Laporan Flengkap Fito

8/18/2019 Laporan Flengkap Fito

1/56

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Indonesia terletak di antara dua benua dan dua samudera. Letak geografis

dan iklim Indonesia yang memungkinkan tumbuh suburnya tumbuhan menjadikan

Indonesia negara yang kaya akan tumbuhan yang potensial dan bermanfaat atau

berkhasiat. Tetapi pemanfaatan dan pengolahan tumbuh-tumbuhan yang ada baru

sebagian kecil, sehingga masih banyak tumbuhan yang berkhasiat dan bermanfaat belum dimanfaatkan secara optimal. Nah, anekaragam tumbuhan yang tumbuh di

sekitar kita dan dapat memberikan manfaat kesehatan bagi penggunanya, hal

inilah yang kemudian terus dikembangkan dan diwariskan turun-temurun antar

generasi, sehingga obat tradisional dapat dimanfaatkan sampai sekarang. Salah

satu dari budaya bangsa Indonesia yang berkaitan dengan pemanfaatan kekayaan

alam, yaitu untuk pemeliharaan kesehatan dan pengobatan penyakit. udayatersebut diperoleh dari pengalaman secara turun-temurun !"ullian, #$$%&.

'ada (aman dahulu masyarakat Indonesia mengenal dan memakai tanaman

berkhasiat obat sebagai salah satu upaya dalam penanggulangan masalah

kesehatan yang dihadapinya, jauh sebelum pelayanan kesehatan formal dengan

obat-obat modern menyentuh masyarakat. 'enggunaan tumbuhan oleh nenek

moyang kita sebagai sumber bahan obat telah dimulai sejak sebelum abad )*, hal

ini dibuktikan dengan keberadaan catatan tentang tanaman obat yang berisi

kurang lebih +$$ tanaman obat, sejumlah hewan dan mineral dan dibukukan

dengan judul e ateria edica Libri in/ue, yang disusun oleh seorang

farmakobotanist, bangsa 0unani bernama 'edianous eskorides !"ullian, #$$%&.

'ada awal abad ))I, perkembangan farmakognosi mulai terarah pada

penggunaan bahan aktif yang terdapat pada tanaman obat sebagai prototipe untuk


2/56

kemudian dibuat bahan kimia yang sama strukturnya dengan senyawa yang

berkhasiat obat tersebut sehingga pembuatan obat tidak harus menguras banyak

sumber daya alam. Senyawa aktif tersebut disebut sebagai Lead Compound

!1utapea, 2333&.

'erkembangan dewasa ini dengan ditemukannya cara-cara isolasi dan

ekstraksi mempermudah untuk diambilnya senyawa aktif dari suatu tumbuhan

yang dapat digunakan sebagai bahan obat. anyak perhatian terhadap struktur

kimia dari tanaman obat, sehingga berkembanglah ilmu Natural Product

Chemistry atau yang lebih dikenal dengan 4imia ahan 5lam !1utapea, 2333&.

'roduk obat-obatan yang berasal dari bahan alam saat ini banyak diminati

oleh berbagai negara dan menjadi salah satu komiditi perdagangan yang

mempunyai masa depan yang cerah. 1al ini dikarenakan produk dari bahan alam

tersebut lebih aman jika dibandingkan dengan senyawa kimia sintesis !1utapea,

2333&.6itokimia adalah ilmu yang mempelajari kandungan kimia dari bahan alam

yang mempunyai khasiat obat. ahan alam meliputi tumbuhan, hewan, mineral,

serta biota laut. ahan alam tersebut mengandung beberapa komponen kimia yang

dapat digunakan sebagai obat. 7bat yang berasal dari bahan alam dikenal luas

sebagai obat tradisional !Tobo, #$$2&.

alam hal ini peran fitokimia sangat mendukung dalam memberikan

kajian-kajian iilmiah mengenai kandungan kimia tumbuhan, yang meliputi isolasi

(at berkhasiat kemudian mengidentifikasi (at berkhasiat tersebut. 'engetahuan

tersebut sangat penting agar dapat diambil langkah lebih lanjut guna pemanfaatan

secara optimal, yang menyangkut pengembangan bahan obat tersebut dalam

bentuk sediaan-sediaan farmasi, sehingga hal ini akan mempermudah pemakaian,

pengaturan dosis dan pemantauan efek toksis yang mungkin ada !Tobo, #$$2&.


3/56

Sehingga, mengingat besarnya manfaat dari berbagai tanaman di negara

kita ini, terutama dalam bidang kesehatan maka sudah selayaknya dilakukan

penelitian dan pengembangan dari beberapa tanaman agar manfaatnya dapat

langsung dirasakan oleh masyarakat. Sebagaimana firman 5llah swt. dalam 8.S.

5l-5n9am: 33 :

; ?@ A= BC > D BE > F BG B HJ > K B M < O B AP BQ B ;@R @ A= BC > D BE > F BG B H A? B H@ A BU V WX Y B ?@ Z B[ B Q >\B ] @̂W VX _ B ?@ O A= VC B B BQ@X B X_ B = >@ A B @ > B Y > ?@ @ > = VWX Y B ?@ B AP @ XD B B? < AP B ; ?@ < D @ > Q B B D B B >\B X B@ v@D @ B B W B@ XD X ; R @Ax B B? < D B >B B A P @ Bx > ? < B A? VD z WX B B _ [ V WX B { A= B|> \B

B _=


4/56

b. engetahui cara pemisahan senyawa berdasarkan kepolaran dengan metode

partisi cair-padat dan partisi cair-cair.

c. engetahui cara penentuan eluen yang sesuai dengan metode 4LT.

d. engetahui cara pengujian toksisitas sampel daun ƒanjeng ! Piper betle L.&

dengan menggunakan lar„a udang &rtemia salina Leach.

e. engetahui cara isolasi sampel daun ƒanjeng ! Piper betle L.& dengan

menggunakan metode 4LT 'reparatif dan 4romatografi air *akum !4*&

f. engetahui uji kemurnian senyawa dengan menggunakan metode 4LT multieluen.

g. engetahui cara identifikasi komponen kimia dengan menggunakan pereaksi

tertentu.

C. Prinsip Percobaan

2. …kstraksi

a. aserasi'enyarian (at aktif yang dilakukan dengan cara merendam serbuk

simplisia dalam cairan penyari yang sesuai selama 2†#‡ jam kemudian disaring

dan diambil filtratnya kemudian dipekatkan.

b. 'erkolasi

'enyarian (at aktif atau (at berkhasiat dari serbuk simplisia yang

dilakukan dengan cara serbuk simplisia di tempatkan dalam suatu bejana silinder,

yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. airan penyari dialirkan dari atas ke

bawah melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan (at aktif sel-sel

yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh.

c. ˆefluks

'enyarian (at aktif pada simplisia melalui proses penyarian yang

berkesinambungan di mana simplisia dan cairan penyari dipanaskan bersama-


5/56

sama. 'ada temperatur tertentu, cairan penyari akan mendidih sambil

mengekstraksi (at aktif yang ada dalam sel. 4arena panas, uap akan naik ke

kondensor dan mengalami kondensasi lalu turun menyari simplisia. emikian

seterusnya hingga (at aktif tersari sempurna dan diulang ‰ kali sampai ‡ jam

hingga proses ekstraksi sempurna.

d. Sokhletasi

'rinsip penggunaan metode ini adalah dengan cara memanaskan pelarut

hingga membentuk uap dan membasahi sampel. 'elarut yang sudah membasahisampel kemudian akan turun menuju labu pemanasan dan kembali menjadi uap

untuk membasahi sampel, sehingga penggunaan pelarut dapat dihemat karena

terjadi sirkulasi pelarut yang selalu membasahi sampel. 'roses ini sangat baik

untuk senyawa yang tidak terpengaruh oleh panas.

e. Šji Toksisitas

'enentuan ketoksikan ekstrak dengan metode SLT ! (rine %hrimp Lethality )est & menggunakan lar„a udang &rtemia salina dengan memasukkan 2$

ekor lar„a &rtemia salina secara acak ke dalam „ial yang telah berisi sampel dan

control negati„e dan setelah #‡ jam dihitung jumlah lar„a yang mati dengan

menggunakan parameter lethal concentration ‹$ !L‹$& .

#. Isolasi

a. 4romatografi Lapis Tipis

'emisahan senyawa dengan metode 4LT 'reparatif yang terjadi

berdasarkan perbedaan daya serap dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-

komponen kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen, oleh karena daya

serap adsorben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak

dengan kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan

pemisahan.


6/56

b. 4romatografi air *akum

'roses isolasi dengan menggunakan 4romatografi air *akum !4*&

untuk memisahkan golongan senyawa menggunakan silika gel sebagai absorben

dan berbagai perbandingan pelarut n-heksan, etil asetat, metanol dan

menggunakan pompa „akum untuk memudahkan penarikan eluen.

‰. Identifikasi 4omponen 4imia

a. Š* #‹‡ nm

'ada Š* #‹‡ nm, lempeng akan berflouresensi sedangkan sampel akantampak berwarna gelap. 'enampakan noda pada lampu Š* #‹‡ nm adalah karena

adanya daya interaksi antara sinar Š* dengan indikator flouresensi yang terdapat

pada lempeng. 6louresensi cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang

dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat

energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan

semula sambil melepaskan energi. b. 'ada Š* ‰++ nm

'ada Š* ‰++ nm, noda akan berflouresensi dan lempeng akan tampak

berwarna gelap. 'enampakan noda pada lampu Š* ‰++ nm adalah karena adanya

interaksi antara sinar Š* dengan gugus kromofor yang terikat oleh ausokrom

yang ada pada noda tersebut. 6louresensi cahaya yang tampak merupakan emisi

cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi

dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke

keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang tampak pada

lampu Š* ‰++ nm terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak

berflouresensi pada sinar Š* ‰++ nm.


7/56

c. 'ereaksi 1#S7‡ 2$ Œ

'rinsip penampakan noda pada pereaksi 1#S7‡ 2$ Œ adalah berdasarkan

kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak gugus kromofor

dari (at aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan bergeser ke arah

yang lebih panjang !Š* menjadi *IS& sehingga noda menjadi tampak oleh mata.

d. 'erekasi ragendorff

'ada pengujian senyawa golongan alkaloid, plat silika gel hasil uji 4LT

disemprot dengan pereaksi ragendorff, uji positif apabila menghasilkan noda berwarna coklat atau jingga.

e. 'ereaksi 5ll‰

'ada pengujian senyawa fla„onoid, plat silika gel hasil uji 4LT disemprot

dengan 5ll‰. Timbul noda berwarna kuning yang menandakan ekstrak

mengandung fla„onoid bebas. 6la„onoid bebas jenis fla„onol akan memberikan

warna kuning cerah untuk menunjukkan hasil positif fla„onoid.f. 'ereaksi Liebermann-urchard

Indikasi positif steroid ditandai dengan adanya perubahan warna menjadi

biru kehijauan. 'ada terpenoid, indikasi positif ditandai dengan perubahan warna

menjadi merah, ungu atau kecoklatan.


