%a 0aitu %akteri 0an! %erkel&mp&k 0an! terdapat pada media 0an! telah di!&res&leh suatu sampel %ila suspensi 0an! ter%entuk kental) maka %akteri 0an! terkandun!dalm suspensi itu adalah %akteri !ram ne!ati


35/48


36/48

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

E.Coli

Column1

. PER,ITUN+AN /UMLA, MI-R*BA

Perhitun!an "umlah mikr&%a %eru"uan a!ar mahasiswa men!etahui #ara $ #ara perhitun!an "umlah mikr&%a) %aik se#ara lan!sun! maupun tidak lan!sun! sertamelakukan perhitun!an "umlah mikr&%a 0an! ada pada suatu %ahan. Penentuan

"umlah an!ka mikr&%a san!at pentin! dilakukan untuk menetapkan keamanan suatusediaan 'armasi dan makanan. Ber%a!ai met&d telah dikem%an!kan untuk men!hitun!

"umlah mikr&&r!anisme. Met&de terse%ut men!hitun! sel) massa sel) atau isi sel 0an!sesuai den!an "umlah sel. Perhitun!an mikr&%a dapat dilakukan den!an dua #ara0aitu) se%a!ai %erikut

a. Perhitun!an se#ara lan!sun! merupakan perhitun!an 0an! men!hitun! "umlaht&tal sel 6sel mati dan hidup7 0an! ada pada sampel. -euntun!an met&de ini 0aitu

pelaksanaann0a #epat dan tidak memerlukan %an0ak peralatan. Namunmempun0ai kelemahan se%a!ai 0akni sel $ sel mikr&%a 0an! telah mati tidakdapat di%edakan dari sel 0an! hidup. -arena itu keduan0a terhitun!. Den!an katalain hasil 0an! diper&leh ialah "umlah t&tal sel 0an! ada di dalam p&pulasi.

%. Perhitun!an se#ara tidak lan!sun! merupakan perhitun!an 0an! dipakai untukmenentukan "umlah mikr&%a 0an! hidup atau han0a menentukan "umlah mikr&%a0an! hidup sa"a. Untuk menentukan "umlah mikr&%a 0an! hidup dapat dilakukansetelah suspensi %ahan atau %iakan mkr&%a dien#erkan %e%erapa kali danditum%uhkan dalam medium den!an #ara tertentu ter!antun! dari ma#amn0a

%ahan dan si'at mikr&%an0a.

Dalam per#&%aan perhitun!an mikr&%a ini 0aitu plate count&a. Plate 2&unt Meth&d) termasuk perhitun!an se#ara tidak lan!sun!. Umumn0a)

dilakukan den!an #ara melarutkan sampel asli dalam %er%a!ai serial pelarutan.-emudian masin! $ masin! hasil pelarutan di %iakan pada a!ar) entah den!anteknik p&ur plate ataupun streak plate. Setelah itu) inku%asi dilakukan dan k&l&nidi amati pada #awan a!ar dan dihitun! se%a!ai "umlah t&tal k&l&ni 0an!mem%entuk unit. Ada dua met&de 0an! umum di!unakan dalam plate #&un) 0aituspread plate meth&de dan p&ur plate meth&de.

Namun dalam per#&%aan kali ini 0an! di!unakan dalam perhitun!an mikr&%ase#ara plate #&unt men!!unakan p&ur plate meth&de. P&ur plate meth&de)


37/48

Berikut tahap $ tahap per#&%aan plate #&unt Pertama) mempersiapkan alat dan %ahan 0an! akan di!unakan. Alat $ alat terse%ut)0aitu #awan petri se%a!ai tempat pen#ampuran medium den!an suspensi

pen!en#eran) !elas ukur untuk men!ukur dalam pen!am%ilan 1ml sampel dll) ta%un!reaksi di!unakan untuk tempat #ampuran sampel den!an aGua steril) dan pipet tetes