8/56

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Uraian Sampel

2. 4lasifikasi Tumbuhan !4harisma et al , #$2$&

4ingdom : 'lantae

'hylum : agnoliophyta

lass : agnoliopsida

7rdo : 'iperales6amily : 'iperaceae

ƒenus : 'iper

Species : Piper betle L.

#. orfologi Tumbuhan

atang berwarna hijau kecokelatan, permukaan kulit kasar dan berkerut-

kerut, mempunyai noduleruas yang besar tempat keluarnya akar. Tumbuhmemanjat dan bersandar pada batang pohon lain. Tinggi dapat mencapai ‹ m Ž 2‹

m. aun tebal, tumbuh berseling, bertangkai, daun berbentuk jantung dengan

ujung daun meruncing, tepi rata. Lebar #,‹ cm Ž 2$ cm, panjang ‹ cm Ž 2% cm,

mengeluarkan bau aromatik bila diremas. unga tersusun dalam bentuk bulir,

merunduk, panjang ‹ Ž 2‹ cm, sendiri Ž sendiri di ujung cabang dan ketiak daun.

uahnya buah buni, bulat, berdaging, berwarna kuning hijau, menyambung

menjadi bulat panjang. iji berbentuk bulat !ijayakusuma,233#&.

*. Nama aerah

Sumatera, 6uru kuwe, purokuwo !…nggano&, ranub !5ceh&, blo, sereh

!ƒayo&, blo !5las&, belo !atak 4aro&, demban !atak Toba&. urangir !5ngkola,

andailing&, ifan, tafuo !Simalur&, afo, lahina, tawuo !Nias&, cabai !entawai&,

ibun, serasa, seweh !Lubu&, Sireh, sirieh, sirih, suruh !'alembang, inangkabau&,


9/56

canbai !Lampung&. "awa, Seureuh !Sunda&, sedah, suruh !"awa&, sere !adura&.

ali, ase, sedah. Nusa Tenggara, Nahi !ima&, kuta !Sumba&, mota !6lores&,

orengi !…nde&, taa !Sikka&, malu !Solor&, mokeh !5lor&. 4alimantan, Šwit

!ayak&, uyu !ulungan&, uduh sifat !4enya&, sirih !Sampit&, uruesipa !Seputan&.

Sulawesi, ganjang, gapura !ugis&, baulu !are&, buya, dondili !uol&, bolu

!'arigi&, komba !Selayar&, lalama, sangi !Talaud&. aluku, 5ni-ani !1ok&, papek,

raunge, rambika !5lfuru&, nein !onfia&, 4akina !aru&, kamu !'iru, Sapalewa&,

amu !ˆumakai, …lpaputi, 5mbon, Šlias&, garmo !uru&, bido !acan&. Irian,ˆeman !endebi&, manaw !akimi&, namuera !Saberi&, etouwon !5rmahi&, nai

wadok !Sarmi&, mera !Sewan&, mirtan !erik&, afo !Sentani&, wangi !Sawa&,

freedor !5wija&, dedami !arind& !ijayakusuma, 233#&.

+. 4hasiat Tumbuhan

aun ƒanjeng untuk pemakaian dalam berguna untuk mengobati batuk,

bronkitis, gangguan lambung ! gastritis&, rematik, bengkak-bengkak,menghilangkan bau badan, dan keputihan !leucorrhoe&. Sedangkan untuk

pemakaian luar daun ganjeng berguna untuk mengobati ec(ema, luka bakar,

koreng ! Pyodermi&, kurap kaki, bisul, mimisan, perdarahan gusi, mengurangi

produksi 5SI !5ir Susu Ibu&, dan menghilangkan gatal !ijayakusuma, 233#&.

‹. 4andungan 4imia

aun ƒanjeng mempunyai kandungan kimia minyak atsiri 2 Œ - ‡,# Œ,

hidroksika„icol, ka„icol ,# Œ - 2+, Œ, ka„ibetol #, Œ - +,# Œ, allypyrokatekol

$ Œ - 3,+ Œ, kar„akrol #,# Œ - ‹,+Œ, eugenol #+,+ Œ -‡#,‹ Œ, eugenol methyil

eter ‡,# Œ - 2‹,% Œ, p-cymene 2,# Œ - #,‹ Œ, cineole #,‡ Œ - ‡,% Œ,

caryophyllene ‰,$ Œ - 3,% Œ, cadinene #,‡ Œ -2‹,% Œ, estragol, terpenena,

seskuiterpena, fenil propane, tannin, diastase $,% Œ - 2,% Œ, gula, pati

!ijayakusuma, 233#&.


10/56

B. Uraian Bahan

2. 5/uadest !irjen '7, 233&

Nama resmi : 58Š5 …STILL5T5

Nama lain : 5/uadest, air suling.

ûmus molekul : 1#7

ûmus struktur :

erat molekul : 2%,$#'emerian : airan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak

mempunyai rasa.

'enyimpanan : alam wadah tertutup baik.

4egunaan : Sebagai pelarut.

#. …til 5setat !ôwe, #$$3&

Nama resmi : …T10L 5…T5T… Nama lain : 5cetic acid ethyl ester, acetic ester, acetic ether,

aceto‘yethane, etil etanoat, etil asetat.

ûmus molekul : ‡1%7#

ûmus struktur :

erat molekul : %%,2

'emerian : airan jernih, tidak berwarna, mudah menguap

dengan aroma seperti buah, harum, mudah

terbakar.

4elarutan : Larut dalam 2$ bagian air pada suhu #‹’, etil

asetat lebih larut dalam air pada suhu yang lebih

rendah dari pada suhu yang lebih tinggi. Larut


11/56

dalam aseton, kloroform, diklorometana, etanol

!3‹Œ&, dan eter, dan beberapa pelarut organik.

4egunaan : Sebagai eluen.

‰. etanol !Sweetman, #$$3&

Nama resmi : …T10L 5L717L

Nama lain : etanol, metanoli, methanol, methanolum

ûmus molekul : 1‰71

ûmus struktur :

erat molekul : ‰#,$‡

'emerian : airan tidak berwarna, jernih, mudah menguap,

cairan higroskopis, mudah bergerak, bau khas, rasa

panas, mudah terbakar.4elarutan : ercampur dengan air, membentuk cairan jernih

tidak berwarna, larut dengan diklorometana,

dengan alkohol, dengan eter, dengan ben(ena, dan

dengan sebagian besar pelarut organik lainnya.

'enyimpanan : alam wadah tertutup rapat, jauh dari panas,

percikan dan nyala api terbuka.


‡. 4loroform !irjen '7, 233‹&

Nama resmi : 1L7ˆ767ˆŠ

Nama lain : 4loroform, Triklorometana “+-++-‰”

ûmus molekul : 1l‰

ûmus struktur :


12/56

erat molekul : 223,‰%

'emerian : airan jernih, tidak berwarna, mudah mengalir,

mempunyai sifat khas, bau eter, rasa manis dan

membakar, mendidih pada suhu lebih kurang +2’

dipengaruhi oleh cahaya.

4elarutan : Sukar larut dalam air, dapat bercampur denganetanol, dengan eter, dengan ben(ena, dengan

heksana, dan dengan lemah dan minyak menguap.


'enyimpanan : alam wadah tertutup rapat, terlindung dari

cahaya, pada suhu tidak lebih dari ‰$’.

‹. Nal !irjen '7, 233‹& Nama resmi : N5TÎI 1L7ÎŠ

Nama lain : Natrium klorida

ûmus molekul : Nal

ûmus struktur : Na Ž l

erat molekul : ‡‹%,‡‡

'emerian : 1ablur bentuk kubus, tidak berwarna atau serbuk

hablur putih, rasa asin.

4elarutan : udah larut dalam air, sedikit lebih mudah larut

dalam air mendidih, larut dalam gliserin, sukar

larut dalam etanol.

4egunaan : Sebagai medium perkembang biakan lar„a udang.

'enyimpanan : alam wadah tertutup baik.


13/56

+. N-1eksan !Sweetman, #$$3&

Nama resmi : nŽ1…)5N…

Nama lain : n-1eksane

ûmus molekul : +12‡

ûmus struktur :

erat molekul : %+,2%'emerian : airan jernih, tidak berwarna, mudah terbakar,

mudah menguap dengan bau samar.

'enyimpanan : alam wadah kedap udara.

4egunaan : Sebagai pelarut dan eluen.

. âgi !irjen '7, 233‹&

Nama resmi : …kstrak ragiSinonim : Sari ragi

'emerian : 4uning kemerahan sampai coklat, bau khas tidak

busuk.

4elarutan : Larut dalam air, membentuk larutan kuning sampai

coklat, bereaksi asam lemah.

'enympanan : alam wadah tertutup baik.

4egunaan : Sebagai pakan lar„a &rthemia salina Leach.

C. Uraian Lara

1. 4lasifikasi !udjiman, 233%&

6ilum : 5rthopoda

i„isio : rustaceae

Subdi„isio : ranchiopoda


14/56

7rdo : 5nostraca

6amili : 5rtemiidae

ƒenus : 5rtemia

Species : &rtemia salina Leach.

#. orfologi !udjiman, 233%&

Šdang ! &rtemia salina Leach& mengalami beberapa fase hidup, tetapi

secara jelas dapat dilihat dalam tiga bentuk yang sangat berlainan, yaitu bentuk

telur, lar„a !nauplii& dan artemia dewasa. Telur yang baru dipanen dari alam berbentuk bulat dengan ukuran $,#-$,‰ mm. Telur yang menetas akan berubah

menjadi lar„a. Telur yang baru menetas ini berukuran kurang lebih ‰$$ . alam

pertumbuhannya lar„a mengalami 2‹ kali perubahan bentuk yang merupakan satu

tingkatan hidup, setelah itu berubah menjadi artemia dewasa.

aktu yang diperlukan sampai menjadi artemia dewasa umumnya sekitar

# minggu. erbentuk silinder dengan panjang 2#-2‹ mm. Tubuh terbagi atasl bagian kepala, dada dan perut. 'ada bagian kepala terdapat # tangkai mata, #

antena dan dua antenula. ada terbagi atas 2# segmen yang masing-masing

mempunyai sepasang kaki renang. 'erut ternagi atas % segmen. apat hidup

dalam air dengan suhu #‹o-‰$o dan p1 sekitar %-3.

‰. Šraian Tentang Lar„a !udjiman, 233%&

Telur-telur yang kering direndam dalam air laut yang bersuhu #‹o akan

menetas dalam waktu #‡-‰+ jam. ari dalam cangkangnya keluarlah burayak

!lar„a& yang juga dikenal dengan istilah nauplius. alam perkembangan

selanjutnya, burayak akan mengalami 2‹ kali perubahan bentuk !metamorfosis&.

urayak tingkat I dinamakan instar, tingkat II instar II, tingkat III Instar III,

demikian seterusnya sampai instar )*. Setelah itu berubahlah mereka menjadi

artemia dewasa. urayak yang baru saja menetas masih dalam tingkat instar I


15/56

bentuknya bulat lonjong dengan panjang sekitar ‡$$ mikron !$,‡ mm& dan

beratnya 2‹ mikrogram. arnanya kemerah-merahan karena masih banyak

mengandung makanan cadangan. 7leh karena itu, mereka masih belum perlu

makanan. 5nggota badannya terdiri dari sungut kecil antenula atau antena I dan

sepasang sungut besar !antena II&. i bagian depan di antara kedua sungut

kecilnya terdapat bintik merah yang tidak lain adalah mata naupliusnya !oselus&.

i belakang sungut besar terdapat sepasang mandibula !rahang& dan rudimenter

kecil. Sedangkan di bagian perut !„entral& sebelah depan terdapatlah labrum. 'ada pangkal sungut besar !antena II& terdapat bangunan seperti duri yang menghadap

ke belakang !gnotobasen seta& bangunan ini merupakan cirri khusus untuk

membedakan burayak instar I, instar II dan instar III. 'ada burayak instar I !baru

menetas& gnotobasen setanya masih belum berbulu dan juga belum bercabang.

Sekitar #‡ jam setelah menetas, burayak akan berubah menjadi instar II.

Lebih lama lagi akan berubah menjadi instar III. 'ada tingkatan II, gnotobasensetanya sudah berbulu tapi masih belum bercabang. Sedangkan pada instar III,

selain berbulu gnotobasen seta tersebut sudah bercabang II.

'ada tingkatan instar II, burayak mulai mempunyai mulut, saluran

pencernaan dan dubur. 7leh karena itu, mereka mulai mencari makan, bersamaan

dengan itu, cadangan makanannya juga sudah mulai habis. 'engumpulan

makanannya dengan cara menggerak-gerakkan antena II-nya. Selain itu untuk

mengumpulkan makanan antena II juga berfungsi untuk bergerak. Tubuh instar II

dan instar III sudah lebih panjang dari instar I.

'ada tingkatan selanjutnya, di sebelah kanan dan kiri mata nauplius mulai

terbentuk sepasang mata majemuk. ula-mula masih belum bertangkai.

4emudian secara berangsur-angsur berubah menjadi bertangkai. Selain itu, di

bagian samping badannya !kanan dan kiri& juga berangsur-angsur tumbuh tunas


16/56

kakinya !torakopada&. ula-mula tumbuh di bagian depan kemudian berturut-

turut disusul oleh bagian-bagian yang lebih ke belakang. Setelah menjadi instar

)*, kakinya sudah lengkap sebanyak 22 pasang, maka berakhirlah masa burayak,

dan berubah menjadi artemia dewasa.

D. Preparasi Sampel

Simplisia adalah bahan alami yang digunakan untuk obat dan belum

mengalami perubahan proses apapun, dan kecuali dinyatakan lain umumnya

berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia tumbuhan obat merupakan bahan baku proses pembuatan ekstrak, baik sebagai bahan obat atau produk.

erdasarkan hal tersebut maka simplisia dibagi menjadi tiga golongan yaitu

simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan mineral.

2. Simplisia Nabati

Simplisia nabati adalah simplisia berupa tanaman utuh, bagian tanaman

dan eksudat tanaman. …ksudat tanaman adalah isi sel yang secara spontankeluar dari tanaman atau isi sel dikeluarkan dari selnya dengan cara

tertentu atau (at yang dipisahkan dari tanaman dengan cara tertentu yang masih

belum berupa (at kimia murni.

#. Simplisia 1ewani

Simplisia hewani adalah simplisia hewan utuh, bagian hewan, atau

belum berupa (at kimia murni.

‰. Simplisia ineral

Simplisia mineral adalah simplisia berasal dari bumi, baik telah diolah

atau belum, tidak berupa (at kimia murni.

'roses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk

simplisia kering !penyerbukan&. ari simplisia dibuat serbuk simplisia

dengan perakatan tertentu sampai derajat kehalusan tertentu. 'roses ini dapat


17/56

mempengaruhi mutu ekstrak dengan dasar beberapa hal yaitu makin halus serbuk

simplisia proses ekstraksi makin efektif, efisien namun makin halus serbuk maka

makin rumit secara teknologi peralatan untuk tahap filtrasi !ƒunawan, #$$‡&.

Šntuk menghasilkan simplisia yang bermutu dan terhindar dari

cemaran industri obat tradisional dalam menggelola simplisia sebagai bahan

baku pada umumnya melakukan tahapan kegiatan berikut ini:

2. Sortasi asah

Sortasi basah dilakukan untuk memisahkan kotoran-kotoran atau bahanbahan asing lainnya dari bahan simplisia. isalnya simplisia yang dibuat

dari akar suatu tanaman obat, bahan-bahan asing seperti tanah, kerikil,

rumput, batang, daun, akar yang telah rusak, serta pengotoran lainnya harus

dibuang.

Tanah yang mengandung bermacam-macam mikroba dalam jumlah

yang tinggi. 7leh karena itu pembersihan simplisia dari tanah yang terikutdapat mengurangi jumlah mikroba awal.

#. 'encucian

'encucian dilakukan untuk menghilangkan tanah dan pengotor lainnya

yang melekat pada bahan simplisia. 'encucian dilakukan dengan air bersih,

misalnya air dari mata air, air sumur dari '5. ahan simplisia yang

mengandung (at yang mudah larut dalam air yang mengalir, pencucian

hendaknya dilakukan dalam waktu yang sesingkat mungkin.

‰. 'erajangan

eberapa jenis bahan simplisa perlu mengalami perajangan bahan

simplisia dilakukan untuk memperoleh proses pengeringan, pengepakan, dan

penggilingan. Semakin tipis bahan yang akan dikeringkan maka semakin cepat

penguapan air, sehingga mempercepat waktu pengeringan. 5kan tetapi irisan


18/56

yang terlalu tipis juga dapat menyebabkan berkurangnyahilangnya (at

berkhasiat yang mudah menguap, sehingga mempengaruhi komposisi, bau, dan

rasa yang diinginkan.

‡. 'engeringan

Tujuannya yaitu untuk mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak,

sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. engan mengurangi

kadar air dan menghentikan reaksi en(imatik akan dicegah penurunann mutu atau

perusakan simplisia. 5ir yang masih tersisa dalam simplisia pada kadar tertentu dapat merupakan media pertumbuhan kapang dan jasad renik lainnya.

‹. Sortasi 4ering

Sortasi setelah pengeringan sebenarnya merupakan tahap akhir

pembuatan simplisia. Tujuan sortasi adalah untuk memisahkan benda-benda

asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan dan pengotor-

pengotor lainnya yang masih ada dan tertinggal pada simplisia kering. 'adasimplisia bentuk rimpang, sering jumlah akar yang melekat pada rimpang

terlalu besar dan harus dibuang. emikian pula adanya partikel-partikel pasir,

besi, dan benda-benda tanah lain yang tertinggal harus dibuang sebelum

simplisia dibungkus.

'roses pengeringan sudah dapat menghentikan proses en(imatik dalam sel

bila kadar airnya dapat mencapai kurang dari 2$Œ. 1al-hal yang perlu

diperhatikan selama proses pengeringan adalah suhu pengeringan, kelembaban

udara, aliran udara, waktu pengeringan, dan luas permukaan bahan !Isti/omah,

#$2‰&.

E. !kstraksi

ˆagam ekstraksi yang tepat sudah tentu bergantung pada tekstur dan

kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang


19/56

diisolasi. Šmumnya kita perlu –membunuh9 jaringan tumbuhan untuk mencegah

terjadinya oksidasi en(im atau hidrolisis !1arborne, 23%&.

etode …kstraksi yang umum dilakukan antara lain:

2. ara ingin

…kstraksi cara dingin memiliki keuntungan dalam proses ekstraksi total,

yaitu memperkecil kemungkinan terjadinya kerusakan pada senyawa termolabil

yang terdapat pada sampel. Sebagian besar senyawa dapat terekstraksi dengan

ekstraksi cara dingin, walaupun ada beberapa senyawa yang memilikiketerbatasan kelarutan terhadap pelarut pada suhu ruangan. Terdapat sejumlah

metode ekstraksi, yang paling sederhana adalah ekstraksi dingin !dalam labu

besar berisi biomasa yang diagitasi menggunakan stirer&, dengan cara ini

bahan kering hasil gilingan diekstraksi pada suhu kamar secara berturut-turut

dengan pelarut yang kepolarannya makin tinggi. 4euntungan cara ini

merupakan metode ekstraksi yang mudah karena ekstrak tidak dipanaskansehingga kemungkinan kecil bahan alam menjadi terurai.

'enggunaan pelarut dengan peningkatan kepolaran bahan alam secara

berurutan memungkinkan pemisahan bahan-bahan alam bedasarkan kelarutannya

dan polaritasnya dalam pelarut ekstraksi. 1al ini sangat mempermudah proses

isolasi. …kstraksi dingin memungkinkan banyak senyawa terekstraksi,

meskipun beberapa senyawa memiliki pelarut ekstraksi pada suhu kamar.

a. aserasi

aserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan !kamar&. aserasi bertujuan untuk menarik (at-(at berkhasiat yang

tahan pemanasan maupun yang tidak tahan pemanasan. Secara teknologi

maserasi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi


20/56

pada keseimbangan. aserasi dilakukan dengan beberapa kali pengocokan atau

pengadukan pada temperatur ruangan atau kamar !Isti/omah, #$2‰&.

aserasi berasal dari bahasa latin acerace berarti mengairi dan

melunakan. aserasi merupakan cara ekstraksi yang paling sederhana. asar

dari maserasi adalah melarutnya bahan kandungan simplisia dari sel yang

rusak, yang terbentuk pada saat penghalusan, ekstraksi !difusi& bahan

kandungan dari sel yang masih utuh. Setelah selesai waktu maserasi, artinya

keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel denganmasuk ke dalam cairan, telah tercapai maka proses difusi segera berakhir.

Selama maserasi atau proses perendaman, dilakukan pengocokan berulang-

ulang. Špaya ini menjamin keseimbangan konsentrasi bahan ekstraksi yang

lebih cepat di dalam cairan. Sedangkan keadaan diam selama maserasi

menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Secara teoritis pada suatu

maserasi tidak memungkinkan terjadinya ekstraksi absolut. Semakin besar perbandingan simplisia terhadap cairan pengekstraksi, akan semakin banyak

hasil yang diperoleh !Isti/omah, #$2‰&.

4erugiannya adalah pengerjaannya lama dan penyarian kurang

sempurna. Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode

pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. aserasi kinetik berarti

dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan

maserat pertama, dan seterusnya !Isti/omah, #$2‰&.

b. 'erkolasi

'erkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru dan sempurna

! hausti/a etraction& yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan.

'rinsip perkolasi adalah dengan menempatkan serbuk simplisia pada suatu

bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. 'roses terdiri


21/56

dari tahap pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi

sebenarnya !penetesanpenampungan ekstrak&, terus menerus sampai diperoleh

ekstrak !perkolat& yang jumlahnya 2-‹ kali bahan !Isti/omah, #$2‰&.