mem%antu kita pada saat men!am%il larutan 0an! sukar larut. Dan %ahan $ %ahan0an! di!unakan 0aitu antara lain sampel %ahan 0an! akan di#ampurkan den!anaGuadest dan medium a!ar se%a!ai %ahan utama.-edua) setelah alat $ alat dan %ahan telah tersedia diatas me"a ker"a lakukan sterilisasiterle%ih dahulu pada me"a ker"a dan telapak tan!an praktikan se%elum melakukan per#&%aan. Setelah itu) #airkan medium a!ar 0an! terdapat didalam ta%un! reaksi den!an#ara meletakkan ta%un! reaksi ke dalam !elas %eker 0an! %erisi air sampai mediuma!ar terse%ut #air. -emudian am%il 1ml sam&el 6medium a!ar7 dan masukkan kedalam erlenme0er 0an! %erisi >>ml aGua steril) !&"&! hin!!a h&m&!en 6ter#ampurkeseluruhan7.-eti!a) masukkan pen!en#eran 1? 1 den!an #ara memasukkan #ampuran sampel tadi)Dan masukkan ke dalam ta%un! 1. Lalu) dari ta%un! 1 am%il 1ml dan masukkan ke#awan petri steril dan !&0an!kan an!ka diatas me"a ker"a. Setelah itu) am%il 1mlsuspensi ta%un! 1 dimasukkan ke ta%un! (. -emudian 1ml dari ta%un! ( masukkan ke#awan petri 6pen!hantar 1Q7 dan !&0an!kan an!ka diatas me"a ker"a. Lakukan

pen!en#eran hin!!a pen!en#eran 1? 4. Setelah itu) %un!kus #awan dan inku%asiselama ( "am. Dan lakukan pen!er"aan diatas la!i 6replikasi7.

Didapatkan hasil perhitun!an "umlah mikr&%a) 0aitu 1 1? 5 1 1? 8

Replikasi 1 8 4>

Replikasi ( 1(> >Pen!en#eran 1? 56A7 C 68 1(> 1 1? 57 ( C 1?1 1? 5

Pen!en#eran 1? 86B7 C 64> > 1 1?57 ( C 4 1?8 C 4 ? 1? 5

/adi) B A C 4 ? 1? 5 1?1 1?5 C 4) 23U:mlB:A O ( 0an! dipakai adalah "umlah mikr&%a dari hasil pen!en#eran se%elumn0a.

-ele%ihan dari p&ur plate meth&d adalah


38/48

%ersi'at transparan) %erukuran ke#il sehin!!a tidak dapat dilihat se#ara lan!sun! tanpaalat 0an! mempun0ai pem%esaran dan %isa sa"a teknik khusus.

Untuk men!etahui struktur) m&r'&l&!i dan si'at kimia %akteri) kita perlumelakukan per#&%aan pen!e#atan terhadap %akteri atau mikr&%a terse%ut. Prinsip

dasar dari pen!e#atan ini adalah adan0a ikatan i&n antara k&mp&nen seluler dari %akteri den!an sen0awa akti' dari pen!e#atan 0an! dise%ut kr&m&!en. Ter"adi ikatani&n karena adan0a muatan listrik %aik pada k&mp&nen seluler maupun pada

pen!e#atan. Berdasarkan adan0a muatan ini maka dapat di%edakan pewarna asam dan pewarna %asa.Fat warna adalah sen0awa kimia 0an! %erupa !aram $ !aram 0an! salah satu i&nn0a

%erwarna. +aram terdiri dari i&n %ermuatan p&siti' dan i&n %ermuatan ne!ati'.Sen0awa $ sen0awa kimia ini %er'un!si untuk mem%edakan %akteri $ %akteri karenareaksin0a den!an sel %akteri akan mem%erikan warna %er%eda. Per%edaan inilah 0an!di!unakan se%a!ai dasar pewarnaan %akteri.

Tu"uan dari pen!e#atan 0aitu a. Mempermudah melihat %entuk "asad mikr&%a %aik %akteri) 0east) ataupun kapan!.

%. Memper"elas ukuran dan %entuk mikr&%a.#. Melihat struktur luar dan kalu memun!kinkan "u!a struktur dalam mikr&%a dapat

dilihat.d. Melihat reaksi mikr&%a terhadap peawarna 6#at7 0an! di%erikan sehin!!a si'at

'isik dan kimia 0an! ada dapat diketahui.3akt&r $ 'akt&r 0an! mempen!aruhi pen!e#atan %akteri 0aitu 'iksasi) peluntur warna)su%strat intensi'ikasi) pewarnaan) dan pen!!unaan @at warna penutup.