#. ara 'anas

a. ˆefluks

ˆefluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik

didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan

dengan adanya pendingin balik. Šmumnya dilakukan penggulangan proses pada residu pertama sampai ‰-‹ kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi

sempurna !Isti/omah, #$2‰&.

b. Sokhletasi

Sokhletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru

yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi

kontinu dengan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. iomasa ditempatkan dalam dalam wadah soklet yang dibuat dengan

kertas saring, melalui alat ini pelarut akan terus direfluks. 5lat soklet akan

mengkosongkan isinya ke dalam labu dasar bulat setelah pelarut mencapai

kadar tertentu. Setelah pelarut segar melawati alat ini melalui pendingin refluks,

ekstraksi berlangsung sangat efisien dan senyawa dari biomasa secara efektif

ditarik ke dalam pelarut karena konsentrasi awalnya rendah dalam pelarut

!Isti/omah, #$2‰&.

c. igesti

igesti adalah maserasi kinetik !dengan pengadukan kontinu& pada

temperatur ruangan !kamar&, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur

‡$-‹$ o !Isti/omah, #$2‰&.

d. Infus


22/56

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

!bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 3+-3%o selama waktu tertentu !2‹-#$ menit& !Isti/omah, #$2‰&.

e. ekok

ekok adalah infus pada waktu yang lebih lama !suhu lebih dari ‰$ o&

dan temperatur sampai titik didih air !Isti/omah, #$2‰&.

f. estilasi Šap

estilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan menguap !minyak atsiri& dari bahan !segar atau simplisia& dengan uap air bedasarkan peristiwa

tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel secara

kontinu sampai sempurna diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran

!senyawa kandungan menguap ikut tersdestilasi& menjadi destilat air bersama

senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian. estilasi

uap, bahan simplisia benar-benar tidak tercelup ke air yang mendidih,namun dilewati uap air sehingga senyawa kandungan menguap ikut

terdestilasi. estilasi uap dan air, bahan !simplisia& bercampur sempurna

atau sebagian dengan air mendidih, senyawa kandungan menguap tetap

kontinu ikut terdestilasi !Isti/omah, #$2‰&.

. Partisi

'artisi merupakan mekanisme pemisahan utama dalam kromatografi.

alam praktek, seringkali pemisahan disebabkan oleh suatu kombinasi efek

adsorbs dan partisi !irjen '7, 23%+&.

'ada ekstraksi cair-cair, satu komponen bahan atau lebih dari suatu

campuran dipisahkan dengan bantuan pelarut. …kstraksi cair-cair terutama

digunakan, bila pemisahan campuran dengan cara destilasi tidak mungkin

dilakukan !misalnya karena pembentukan a(eotrop atau karena kepekaannya


23/56

terhadap panas& atau tidak ekonomis. Seperti ekstraksi padat-cair, ekstraksi cair-

cair selalu terdiri dari sedikitnya dua tahap, yaitu pencampuran secara intensif

bahan ekstraksi dengan pelarut dan pemisahan kedua fase cair itu sesempurna

mungkin !Sumarnie, #$$‹&.

…kstraksi cair-cair !li0uid etraction, sol/ent etraction&, solut dipisahkan

dari cairan pembawa !diluen& menggunakan sol„en cair. ampuran diluen dan

sol„en ini adalah heterogen !immiscible, tidak saling campur&, jika dipisahkan

terdapat # fase, yaitu fase diluen !rafinat& dan fase sol„en !ekstrak&. 'erbedaankonsentrasi solute di dalam suatu fasa dengan konsentrasi pada keadaan

setimbang merupakan pendorong terjadinya pelarutan !pelepasan& solute dari

larutanyang ada. ƒaya dorong !dri/ing 1orce& yang menyebabkan terjadinya

proses ekstraksi dapat ditentukan dengan mengukur jarak sistem dari kondisi

setimbang !1arborne, 23%&.

'ada ekstraksi cair-cair, satu komponen bahan atau lebih dari suatucampuran dipisahkan dengan bantuan pelarut. 'roses ini digunakan secara teknis

dalam skala besar misalnya untuk memperoleh „itamin, antibiotika, bahan-bahan

penyedap, produk-produk minyak bumi dan garam-garam. logam. 'roses ini pun

digunakan untuk membersihkan air limbah dan larutan ekstrak hasil ekstraksi

padat cair. …kstraksi cair-cair terutama digunakan, bila pemisahan campuran

dengan cara destilasi tidak mungkin dilakukan !misalnya karena pembentukan

aseotrop atau karena kepekaannya terhadap panas& atau tidak ekonomis. Seperti

halnya pada proses ekstraksi padat-cair, ekstraksi cair-cair selalu terdiri atas

sedikitnya dua tahap, yaitu pencampuran secara intensif bahan ekstraksi dengan

pelarut, dan pemisahan kedua fase cair itu sesempurna mungkin !1arborne, 23%&.

Šntuk mencapai proses ekstraksi cair-cair yang baik, pelarut yang

digunakan harus memenuhi kriteria sebagai berikut !1arborne, 23%& :


24/56

2. 4emampuan tinggi melarutkan komponen (at terlarut di dalam campuran.

#. 4emampuan tinggi untuk diambil kembali.

‰. 'erbedaan berat jenis antara ekstrak dan rafinat lebih besar.

‡. 'elarut dan larutan yang akan diekstraksi harus tidak mudah campur.

‹. Tidak mudah bereaksi dengan (at yang akan diekstraksi.

+. Tidak merusak alat secara korosi.

. Tidak mudah terbakar, tidak beracun dan harganya relatif murah.

!. "romatogra#i Lapis Tipis

4romatografi didefinisikan sebagai prosedur pemisahan (at terlarut

oleh suatu proses migrasi diferensial dinamis dalam sistem yang terdiri dari dua

fase, salah satu diantaranya bergerak secara berkesinambungan dengan arah

tertentu dan didalamnya (at-(at itu menunjukkan perbedaan mobilitas disebabkan

adanya perbedaan dalam absorbsi, partisi, kelarutan, tekanan uap, ukuran

molekul atau kerapatan muatan ion. engan demikian masing-masing (atdapat diidentifikasi atau ditetapkan dengan metode analitik !ƒandjar, #$$&.

'ada kromatografi lapis tipis !4LT&, (at penjerap merupakan lapisan tipis

serbuk halus yang dilapiskan pada lempeng kaca, plastik atau logam secara

merata, umumnya digunakan lempeng kaca. Lempeng yang dilapisi dapat

dianggap sebagai kolom kromatografi terbuka dan pemisahan yang tercapai dapat

didasarkan pada adsorpsi, partisi, atau kombinasi kedua efek, yang tergantung dari

jenis lempeng, cara pembuatan, dan jenis pelarut yang digunakan 4LT dengan

lapis tipis penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. 'erkiraan

identifikasi diperoleh dengan pengamatan bercak dengan harga ˆf yang identik

dan ukuran yang hampir sama, dengan menotolkan bahan uji dan pembanding

pada lempeng yang sama !1ostettmann, 233‹&.


25/56

4romatografi merupakan metode pemisahan yang cepat, dan mudah

dilakukan hanya membutuhkan penyerap dan jumlah cuplikan yang sangat sedikit

dan dapat diperoleh pemisahan yang lebih baik !1ostettmann, 233‹&.

2. 6ase iam

6ase diam yang digunakan dalam 4LT mirip dengan penyerap untuk

kromatografi kolom, lapisan penyerap dan homogenitas penyerap sangat

berpengaruh dalam proses pemisahan, sebab daya lekat pada pendukung sangat

tergantung oleh kedua sifat tersebut. esar partikel yang biasa digunakan adalah2-#‹ mikron. 'artikel yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil

yang memuaskan, oleh karena itu salah satu cara untuk menaikan ha sil pemisahan

adalah menggunakan penyerap dengan butiran yang halus !Stahl, 23%‹&.

#. 6ase ƒerak

6ase gerak adalah medium angkut yang terdiri atas satu atau beberapa

pelarut. 6ase ini bergerak di dalam fase diam karena adanya gaya kapiler. "ikasebagai fase gerak digunakan sistem pelarut campuran, sebaiknya menggunakan

campuran pelarut organik yang mempunyai polaritas serendah mungkin. Salah

satu alasan dari pada penggunaan itu adalah mengurangkan serapan dari setiap

komponen dari campuran pelarut !4artikasari, #$$%&.

$. Brine Shrimp Lethalit% Test "BSLT#

etode (rine %hrimp Lethality )est !SLT& merupakan salah satu metode

untuk skrining atau penapisan akti„itas farmakologis pada tanaman obat dan

men-deteksi toksisitas ekstrak tanaman. etode ini bersifat sederhana, mudah

dilakukan, murah, cepat, akurat dan membutuhkan ekstrak dalam jumah sedikit

!"uniarti, #$2‰&.


26/56

Šji SLT dilakukan untuk melihat efek toksisitas terhadap sel dan sering

digunakan untuk skrining senyawa bioaktif antikanker. etode SLT dilakukan

dengan mengamati tingkat kematian !mortalitas& yang ditimbulkan oleh ekstrak

terhadap lar„a udang jenis &rtemia salina setelah dilakukan pengujian selama #‡

jam. 1asil yang diperoleh dihitung sebagai nilai L‹$ ! Letha2 Concentration&

ekstrak uji, yaitu jumlah dosis atau konsentrasi ekstrak uji yang dapat

menyebabkan kematian lar„a udang sejumlah ‹$Œ setelah masa inkubasi #‡ jam.

Suatu ekstrak dinyatakan aktif dan bersifat toksik jika dapat menyebabkankematian ‹$Œ hewan uji pada konsentrasi kurang dari 2$$$ ppm dan bersifat

tidak toksik jika ditemukan pada konsentrasi lebih dari 2$$$ ppm !"uniarti,

#$2‰&.

'emikiran bahwa efek farmakologi adalah toksikologi sederhana pada

dosis yang rendah dan sebagian besar senyawa anti tumor adalah sitotoksik, maka

digunakan — (rine %hrimp Lethality )est ̃ . 5kan tetapi, pengujian letalitas yangsederhana tidak spesifik untuk anti tumor, tetapi merupakan indikator

sitotoksisitas yang baik dengan pengujian anti tumor lainnya, seperti uji leukemia

tikus. 'rosedur ini menentukan nilai L‹$ dalam gml dari ekstrak dan senyawa

aktif dalam medium air asin. 5kti„itas yang luas dari senyawa aktif yang

diketahui dianggap terhadap udang, akan tetapi prosedur yang sederhana, biaya

yang rendah, dan korelasinya terhadap pengujian sitotoksitas dan pengujian

antitumor membuat pengujian ini sebagai uji pendahuluan untuk akti„itas anti

tumor yang sesuai dan dapat dilakukan secara rutin di laboratorium dengan

fasilitas sederhana !"uniarti, #$2‰&.

I. &raksinasi

ila kita menelaah profil fitokimia lengkap dari suatu jenis tumbuhan,

maka sebelum dikromatografi, ekstrak kasar perlu difraksinasi untuk memisahkan


27/56

golongan utama kandungan yang satu dari golongan utama lainnya. "umlah dan

jenis senyawa yang dapat dipisahkan menjadi fraksi yang berbeda sudah tentu

berbeda, bergantung pada jenis tumbuhan. Selain itu, prosedur tersebut harus

dimodifikasi bila kita menelaah senyawa labil !1arborne, 23%&.