M&r'&l&!i mikr&%a dapat di%edakan men"adi dua) 0aitu a. M&r'&l&!i makr&sk&pik) p&pulasi mikr&%a tum%uh san!at #epat ketika

mikr&%an0a ditam%ahkan dan disesuaikan den!an !i@i dan k&ndisi lin!kun!an0an! memun!kinkan untuk %erkem%an!. Melalui pertum%uhan ini) %er%a!ai "enis

%akteri dan kadan! mem%eri penampilan 0an! khas. Be%erapa k&l&ni mun!kinakan %erwarna) ada 0an! tidak teratur. -arakteristik k&l&ni 6%entuk) ukuran)mar!in) ele


39/48

Berikut tahap $ tahap per#&%aan pen!e#atan dan m&r'&l&!i mikr&%a 0an!kami lakukan) 0aitu a. Pen!e#atan sederhana

Pen!e#atan sederhana di!unakan untuk memperlihatakan atau untuk

memper"elas k&ntras antara sel dan latar %elakan! sehin!!a dapat memperta"am %entuk dari sel $ sel mikr&%a itu sendiri. Den!an #ara mewarnai sel $ sel mikr&%aden!an @at warna.Terle%ih dahulu kami mempersiapkan alat $ alat dan %ahan 0an! akan di!unakan.Alat $ alat 0an! di!unakan) 0aitu &%"ek !lass) lampu spirtus) dan &se tumpul.*%"ek !lass se%a!ai tempat %iakan 0an! akan diamati %entuk dan m&r'&l&!in0a.Lampu spirtus untuk mensterilkan alat $ alat 0an! akan %ersentuhan den!an

%iakan. Dan &se tumpul di!unakan pada saat men!am%il %iakan dari ta%un!reaksi. Sedan!kan %ahan $ %ahan 0an! di!unakan 0aitu %iakan murni Cereus dan#at kristal


40/48

Untuk melakukan per#&%aan pen!e#atan !ram terle%ih dahulu mempersiapkan alat $ alat dan %ahan 0an! akan di!unakan. Alat $ 0an! di!unakan) 0aitu &%"ek !lass)lampu spirtus) dan &se. *%"ek !lass se%a!at tempat %iakan 0an! akan diamati

%entuk dan m&r'&l&!i dari %iakan terse%ut. Lampu spirtus se%a!ai alat pada saatsterilisasi alat $ alat lain 0an! akan %ersentuhan den!an %iakan. Serta &se tumpul

untuk mem%antu kita pada saat men!am%il %iakan. Sedan!kan) %ahan $ %ahan0an! di!unakan 0aitu %iakan murni B&$ubtilis) %iakan murni %&coli) larutan #atkristal


41/48

&leh @at warna lawan 6sa'ranin7 pada pen!amatan mikr&skr&p sel $ sel %akteritampak %erwarna merah. %scherichia coli termasuk dalam 'amili

%nterobacteraceae 0an! termasuk !ram ne!ati' dan %er%entuk %atan! 0an!'ermentati'.

4. M*R3*L*+I 3UN+I

Per#&%aan m&r'&l&!i 'un!i %ertu"uan a!ar setelah melakukan praktikum inidiharapkan mahasiswa dapat men!enali %er%a!ai "enis "amur %erdasarkanm&r'&l&!in0a.Struktur dasar "amur adalah hi'a. Tu%uh "amur tersusun dari k&mp&nen dasar 0an!dise%ut hi'a. ,i'a mem%entuk "arin!an 0an! dise%ut miselium. Miselium men0usun

"alinan $ "alinan semu men"adi tu%uh %uah. -ete%alan hi'a %er


42/48

Setelah alat $ alat dan %ahan telah ada. Bersihkan !elas &%"ek den!an alk&h&l8?H a!ar steril lalu teteskan 1tetes lakt&'en&l pada !elas &%"ek. Setelah itu sterilkan

"arum &se tumpul diatas n0ala lampu spirtus lalu) am%il %iakan "amur dari (hi)opus sp& dan letakkan di !elas &%"ek 0an! telah ditetesi lakt&'en&l. Apa%ila terdapat masamiselium mun!umpul) pisahkan den!an men!!unakan ( %uah "arum preparat.