2. 4romatografi 4olom

4romatografi kolom adalah metode kromatografi klasik yang sampai saat

ini penggunaannya masih banyak dilakukan. 4romatografi kolom digunakan

untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah yang banyak. 'rinsip darikromatografi kolom adalah adsorpsi dan partisi !5nonim, #$2+&.

'ada kromatografi kolom, campuran yang akan dipisahkan diletakkan

berupa pita pada bagian atas kolom, penjerap yang berada dalam tabung kaca,

tabung logam, atau bahkan tabung plastik. 'elarut !fase gerak& dibiarkan mengalir

melalui kolom karena aliran yang disebabkan oleh gaya berat atau didorong

dengan tekanan. 'ita senyawa linarut bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda, memisah, dan dikumpulkan berupa fraksi ketika keluar dari atas kolom.

etode ini merupakan contoh kromatografi elusi karena linarut dielusi dari kolom

!5nonim, #$2+&.

Šntuk kromaografi kolom dari larutan dibutuhkan tabung pemisah tertentu

yang diisi dengan bahan sorpsi dan juga pelarut pengembang yang berbeda.

Tabung pemisah yang diisi dengan bahan sorpsi disebut kolom pemisah.

Tergantung dari masalah pemisahan, dapat digunakan tabung filter dengan gelas

berpori, yang pada ujung bawah menyempit !tabung 5llihn& atau tabung gelas

yang pada bagian bawah menyempit dan dilengkapi dengan kran. Silika gel dapat

diisi kering dalam tabung pemisah. 5gar pengisian rata, tabung setelah diisi

diketuk-ketuk atau dijatuhkan lemah pada plat kayu !5nonim, #$2+&.

#. 4romatografi air *akum


28/56

4romatografi air *akum adalah bentuk kromatografi kolom yang

khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat terhadap suatu ekstrak.

4olom dapat berupa kolom dengan adsorben grade 4LT normal atau fase terbalik

ini relatif bermutu dan fase gerak terhisap dengan adanya penurunan tekanan.

6raksi biasanya dikoleksi dengan alikuot eluen dengan satu kepolaran. 5likuot

eluen selanjutnya dapat dirancang untuk menghasilkan elusi gradien bertahap

!ƒandjar, #$$&.

4romatografi kolom dikemas kering dalam keadaan „akum agar diperolehkerapatan kemasan maksimum. *akum dihentikan, pelarut yang kepolarannya

rendah dituangkan ke permukaan penjerap lalu di„akumkan lagi, dan siap dipakai.

uplikan dilarutkan dalam pelarut yang cocok, dimasukkan langsung pada bagian

atas kolom atau pada lapisan penjerap dan dihisap perlahan-lahan pelarut yang

cocok, kolom dihisap sampai kering pada setiap pengumpulan fraksi !5nonim,

#$2+&.'rinsip kromatografi cair „akum adalah merupakan pemisahan secara

adsorpsi dan partisi yang dipercepat dengan bantuan pompa „akum. 4romatografi

dikemas kering dalam keadaan „akum agar diperoleh kemasan rapat yang

maksimal, pelarut yang kepolaranya rendah dituangkan ke permukaan penjerap

lalu di„akum kembali. 4olom diisap sampai kering dan siap dipakai. uplikan

dilarutkan dalam pelarut yang sesuai, mulai yang kepolarannya rendah lalu

kepolarannya diitngkatkan perlahan-lahan !5nonim, #$2+&.

'. "romatogra#i Lapis Tipis Preparati#

ara pembuatan lempeng kaca. 'lat kaca harus dibersihkan hati-hati

dengan aseton untuk menghilangkan lemak. 4emudian bubur silka gel !atau

penjerap lain& dalam air harus dikocok kua-kuat selama jangka waktu tertentu

!misalnya 3$ detik& sebelum penyaputan. Tergantung pada ukuran partikel-


29/56

partikel penjerap, mungkin harus ditambahkan kalsium sulfat hemihidrat !2‹Œ&

untuk membantu melekatkan penjerap pada plat kaca. 5khirnya, setelah

penyaputan, pelat harus dikeringkan pada suhu kamar dan kemudian diaktifkan

dengan pemanasan dalam tanur pada suhu 2$$ o-22$ o selama ‰$ menit. 'ada

beberapa pemisahan biasanya akan menguntungkan bila sifat penjerap diubah

dengan menambahkan garam anorganik !misalnya perak nitrat untuk 4LT

pemerakan&, dan hal ini penting baik dikerjakan pelat yang disaput sendiri di

laboratorium ialah karena kadar air silika gel dapat dikendalikan. 1al inimerupakan faktor yang kritis untuk beberapa pemisahan !1arborne, 23%&.

4LT preparatif dilakukan dengan menggunakan lapisan tebal !sampai 2

mm& sebagai pengganti lapisan penjerap yang ipis !$.2$-$,# mm&, pelat preparatif

yang dibua oleh pabrik dapat dibeli. 4andungan yang sudah dipisah dapat

diperoleh kembali dengan cara mengerok penjerap di tempat yang sesuai pada

pelat yang telah dikembangkan, lalu serbuk dielusi dengan pelarut seperti eter, danakhirnya dipusingkan untuk menghilangkan penjerap !1arborne, 23%&.

emikian kuatnya lapisan penjerap melekat pada kaca sehingga

memungkinkan pengembangan plat berulang-ulang dengan pengembang yang

sama atau beberapa pengembang yang berbeda, dengan mengeringkan pelat

sebelum pengembangan berikutnya. 'ilihan lain ialah sistem 4LT multieliminasi

yang dirancang oleh *an Sumere !23+3&. 'ada cara ini, untuk pemisahan yang

rumit, plat kaca segiempat yang sudah disaput dengan penjerap dipotong pada

tahap yang tepat dengan pemotong kaca. 'enjerap baru disemprotkan merata pada

pelat, dilakukan di antara dua pengembangan !1arborne, 23%&.

". "LT Multi !luen dan (ua (imensi


30/56

ulti eluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang

memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang

berbeda !all, #$$‹&.

alam multi eluen, setelah pengembang tunggal menaik, kromatogram

diangkat dari chamber dan dikeringkan, biasanya selama ‹-2$ menit.

4romatogram tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar dari pelarut yang

sama dalam arah yang sama untuk jarak yang sama. 'roses ini, yang dapat diulang

berkali-kali, meningkatkan resolusi komponen dengan nilai ˆf bawah $,‹.eberapa pengembang dilakukan dengan pelarut yang berbeda dalam arah yang

sama, masing-masing yang menjalankan jarak yang sama atau berbeda, disebut

elusi bertahap. Sebuah fase kurang polar dapat digunakan pertama, diikuti oleh

fase yang lebih polar, atau sebaliknya. 'emindahan material nonpolar kebagian

atas lapisan, meninggalkan (at terlarut polar terganggu dari mana dia berasal.

Setelah kering, (at terlarut polar dipisahkan oleh pengembang dengan eluen!6ried, 2333&.

4euntungannya adalah kadang-kadang pelat 4LT tampaknya tidak cukup

lama untuk memberikan pemisahan yang diperlukan pada komponen sampel

!all, #$$‹&.

4LT dua arah atau dua dimensi ini bertujuan untuk meningkatkan resolusi

sampel ketika komponen-komponen solute mempunyai karakteristik kimia yang

hampir sama, karenanya nilai ˆf juga hampir sama sebagaimana dalam asam-

asam amino. Selain itu, dua sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat

digunakan secara berurutan sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan

analit yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda !ƒandjar, #$$&.

4romatografi planar adalah satu-satunya teknik kromatografi dimana

kromatografi dua dimensi dapat dilakukan. Ini merupakan alat pemisahan yang


31/56

baik dan cukup sering dilirik sebagai suatu prosedur untuk dilakukan. Sayangnya

kebanyakan pemisahan dua dimensi dahulunya telah melibatkan pemisahan

kurang lebih #$ jenis asam amino pada selulosa atau silika gel, dimana

prosedurnya memakan waktu seharian untuk dilakukan dan hanya satu sampel per

lempeng yang bisa di analisa dalam satu waktu. 1asilnya adalah suatu

kromatogram seperti cetakan jari, mengidentifikasi noda dengan

membandingkannya dengan standar sangat memakan waktu dan harus dilakukan

terpisah pada kondisi eluen yang sama. agaimanapun juga, suatu metode telahdikembangkan. ulunya asam amino telah dipisahkan dengan cara ini selama

berabad-abad !all, #$$‹&.

L. )denti#ikasi Sen%a*a

Šji fitokimia bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan senyawa

metabolit yang terdapat pada ekstrak. Terdapat berbagai kemungkinan untuk

deteksi senyawa berwarna pada kromatogram. eteksi paling sederhana adalah jika senyawa menunjukan penyerapan di daerah Š* lampu gelombang pendek

!#‹‡ nm& atau jika senyawa itu dapat dieksitasi ke flouroresensi radiasi Š*

gelombang pendek dan atau gelombang panjang !‰+‹ nm&. Identifikasi senyawa

dalam kromatogram biasanya dengan menggunakan harga ˆf yang didefinisikan

sebagai:

Rf =Jarak tempuhnoda

Jarak tempuheluen

1arga ˆf merupakan parameter karakteristik 4LT !Stahl, 23%‹&. 1arga ˆf

merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senyawa pada kromatografi dan pada

kondisi konstan merupakan besaran karakteristik reprodusibel.

6aktor- faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam 4LT dapat

mempengaruhi harga ̂ f, antara lain:


32/56

2. Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya

#. Tebal dan kerataan lapisan penyerap

‰. 'elarut fase gerak

‡. erajat kejenuhan

‹. "umlah cuplikan

+. Suhu dan kesetimbangan !4artikasari, #$$%&

"enis-jenis metabolit sekunder yaitu:

2. 5lkaloida5lkaloida merupakan golongan (at tumbuhan sekunder yang terbesar.

5lkaloida mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih

atom nitrogen, biasanya dalam gabungan sebagai bagian dari sistem siklik.

5lkaloida mempunyai akti„itas fisiologi yang menonjol sehingga digunakan

secara luas dalam bidang pengobatan !1arborne, 23%&.

#. 6la„onoida6la„onoida mencakup banyak pigmen yang paling umum dan terdapat

pada seluruh dunia tumbuhan mulai dari fungus sampai angiospermae. 'ada

tumbuhan tinggi, fla„onoida terdapat baik dalam bagian „egetatif maupun dalam

bunga. 'igmen bunga fla„onoida berperan jelas dalam menarik burung dan

serangga penyerbuk bunga. eberapa fungsi fla„onoida pada tumbuhan ialah

pengatur tumbuh, pengatur fotosintesis, kerja antimikroba dan anti„irus serta kerja

terhadap serangga !ˆobinson, 233‹&.

‰. Saponin

Saponin mula-mula diberi nama demikian karena sifatnya yang

menyerupai sabun !bahasa latin sapo berarti sabun&. Saponin tersebar luas diantara

tanaman tinggi. Saponin merupakan senyawa berasa pahit, menusuk,

menyebabkan bersin dan mengakibatkan iritasi terhadap selaput lendir. Saponin


33/56

adalah senyawa aktif permukaan yang kuat yang menimbulkan busa jika dikocok

!ƒunawan, #$$‡&.

alam larutan yang sangat encer saponin sangat beracun untuk ikan, dan

tumbuhan yang mengandung saponin telah digunakan sebagai racun ikan selama

beratus-ratus tahun !ˆobinson, 233‹&.

‡. Tanin

Tanin merupakan salah satu senyawa yang termasuk ke dalam golongan

polifenol yang terdapat dalam tumbuhan, yang mempunyai rasa sepat danmemiliki kemampuan menyamai kulit. Tanin terdapat luas dalam tumbuhan

berpembuluh, dalam angiospermae terdapat khusus dalam jaringan kayu.

Šmumnya tumbuhan yang mengandung tanin dihindari oleh pemakan tumbuhan

karena rasanya yang sepat. Salah satu fungsi tanin dalam tumbuhan adalah

sebagai penolak hewan pemakan tumbuhan !herbi„ora& !1arborne, 23%&.

‹. ƒlikosidaƒlikosida adalah senyawa yang terdiri atas gabungan gula dan bukan gula.

agian gula biasa disebut glikon sementara bagian bukan gula disebut aglikon

atau genin. 4lasifikasi !penggolongan& glikosida sangat sukar. ila ditinjau dari

gulanya, akan dijumpai gula yang strukturnya belum jelas. Sedangkan bila

ditinjau dari aglikonnya akan dijumpai hampir semua golongan konstituen

tumbuhan, misalnya tanin, sterol, terpenoid, dan fla„onoid. 1ampir semua

glikosida dapat dihidrolisis dengan pendidihan dengan asam mineral. 1idrolisis

dalam tumbuhan juga terjadi karena en(im yang terdapat dalam tumbuhan

tersebut. Nama en(imnya secara umum adalah beta glukosidase, sedangkan untuk

ramnosa nama en(imnya adalah ramnase !ƒunawan, #$$‡&.

+. SteroidTriterpenoid


34/56

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon ‰$ asiklik,

yaitu skualen. Triterpenoid adalah senyawa tanpa warna, berbentuk kristal, sering

kali bertitik leleh tinggi dan aktif optik. Šji yang banyak digunakan ialah reaksi

LiebermannŽurchard !asam asetat anhidridaŽ1#S7‡ pekat& yang kebanyakan

triterpena dan sterol memberikan warna hijau biru. Steroida adalah triterpena yang

kerangka dasarnya sistem cincin siklopentana perhidrofenantren. ahulu steroida

dianggap sebagai senyawa satwa tetapi sekarang ini makin banyak senyawasteroida yang ditemukan dalam jaringan tumbuhan !fitosterol&. 6itosterol

merupakan senyawa steroida yang berasal dari tumbuhan. Senyawa fitosterol yang

biasa terdapat pada tumbuhan tinggi yaitu sitosterol, stigmasterol, dan

kampesterol !1arborne, 23%&.


35/56

BAB III

MET$DE P%AKTIKUM

A. Alat dan Bahan

2. 5lat yang digunakan

5dapun alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu alat refluks, cawan

porselin, chamber, corong, corong pisah, gelas ukur, gelas kimia, gegep, kain

putih, labu alas bulat, lampu Š* ‰++ dan #‹‡ nm, lampu belajar, lempeng kaca

mangkok kaca, magnetic stirrer, pipet tetes, pipa kapiler, pensil, penggaris, pipet„olume, pinset, pompa „akum, o„en, rotary e„aporator, senter glass, sendok besi,

statif dan klem, tabung sentrifuge, timbangan, timbangan analitik, timbangan

ohaus, „ial.

#. ahan yang digunakan

5dapun bahan yang digunakan pada percobaan ini yaitu a/uadest,

aluminium foil, butanol, etil asetat, garam tidak beryodium, 1#S7‡, kertas saring,karet gelang, kapas, kloroform, lakban, lempeng silika gel, metanol, metal, n-

butanol, n-he‘an, daun ƒanjeng ! Piper betle L", permipan, plastik bening, serbuk

silika gel.

B. Cara Pengerjaan Sampel

1. Pen&'a(an Sa)(e*

iucapkan asmallah. iambil sampel berupa daun ganjeng. icuci

bersih daun ƒanjeng kemudian dipotong-potong kecil. ikeringkan dengan cara

diangin-anginkan pada tempat yang tidak terkena sinar matahari langsung,

kemudian disortasi kering.

+. Pe)bua,an Herbar'u)

iucapkan basmalah. isiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

icuci herba di bawah air yang mengalir, agar kotoran yang melekat pada daun


36/56

benar-benar hilang. ikeringkan herba, yang tidak terkena oleh cahaya matahari,

agar kandungannya yang ada disampel tidak rusak. ioleskan dengan alkohol

$Œ, agar sampel tidak ditumbuhi mikroba. itempelkan herba pada sasak

dengan menggunakan selotip bebas asam dan ditutup sasak

-. Eks,raks' sa)(e* denan )e,ode/

a. aserasi

iucapkan asmalah. isiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

ipotong kecil-kecil sampel daun ganjeng. itimbang sampel sebanyank 2‹$ gr.4emudian dimasukkan 2‹$ g sampel ke dalam toples. ibasahi sampel

menggunakan larutan metanol. itambahkan pelarut metanol ke dalam toples

hingga melewati sampel !sampel terendam&. itutup toples menggunakan

aluminium foil kemudian ditutup rapat dengan penutup toples. ibiarkan sampel

terendam selama ™ #‡ jam. ilakukan proses penyarian setelah ™ #‡ jam

menggunakan kain putih dan corong yang telah disumbat kapas. ilakukan prosesremaserasi sampel yang telah disaring tadi. itampung hasil maserasi

b. Sokletasi


itimbang sampel daun ganjeng sebanyak ‹$ g. imasukkan sampel ke dalam

labu alas bulat. itambahkan ‹$$ ml methanol ke dalam labu alas bulat.

irangkai alat sokletasi. imulai penyarian #$-#‡ siklus. itampung hasil ekstrak

daun ƒanjeng.

c. ˆefluks


itimbang sampel daun ƒanjeng ‹$ g. imasukkan ke dalam labu alas bulat.

itambahkan ‹$$ ml metanol ke dalam labu alas bulat. irangkai alat refluks.


37/56

imulai penyarian dan ditunggu hingga ‰-‡ jam. isaring hingga didapatkan

ekstrak cair dan ampasnya

‡. Par,'s'

a. 'artisi air-air

iucapkan basmalah. isiapkan alat dan bahan. itimbang ekstrak

metanol daun ƒanjeng sebanyak # g. ilarutkan ekstrak dengan ‰$ ml heksan dan

dimasukkan ke dalam corong pisah. isuspensikan ekstrak yang tidak larut

dengan 2$ ml air dan dimasukkan ke dalam corong pisah. igojog corong pisahhingga homogen dan didiamkan beberapa saat hingga terbentuk dua lapisan

pelarut. ipipet lapisan he‘an kemudian ditampung dalam wadah yang disaring

terlebih dahulu menggunakan corong dan kertas saring. itambahkan kembali ‰$

ml he‘an ke dalam corong pisah lalu digojog hingga terbentuk lagi dua lapisan

pelarut. ilakukan penggantian pelarut he‘an sebanyak ‹ kali. iuapkan lapisan

he‘an yang diperoleh. itambahkan pelarut n-butanol jenuh air pada lapisan air dalam corong pisah sebanyak 2$ ml kemudian digojok. idiamkan corong pisah

hingga terbentuk dua lapisan. itampung lapisan n-butanol jenuh air lalu disaring.

itambahkan kembali pelarut n-butanol jenuh air dan penggantian pelarut n-

butanol dilakukan pula sebanyak ‹ kali. iuapkan lapisan n-butanol jenuh air

hingga kental. itimbang masing-masing ekstrak he‘an dan n-butanol jenuh air.

ilakukan identifikasi senyawa dengan menggunakan teknik 4LT

b. 'artisi air-'adat

iucapkan basmalah. isiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

itimbang ekstrak metanol sebanyak #,$+ gram. imasukkan ekstrak ke dalam

lumpang kemudian dilarutkan dengan n-heksan sebanyak 2‹ ml dan digerus.

imasukkan ke dalam + tabung sentrifuge yang telah disama ratakan tingginya.

isentrifuge hasil gerusan dengan kecepatan #‹$$ rpm selama ‹ menit.


38/56

ipisahkan antara ekstrak larut he‘an dan tidak larut he‘an. ilakukan terus Ž

menerus hingga larutan n-he‘an dalam tabung jernih. igunakan larutan n-he‘an

sebanyak 2$$$ ml atau 2 liter dengan 2$ siklus. ihiung rendamen yang

didapatkan

0. Kro)a,ora' La('s T'('s

a. 'engaktifan Lempeng silica

isiapkan lempeng. iukur batas bawah 2 cm dan batas atas $,‹ cm.

imasukkan dalam o„en hingga melengkung b. 'enjenuhan chamber

imasukkan pelarut methanol dan etil # : 2 dan sebagainya. igoyang-

goyangkan chamber. imasukkan potongan kertas saring hingga mencapai tutup

chamber. itandai chamber jenuh yang terelusi dengan pelarut pada kertas saring

c. 'enyiapan sampel

isiapkan alat dan bahan. isiapkan sampel yang akan ditotol ke dalam ‰ buah „ial, „ial pertama !ekstrak larut he‘an&, „ial ke # !ekstrak tidaklarut he‘an&,

dan „ial ‰ !ekstrak larut metanol&. ilarutkan ekstrak pada „ial dengan he‘an

secukupnya hingga tidak terlalu pekat, kemudian ditutup dengan aluminium foil.

ilarutkan ekstrak tidak larut he‘an dengan kloroform secukupnya hingga tidak

terlihat pekat kemudian ditutup dengan aluminium foil. ilarutkan ekstrak

metanol pada „ial ‰ dengan metanol secukupnya hingga tidak terlihat pekat

kemudian ditutup dengan aluminium foil. i„orteks ketiga „ial hingga homogen

d. 'engujian 4LT

iambil chamber yang akan digunakan. iukur eluen he‘an banding etil

dengan perbandingan ‰ : 2. imasukkan eluen he‘an banding etil ‰ : 2 ke dalam

chamber secara bersamaan. igerak Ž gerakkan chamber kemudian didiamkan

hingga jenuh. iambil sejumlah kecil sampel dalam „ial lalu ditotol pada lempeng


39/56

berbeda dan diangin-anginkan. imasukkan lempeng yang telah ditotol ke dalam

chamber kemudian chamber ditutup. iamati pergerakan noda tinggi eluen

terelusi hingga batas atas lempeng. iamati dilampu Š* ‰++ nm dan lampu Š*

#‹‡ nm. 5pabila tidak terdapat noda yang diinginkan maka lempeng disemprot

dengan 1#S7‡ 2$Œ dan dipanaskan hingga noda menja dibercak kehitaman.

ilakukan pengujian berulang dengan perbandingan pelarut berbeda sampai profil

4LT ditemukan.