-emudian tutup den!an !elas penutup hindari !elem%un! udara. Dan amati di%awahmikr&skr&p den!an pem%esaran 1? !am%ar m&r'&l&!in0a. Dan lakukan hal terse%utla!i tetapi den!an men!!unakan metilen %lue.Dari hasil 0an! didapat %ahwa pada pen!amatan (hi)opus sp& termasuk !&l&n!ankapan! 6"amur %enan!7 sp&ran!i&'&r tampak transparan karena pen!aruh lakt&'en&ldan sp&ran!ium %erwarna %iru karena men0erap warna metilen %lue. ,asil 0an!diper&leh sesuai den!a re'erensi 0aitu sp&ran!i&'&ra tum%uh drai st&l&n dan men!arahke udara) %aik tun!!al atau dlam kel&mp&k) rhi@&id tum%uh %erlawanan dan terletak

pada p&sisi 0an! sama den!an sp&ran!i&'&ra) sp&ran!ia !&l&%us atau su% !l&%usden!an dindin! %erspinul&sa 6duri duri pendek7) 0an! %erwarna #&klat !elap sampaihitam %ila telah masak) k&lumela &


43/48

a. Tahap 1) alat $ alat 0an! di!unakan 0aitu pemanas) !elas %eker) tim%an!an dan#awan petri steril. Pemanas untuk men#airkan medium) !elas %eker se%a!aitempat:wadah ta%un! reaksi 0an! %erisi medium pada saat pemanasan. Tim%an!anuntuk menim%an! sampel tanah. Dan #awan petri se%a!ai wadah suspensi.Sedan!kan) %ahan 0an! di!unakan 0aitu medium dan sampel tanah.

2airkan medium didalam !elas %eker 0an! %erisi air diatas penan!as air) sam%ilmenun!!u medium #air tim%an! tanah se%erat 1!. Setelah media sudah #air)en#erkan 1! tanah di ta%un! 1 didalam >ml air) lalu am%il 1ml anti%i&tik danmedium kemudian tuan! ke #awan petri. -emudian am%il ?)4ml dan tuan! ke#awan petri) !&0an! an!ka . Lakukan pen!en#eran hin!!a k&nsentrasi 1? 4.Setelah itu inku%asi pada suhu 8 2.

%. Tahap () pada tahap ini pen!er"aan dilakukan didalam LA3 6Laminar Air 3l&w7merupakan me"a ker"a steril) tu"uann0a a!ar pada saat pen!er"aan tidakterk&ntaminasi de%u) dan sp&ra $ sp&ra lainn0a. Alat $ alat 0an! di!unakan) 0aitulampu spirtus) dan &se tumpul. Lampu spirtus untuk melakukan sterilisasi alat $alat 0an! akan %ersentuhan den!an mikr&%a dan media #air. *se tumpuldi!unakan pada saat men!am%il mikr&%a. Sedan!kan %ahan $ %ahann0a 0aitumikr&%a 0an! di #awan petri pada saat penanaman tahap 1) dan media #air se%a!aimedia pertum%uhan.Sterilkan &se tumpul den!an alk&h&l lalu dipanaskan diatas n0ala lampu spirtus.-emudian) am%il mikr&%a 0an! terdapat di #awan petri 6pen!en#eran 1? 7 den!anmen!!unakan &se tumpul. Lalu tanam pada media #air dita%un!. Setelah itu tutupta%un! den!an plastik dan inku%asi pada suhu 8 2 selama ( "am. Dan lakukanhal 0an! sama terhadap media pertum%uhan den!an pen!en#eran 1? 4.

#. Tahap ) dalam tahap ini tempat pen!er"aann0a sama den!an tahap ( 0aitudidalam LA3. Alat $ alat 0an! di!unakan 0aitu lampu spirtus) &se tumpul dan#awan petri. Bahan 0an! di!unakan 0aitu %iakan mikr&%a) media nutrien %ee' dan

paper disk.Sterilkan &se tumpul diatas n0ala lampu spirtus) lalu am%il %iakan mikr&%adidalam ta%un!. -emudian tanam dalam media nutrien %ee'. Setelah itu tuan!suspensi lalu tuan! "u!a medium a!ar ke #awan petri tun!!u hin!!a %eku.-emudian letakkan paper disk diatas permukaan media. Inku%asi pada suhu 8 2selama ( "am. Setelah itu tetesi den!an 1? l larutan anti%i&tik) dan ukur diameterham%at untuk masin! $ masin! anti%i&tik) interprestasikan hasil den!an anti%i&tik.