2. BSLT " Brine Shirmp Lethalit% Test #

a. 'embuatan air bebas proto(oa

iucapkan basmalah. isiapkan alat dan bahan. itimbang garam tidak

beriodium kira-kira ‰ gram. iukur a/uadest 2$$$ ml !2 liter&. ilarutkan ‰%

gram Nal !garam& tidak beriodium dalam 2 liter air. iaduk kemudian disaring.

imasukkan ke dalam toples kemudian ditutup

b. 'enyiapan larutan stok isiapkan alat dan bahan. itimbang ekstrak metanol, ekstrak larut he‘an,

dan ekstrak tidak larut he‘an masing-masing sebanyak ‰$ mg. itambahkan ‰ ml

pelarut metanol ke dalam ekstrak metanol, ‰ ml pelarut n-he‘an ke dalam ekstrak

larut n-he‘an dan ‰ ml pelarut n-butanol untuk ekstrak yang tidak larut n-he‘an.

itutup setiap ekstrak yang telah ditambahkan pelarut

c. 'enyiapan sampel ekstrak

icuci „ial sebanyak %$ ml. itarer setial „ial dengan ‹ ml air.

imasukkan ekstrak metanol dengan konsentrasi 2$ ppm ke dalam ‹ „ial, 2$$

ppm ke dalam ‹ „ial dan 2$$$ ppm ke dalam ‹ „ial. imasukkan ekstrak larut

he‘an dengan konsentrasi 2$ ppm ke dalam ‹ „ial, 2$$ ppm ke dalam ‹ „ial dan

2$$$ ppm ke dalam ‹ „ial. imasukkan ekstrak tidak larut he‘an dengan

konsentrasi 2$ ppm ke dalam ‹ „ial, 2$$ ppm ke dalam ‹ „ial dan 2$$$ ppm ke


40/56

dalam ‹ „ial . imasukkan kontrol pelarut metanol, n-he‘an dan n-butanol ke

dalam ‹ „ial yang berbeda masing-masing sebagai pembanding. imasukkan

kontrol air laut ke dalam ‹ „ial sebagai pembanding. ibiarkan selama #‡ jam

hingga pelarutnya menguap.

d. Šji SLT

imasukkan 2$ ekor lar„a udang ! &rtemia salina L& ke dalam „ial dan

dicukupkan dengan air laut sampai ‹ ml. itambahkan 2 tetes suspensi ragi !‰

mg‹ ml& ke dalam „ial. ihitung jumlah lar„a yang mati setelah 2 ‘ #‡ jame. 'enyiapan larutan uji

itetaskan lar„a udang dalam wadah penetas berbentuk kerucut berisi air

laut yang dilengkapi dengan lampu sebagai sumber cahaya dan aerator sebagai

sumber 7#. ibiarkan selama 2 ‘ #‡ jam. ipindahkan ke dalam wadah gelap yang

di sisinya merupakan wadah terang. Lar„a uji yang baik ditandai dengan lar„a

yang berada pada wadah yang terang.. Kro)a,ora' Ko*o) "KK# dan Kro)a,ora' Ca'r 3aku) "KC3#

a. 4romatografi 4olom


ibebas lemakkan dengan dibilas menggunakan methanol. imasukkan kapas

pada bagian bawah dari kolom. imasukkan silika gel sampai mengisi š dari

kolom lalu ketuk-ketuk hingga tidak terbentuk gelembung gas. ikeluarkan silika

dan ditimbang. itimbang sampel dengan perbandingan 2: 2$$ sampel dan silika .

isuspensikan silika gel dan ekstrak dengan eluen pertama. imasukkan ke

kolom lalu mampatkan. imasukkan selapis kertas saring di bagian atas.

itampung isolate dalam „ial dengan kecepatan alir #$ tetes per menit. itotolkan

pada lempeng. ilihat penampakan noda pada lampu Š* #‹‡ nm dan ‰++ nm.

igabung sampel dengan profil 4LT yang sama lalu hitung nilai ˆf nya.


41/56

b. 4romatografi air *akum

icapkan asmalah. isiapkan alat dan bahan. itimbang gram srbuk

silika dan 2,‹ ekstrak larut n-he‘an lalu digerus dilumpang hingga homogen.

imasukkan serbuk jika gel dan ekstrak larut n-he‘an yang telah dihomogenkan

ke dalam senter glass lalu dimampatkan. iletakkan kertas sering di atasnya.

ifkraksinasi sampel dengan kromotografi cair „akum menggunakan eluen n-

he‘an, etil, dan metanol dengan berbagai perbandingan yang telah diketahui.

imasukkan eluen n-he‘an +$ ml, he‘an banding etil, dan etil banding metanolmasing-masing perbandingan ke dalam senter gelas lalu hasil fraksinasinya

ditampung dalam wadah yang telah disiapkan. iuapkan hasil fraksi hingga

diperoleh ekstrak kental. ifraksinasi masing masing ekstrak yang diperoleh dari

berbagai perbandingan eluen saat dimasukkan ke dalam „ial lalu diencerkan

dengan pelarut kloroform banding metanol. itotol ekstrak yang telah larut pada

lempeng kemudian dielusi dengan eluen n-he‘an banding etil dengan perbandingan ‰ : 2. iamati penampakan noda pada lempeng dibawah Š* #‹‡

nm dan ‰++ nm. igabungkan sampel yang mempunyai profil 4LT yang sama

hingga diperoleh fraksi # fraksi !fraksi 5 dan fraksi &. iuapkan pelarut fraksi

yang diperoleh kemudian ditimbang. imasukkan masing-masing fraksi ke dalam

„ial secukupnya lalu dilarutkan dengan kloroform banding metanol. itotol

masing-masing fraksi pada lempeng kemudian dielusi. 6raksi 5 dielusi dengan

he‘an banding etil !‰ : 2& dan fraksi dielusi dengan eluen etil banding metanol

! : 2&. ilihat penampakan noda fraksi 5 dan fraksi di bawah lampu u* #‹‡

nm dan ‰++ nm.

4. Kro)a,ora' La('s T'('s Pre(ara,'

a. 'embuatan lempeng


42/56

ibaca basmalah. isiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

itimbang serbuk silika sebanyak #$ gram. iukur ‹$ ml a/uadest.

ihomogenkan serbuk silika dan a/uadet ke dalam erlenmeyer hingga terbentuk

bubur silika. ituang bubur silika di atas lempeng kaca berukuran #$ cm ‘ #$ cm

dan diratakan. idiamkan lempeng 2 ‘ #‡ jam. iaktifkan lempeng dalam o„en

dengan suhu 22$$ selama 2 Ž # jam.

b. 'enotolan sampel

isiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. ilarutkan ekstrak fraksi5 dalam „ial dengan pelarut kloroform: metanol !2 : 2&. itotolkan ekstrak yang

larut pada lempeng preparatif yang telah diaktifkan menggunakan pipa kapiler.

iukur eluen he‘an : etil !‰ : 2& masing-masing ‡‹ ml dan 2‹ ml lalu dimasukkan

ke dalam chamber lalu dijenuhkan. Setelah chamber jenuh, lempeng preparatif

yang telah ditotol dimasukkan ke dalam chamber kemudian chamber ditutup dan

ditunggu hingga proses elusi selesai. Setelah proses elusi selesai, lempengdikeluarkan dari chamber lalu diangin-anginkan hingga eluennya menguap.

ilihat penampakan noda yang berbentuk pita pada u„ ‰++ nm dan #‹‡ nm.

iberi tanda noda yang berbentuk pita lalu dikeruk. iperoleh # noda kemudian

masing-masing noda di masukkan ke dalam # mangkok berbeda yang telah

ditimbang dan diberi tanda noda 2 dan noda #. itambahkan masing-masing noda

dengan kloroform banding metanol !2:2& sebanyak 2$ ml, lalu dihomogenkan

kemudian dipipet ke dalam tabung sentrifuge. isentrifuge sampel dengan

kecepatan #‹$$ ppm dalam waktu ‹ menit. Setelah disentrifuge diperoleh dua

lapisan yaitu cairan yang bening dan endapan. ipipet cairan yang bening dari

masing-masing noda ke dalam # „ial yang berbeda yang telah ditimbang.


43/56

BAB I3

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Tabe* Pena)a,an

2. kstraksi

Nama Sampel

erat

Sampe

l

*olume

'elarut

erat

…kstrak

aun Sirih ! Piper

betle L.&#$$ g 2%$$ ml #+,3 g

3. (rine %hrimp Lethaly )est !(%L)"

a. 4ematian lar„a

Samp

el

"umlah Lar„a ati padaSetiap 4onsentrasi

"umlah Lar„a ati pada 4ontrol Negatif

2

$

p

p

m

2

$

$

p

p

m

2$

$$

pp

m

'

e

l

a

r

u

t

5ir Laut

…kstra

k

etan

ol

‡ % 2$ $ $

+ ‹ 3 $ $

% ‹ $ $

# ‡ + $ $


44/56

‹ 3 $ $

ε +

0

-

1-5 6 6

…kstra

k n-

1eksa

n

% % 2$ $ $

‹ 3 $ $

+ ‹ 3 $ $

‰ + $ $

# ‡ % $ $

ε +

7

-

67- 6 6

…kstra

k

tidak

larut

n-

1eksa

n

‹ % $ $

# ‰ ‹ $ $

‡ + $ $

‰ 3 3 $ $

2 # ‰ $ $

ε 1

0

+

--+ 6 6

b. Nilai 'robit

Sampel

4on

sentr

asi

!pp

m&

Log

4on

sentr

asi

Œ

4em

atian

Lar„

a

Nilai

'robit

!y&


45/56

…kstrak

etanol

2$ 2 ‹$ ‹,$$

2$$ # +# ‹,‰2

2$$$ ‰ % ‹,

…kstrak

larut n-

1eksan

2$ 2 ‡% ‡,3‹

2$$ # +$ ‹,#‹

2$$$ ‰ %+ +,$%

…kstrak

tidak

larut n-

1eksan

2$ 2 ‰$ ‡,‡%

2$$ # ‡+ ‡,3$

2$$$ ‰ +‡ ‹,‰+

B. Pembahasan

aun sirih ! Piper betle L.& atau disebut juga dengan daun ganjeng adalahsalah satu tumbuhan yang sampai saat ini banyak dikenal sebagai tanaman obat.

aunnya sering digunakan sebagai obat dipercaya memiliki khasiat mencegah

penyakit infeksi saluran kemih, pembersih gigi, obat sakit perut, dan obat luka

oleh masyarakat akassar, Sulawesi Selatan. aun Sirih ! Piper betle L.&

diketahui mengandung inyak atsiri. engingat manfaat dari aun Sirih ! Piper

betle L.& yang banyak bermanfaat bagi tubuh.6itokimia adalah ilmu yang mempelajari kandungan kimia dari bahan

alam yang mempunyai khasiat obat. ahan alam meliputi tumbuhan, hewan,

mineral, serta biota laut. ahan alam tersebut mengandung beberapa komponen

kimia yang dapat digunakan sebagai obat. 7bat yang berasal dari bahan alam

dikenal luas sebagai obat tradisional !ƒunawan, #$$‡&.