8. U/I SENSITI3ITAS MI-R*BA TER,ADAP ANTIBI*TI- 6MET*DE -IRB9BAUER7

Setelah melakukan praktikum u"i sensiti'itas mikr&%a terhadap anti%i&tik6met&de kir%0 %auer diharapkan mahasiswa dapat melakukan u"i sensiti'itas terhadapanti%i&tik den!an met&de -ir%0 Bauer serta menentukan mikr&%a u"i termasuk sensiti' atau resisten terhadap anti%i&tik 0an! diu"ikan.

Anti%i&tik merupakan sen0awa kimia 0an! dihasilkan &leh mikr&&r!anisme6khususn0a dihasilkan &leh 'un!i7 atau dihasilkan se#ara sintetik 0an! dapat

mem%unuh atau men!ham%at perkem%an!an %akteri dan &r!anisme lain. Tiap $tiapanti%i&tik memiliki e'ekti


44/48

6%akteri7. Be%erapa anti%i&tik dapat %eker"a den!an %aik pada %akteri !ram ne!ati'dan %e%erapa anti%i&tik lainn0a ada 0an! le%ih e'ekti' pada %akteri !ram p&siti'.

Dalam u"i sensiti'itas mikr&%a terhadap anti%i&tik den!an men!!unakanmet&de kir%0 %auer) kami dapat men!etahui %e%erapa "enis %akteri 0an! sensiti'

terhadap anti%i&tik 0an! diu"ikan. Terle%ih dahulu mempersiapkan alat $ alat 0an!di%utuhkan 0aitu #awan petri) "an!ka s&r&n!) dan erlenme0er 4?##. Sedan!kan %ahan

$ %ahan 0an! di!unakan 0aitu media nutrien a!ar) kultur %&Colidan B&'ureus dalammedia nutrien #air %erumur ( "am) anti%i&tik dan paper disk. Media nutrien a!arse%a!ai medium pertum%uhan) kultur %&Coli dan B&'ureus dalam media nutrien #airse%a!ai %ahan mikr&%a 0an! diu"i den!an anti%i&tik. Paper disk untuk men!ukursensiti'itas anti%i&tik den!an met&de paper disk 0an! %erisi a!en antimikr&%a padamedia 0an! telah ditanami mikr&%a dan akan %erdi'usi pada media a!ar. Daerah "ernihdisekitar paper disk merupakan ham%atan mikr&%a &leh anti%i&tikpada permukaana!ar. Setelah alat $ alat dan %ahan telah siap) %erikut ini tahap $ tahap 0an! kamilakukan pada per#&%aan u"i sensiti'itas mikr&%a terhadap anti%i&tik den!anmen!!unakan met&de kir%0 %auer) 0aitu alat $ alat dan %ahan 0an! di!unakan terle%ihdahulu disempr&tkan alk&h&l tu"uann0a a!ar steril karena pen!er"aan ini diker"akan diLA3 6Laminar Air 3l&w7 0aitu me"a ker"a steril untuk melakukan in&kulasi :

penanaman. -emudian masukkan alat $ alat dan %ahan terse%ut ke dalam LA3) lalusterilkan &se tumpul diatas n0ala lampu spirtus. Am%il %iakan %&Colidan tanam dimedia nutrien %ee') %e!itu pula %iakan B&'ureus am%il men!!unakan &sen dan tanam

pada media nutrien %ee' 0an! %er%eda den!an %&Coli&setelah itu tuan! suspensi %&colidalam #awan petri lalu tuan! medium a!ar dalam #awan 0an! sudah di#airkanterle%ih dahulu dan tun!!u hin!!a padat. Setelah itu taruh paper disk dan tetesianti%i&tik ampi#illin dan !entamisin) tutup #awan dan %un!kus den!an kertas.Tu"uann0a di%un!kus den!an kertas 0aitu a!ar hasiln0a tidak mudah terkena #aha0a.Dan di inku%asi.Perlakuaan diatas sama "u!a dilakukan pada %iakan B&'ureus . 2atatan masin! $masin! dalam #awan petri diletakkan ( paper disk.

Dari hasil per#&%aan u"i sensiti'itas den!an men!!unakan met&de -ir%0 Bauer kami dapat men!etahui %e%erapa "enis %akteri 0an! sensiti' terhadap anti%i&tika 0an!diu"ikan. Didapatkan @&na ham%at : @&na %enin!. ,al terse%ut menun"ukkan %ahwa

%akteri sensiti' terhadap anti%i&tik. Anti%i&tik ampisilin %eker"a den!an men!ham%atsintesis dindin! sel 0aitu den!an men0eran! peptid&!likan dan mampu melakukan

penetrasi pada %akteri !ram p&siti' dan !ram ne!ati'. ,al ini dise%a%kan ke%eradaan

!u!us amin& pada ampi#illin) sehin!!a mem%uatn0a mampu menem%us mem%ranterluar 6&uter me%ran7 pada %akteri.Per%edaan luas : le%ar diameter @&na ham%at pada #awan %&Colidan B&$ubtilisdise%a%kan 'akt&rn0a) 0aitu k&nsentrasi anti%i&tik 0an! diserap &leh paper disk pada#awan %er%eda karena larutan anti%i&tik pada tiap k&nsentrasi kuran! h&m&!en.


45/48

BAB IV

KESIMPULAN

1. Mahasiswa telah mampu memahami tu"uan dan #ara $ #ara sterilisasi) melakukan

sterilisasi den!an men!!unakan aut&kla') men!etahui pen!!unaan dan ma#ammedium serta mem%uat medium.a. Sterilisasi adalah suatu pr&ses untuk mematikan semua &r!anisme 0an! terdapat

pada suatu %enda. %. Tu"uan sterilisasi a!ar alat $ alat 0an! di!unakan %ersih dari mikr&&r!anisme

selain itu "u!a untuk men#e!ah peralatan #epat rusak.#. 2ara $ #ara sterilisasi 0aitu sterilisasi se#ara 'isik) kimia dan mekanik. Tetapi 0an!

serin! di!unakan keseluruhan praktikut men!!unakan sterilisasi se#ara 'isik.d. Medium pertum%uhan 6disin!kat den!an medium7 adalah tempat untuk

menum%uhkan mikr&%a. Tu"uann0a dalam penelitian a!ar men!uran!i p&pulsamikr&%a 0an! ada di lin!kun!an.

e. -el&mp&k kami mem%uat medium nutrien a!ar te!ak untuk %ahan praktikumselan"utn0a 0aitu se%a!ai media penanaman.

/adi) mahasiswa telah men#apai nilai $ nilai tu"uan praktikum.

(. Mahasiswa dapat melakukan penanaman) dan is&lasi mikr&%a serta men!amati pertum%uhan %akteri.a. Penanaman 6in&kulasi7 merupakan suatu peker"aan memindahkan %akteri dari

medium lama ke medium 0an! %aru den!an tin!kat ketelitian 0an! san!at tin!!i. %. -el&mp&k kami melakukan menanan mikr&%a aer&% ti!a ma#am 0aitu %iakan a!ar

te!ak) %iakan a!ar mirin!) dan %iakan #air.#. Bakteri aer&% adalah %akteri 0an! mem%utuhkan &ksi!en untuk pr&ses respirasi)

pertum%uhan) kelan!sun!an hidup dan %erepr&duksi.d. Prinsip dari is&lasi mikr&%a adalah memisahkan satu "enis mikr&%a den!an

mikr&%a lainn0a 0an! %erasal dari #ampuran %erma#am $ ma#am mikr&%a.e. Teknik 0an! dilakukan pada tahap is&lasi 0aitu teknik penanaman den!an !&resan

6streak7.'. Untuk men!etahui pertum%uhan mikr&%a) kami melakukan pen!amatan

a%s&r%ansi tiap "am selama (8"am.!. A%s&r%ansi adalah rasi& l&!aritmik dari radiasi 0an! dipaparkan ke suatu %ahan

terhadap radiasi 0an! ditransmisikan menem%us %ahan. A%s&r%ansi di!unakandalam spektr&'&t&meter.

. Mahasiswa telah dapat men!etahui #ara $ #ara perhitun!an mikr&%a) %aik se#aralan!sun! maupun tidak lan!sun!) serta melakukan perhitun!an "umlah mikr&%a 0an!ada pada suatu %ahan.a. Perhitun!an "umlah mikr&%a se#ara lan!sun!) 0aitu perhitun!an 0an! men!hitun!

t&tal sel 6hidup dan mati7 pada suatu sampel. Ma#am $ ma#amn0a 0aitu #&untin!#ham%er dan 'ilter mem%ran.

%. Perhitun!an "umlah mikr&%a se#ara tidak lan!sun!) 0aitu perhitun!an 0an!dipakai untuk menentukan "umlah mikr&%a 0an! hidup atau han0a menentukan

"umlah mikr&%a 0an! hidup sa"a. Ma#am $ ma#amn0a) 0aitu kekeruhan) analisakimia) %erat kerin!) #ara pen!en#eran) MPN) dan "umlah k&l&ni 6plate #&unt7.

#. 9an! kami lakukan dalam perhitun!an "umlah mikr&%a se#ara tidak lan!sun!0aitu %erdasarkan "umlah k&l&ni 6plate #&unt7.


46/48

d. ,asil 0an! didapat 0aituPen!en#eran 1? 5 6A7 C 68 1(> 1 1? 57 ( C 1?1 1? 5

Pen!en#eran 1? 8 6B7 C 64> > 1 1?57 ( C 4 1?8 C 4 ? 1? 5

/adi) B A C 4 ? 1? 5 1?1 1?5 C 4) 23U:mlB:A O ( maka 0an! dipakai adalah "umlah mikr&%a dari hasil pen!en#eran

se%elumn0a.

. Pen!e#atan dan m&r'&l&!i mikr&%a dalam praktikum ini) mahasiswa telah mampumen!etahui tu"uan dari pen!e#atan dan melakukan pen!e#atan terhadap mikr&%aa. Tu"uan dari pen!e#atan 0aitu mempermudah melihat mikr&%a) memper"elas

ukuran dan %entuk mikr&%a) melihat struktur luar dan %ila memumn!kinakanstruktur dalam dapat terlihat) serta melihat reaksi mikr&%a terhadap #at 0an!di%erikan) sehin!!a si'at $ si'at 'isik dan kimia 0an! ada %isa di deteksi.

%. -ami melakukan pen!e#atan sederhana den!an han0a men!!unakan #at krista


47/48

kir%0 %auer serta menentukan mikr&%a u"i termasuk sensiti' atau resisten terhadapanti%i&tik.a. U"i sensiti'itas mikr&%a terhadap anti%i&tik den!an men!!unakan met&de kir%0

%auer) kami dapat men!etahui %e%erapa "enis %akteri 0an! sensiti' terhadapanti%i&tik 0an! diu"ikan.

%. Prinsip dasarn0a adalah den!an meletakkan paper disk 0an! telah men!andun!anti%i&tik den!an k&nsentrasi dan kadar tertentu pada media a!ar 0an! telahditanam %akteri u"i.

#. F&na ham%at : %enin! 0an! dihasilkan disekitar paper disk inilah 0an! di!unakanse%a!ai dasar penentuan tin!kat resistensi.

d. Didapat hasil 0aitu %&Coli B C ?)5>= C 6()1 ()(17 ( C ()144

B&'ureus *B C )5> ) > ( C )(>= C () 1 () ( ( C () 14


48/48

DAFTAR PUSTAKA

Dwid"&seputr&.(?? . asar asar !ikrobiologi& /akarta D"am%atan.

+and"ar) I.) R.A. Sams&n) -.U.D. Tweel =ermelen) A. *etari) I.Sant&s&.1>>5.

Pengenalan Kapang ropik .mum& /akarta 9a0asan *%&r Ind&nesia.

,a'san. (?11. !ikrobiologi .mum& Makassar Alauddin Uni

LAPORAN AKHIR MIKROBIOLOGI FARMASI

Documents

Transcript of LAPORAN AKHIR MIKROBIOLOGI FARMASI