46/56

5dapun alat-alat yang digunakan pada praktikum kali ini yaitu: rota „apor,

batang pengaduk, beker gelas, chamber, cawan porselin, corong pisah, eksikator,

gelas ukur, gelas arloji, kain putih, kipas angin, klem, lampu belajar, lap halus, lab

kasar, lempeng kaca, lumpang, mikro pipet, mikroskop, magnetic stirer, neraca

analitik, o„en, pengayak, pipa kapiler, pipet tetes, saringan „akum, sentrifuge,

sendok tanduk, sendok besi, sinter glass, spatel, spoit, statif, toples, tabung reaksi,

tabungs entrifuge timbangan kasar, „ial.

5dapun bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini yaitu: air bebas proto(oa, aluminium foil, asam sulfat 2$ Œ, a/uadest, aun Sirih ! Piper betle L.&,

etanol, etilasetat, he‘an, kloroform, 471 etanolik, kertas saring, lar„a udang

! &rtemia salina&, lempeng silika gel ƒ6 #‹‡, metanol, n Ž he‘an, n Ž butanol,

permipan, plastic bening, serbuk silika gel ƒ6 #‹‡, sel telur lar„a udang ! &rtemia

salina&.

alam praktikum ini akan dilakukan percobaan untuk ekstraksi senyawaaktif tumbuhan tertentu yang berkhasiat obat. 'ercobaan dilakukan mulai dari

pengambilan sampel, kemudian ekstraksi dan identifikasi senyawa kimia yang

terdapat pada ekstrak tersebut dengan metode 4romatografi lapis tipis dan dengan

menggunakan pereaksi kimia. Sampel tumbuhan yang digunakan dalam

percobaan ini adalah daun ganjeng atau disebut daun sirih ! Piper betle L.&.

aun sirih diambil dengan cara dipetik langsung. 4emudian sampel dicuci

hingga bersih dengan air mengalir dan kemudian dikeringkan dengan cara

diangin-anginkan !tidak dibawah matahari langsung&. Setelah kering sampel

dipotong kecil Ž kecil dengan tujuan untuk memudahkan molekul Ž molekul air

yang terdapat dalam dalam sel tumbuhan dapat menguap dengan mudah.

'enghilangan molekul Ž molekul air ini dilakukan karena air merupakan

medium yang mudah ditumbuhi mikroba atau jamur. 4eberadaan mikroba atau


47/56

jamur ini nantinya dapat mengganggu hasil ekstraksi senyawa aktif dari sampel.

Selain itu tujuan dari pengeringan ini dilakukan juga dimaksudkan untuk

mencegah terjadi reaksi en(imatis di dalam sel, di mana reaksi en(imatis ini dapat

berlangsung bila simplisia mengandung air dengan jumlah lebih dari 2$ Œ.

alam proses pengolahan sampel terdapat dua jenis sortasi yang dilakukan

yaitu sortasi basah dan sortasi kering. Sortasi basah dilakukan pada sampel yang

baru diambil dari habitatnya ditujukan untuk memisahkan simplisia yang utuh

dan layak untuk diekstraksi dengan bagian tanaman lain yang tidak dibutuhkanserta kotoran dan benda asing seperti tanah, pasir serta kerikil. Sortasi yang kedua,

yaitu sortasi kering yang dilakukan pada saat sampel telah dikeringkan untuk

selanjutnya dapat diekstraksi dengan metode yang sesuai.

Setelah itu sampel dirajang hingga sesuai dengan ukuran yang diinginkan.

5dapun tujuan dari proses ekstraksi ini adalah untuk menarik komponen kimia

yang terdapat dalam simplisia. …kstraksi yang dilakukan disesuaikan dengan sifatkimia fisika dari sampel dan juga tergantung dari (at yang dikandungnya.

'ada percobaan ini dilakukan ekstraksi dengan cara maserasi. aserasi

adalah penyarian (at aktif yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia

dalam cairan penyari yang sesuai pada temperatur kamar terlindung dari cahaya.

'roses ekstraksi yang terjadi yaitu cairan penyari akan masuk ke dalam sel

melewati dinding sel dan masuk ke dalam rongga yang mengandung (at aktif,

kemudian (at aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara

larutan (at aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang

konsentrasinya tinggi akan terdesak keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan

konsentrasi rendah !proses difusi&. 'eristiwa tersebut berulang sampai terjadi

keseimbangan konsentrasi antara di luar sel dan di dalam sel. Setelah proses

maserasi selesai, kemudian di saring dengan kain putih. igunakan kain putih


48/56

agar ekstrak tidak terkontaminasi pewarna dari kain. igunakan pula larutan

penyari metanol, karena metanol bersifat semipolar sehingga dapat menarik

komponen kimia yang bersifat polar maupun non polar pada daun sirih. 4emudian

ekstrak metanol tersebut dikeringkan hingga larutan penyari menguap. ari hasil

percobaan ini diperoleh hasil ekstrak #,$+ gram.

4emudian setelah dilakukan ekstraksi maka selanjutnya ialah partisi,

dimana partisi ini terbagi # yaitu partisi cair Ž cair dan partisi cair Ž padat. 'rinsip

dari partisi cair Ž cair adalah ekstraksi cair Ž cair !corong pisah& merupakan pemisahan komponen kimia di antara # fase pelarut yang tidak saling bercampur

di mana sebagian komponen larut pada fase pertama dan sebagian larut pada fase

kedua, lalu kedua fase yang mengandung (at terdispersi dikocok, lalu didiamkan

sampai terjadi pemisahan sempurna dan terbentuk dua lapisan fase cair, dan

komponen kimia akan terpisah ke dalam kedua fase tersebut sesuai dengan tingkat

kepolarannya dengan perbandingan konsentrasi yang tetap.Sampel daun sirih, dipartisi cair Ž padat. 'rinsip dari ekstraksi cair padat

yaitu penarikan komponen kimia pada suatu sampel dengan menggunakan satu

pelarut yang pelarutannya dilakukan secara terpisah di mana komponen kimia

akan terlarut dalam pelarut dengan cepat dengan bantuan sentrifuge berdasarkan

gaya sentrifugasi. ara kerjanya yaitu pertama Ž tama disiapkan alat dan bahan

yang akan digunakan untuk partisi cair Ž padat. 4emudian ditimbang ekstrak

metanol sebanyak ‹ gram. Lalu ekstrak metanol yang telah ditimbang, dilarutkan

dengan 2$$$ ml heksan sedikit demi sedikit dalam lumpang dan digerus.

4emudian hasil gerusan disentrifuge dengan kecepatan #‹$$ ppm selama ‹ menit.

Ipisahkan antara ekstrak larut dan tidak larut heksan dan untuk yang larut

heksan disaring menggunakan kertas saring dan ditampung pada mangkok.

Lakukan terus menerus dengan perlakuan yang sama hingga ekstrak yang ada


49/56

pada lumpang menjadi bening. an semua hasil tampungan larut heksan diuapkan

dan yang tidak larut heksan disimpan pada cawan porselin sebagai sampel ekstrak

yang tidak larut heksan. 4emudian masing-masing ditimbang bobot ekstrak. ari

sini diperoleh larut heksan ‹ g dan tidak larut heksan $,3% g.

4romatografi lapis tipis !4LT& adalah suatu metode analisis yang

digunakan untuk memisahkan suatu campuran senyawa secara cepat dan

sederhana. 'enggunaan kromatografi sangat membantu dalam pendeteksian

senyawa metabolit sekunder dan dapat dijadikan sebagai patokan untuk proses pengerjaan berikutnya dalam menentukan struktur senyawa. 'rinsipnya atas dasar

perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah gerakan pelarut

pengembang. ahan adsorben sebagai fase diam dapat digunakan silika gel,

alumina dan serbuk selulosa. 'artikel silika gel mengandung gugus hidroksil pada

permukaannya yang akan membentuk ikatan hidrogen dengan molekul polar air.

6ase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansiyang mana dapat berflouresensi dalam sinar ultra „iolet. 6ase gerak merupakan

pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.

Sebelum menotolkan sampel ke lempeng 4LT, terlebih dahulu dibuat batas

atas dan batas bawah dengan menggunakan pensil. 1al ini bertujuan untuk

mengetahui dimana penotolan sampel itu, dalam penandaan tidak digunakan tinta

karena pewarna dari tinta akan bergerak selayaknya kromatogram dibentuk. 1al

ini dapat mempengaruhi proses pengelusian senyawa sampel.

i dalam chamber diisi dengan eluen, di mana untuk setiap sampel

memiliki eluen dengan campuran yang sama yaitu heksan : etil asetat !‰ : 2& untuk

sampel daun sirih. …luen tersebut terlebih dahulu dijenuhkan. alam hal ini

chamber ditutup rapat dengan tujuan agar meyakinkan bahwa atmosfer dalam

gelas kimia terjenuhkan dengan uap pelarut. 'enjenuhan udara dalam gelas kimia


50/56

dengan uap menghentikan penguapan pelarut sama halnya dengan pergerakan

pelarut dalam 4LT. Šntuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya

ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut.

Setelah chamber jenuh maka lempeng 4LT dimasukan ke dalam chamber,

ketika pelarut mulai membasahi lempengan, pelarut pertama Ž tama akan

melarutkan senyawa Ž senyawa dalam bercak yang telah ditempatkan pada garis

dasar. Senyawa Ž senyawa akan cenderung bergerak pada lempeng kromatografi

sebagaimana halnya pergerakan pelarut. i sini akan kita lihat mulai akan adanoda terpisah Ž pisah, ini dikarenakan setelah sampel dilarutkan dengan eluen,

maka sampel akan ikut berinteraksi juga dengan silika yang ada di lempeng.

Senyawa yang terperangkap di bagian paling bawah menunjukan bahwa senyawa

tersebut paling tinggi kepolarannya, Senyawa ini dapat membentuk ikatan

hidrogen yang akan melekat pada silika lebih kuat dibanding senyawa lainnya.

4ita dapat mengatakan bahwa senyawa ini terjerap lebih kuat dari senyawa yanglainnya. 'enjerapan merupakan pembentukan suatu ikatan dari satu substansi pada

permukaan.

…luen yang digunakan merupakan kombinasi dari dua atau tiga macam

pelarut, hal ini dimaksudkan untuk mencapai semua tingkat kepolaran sehingga

diharapkan eluen ini dapat mengangkat noda dengan tingkat kepolaran yang

berbeda Ž beda pula. engan perbandingan jumlah pelarut yang digunakan adalah

perbandingan yang didasarkan pada pengalaman bahwa eluen tersebut dapat

menarik komponen kimia yang maksimal. Namun jika pada penampakan noda

belum didapat jumlah noda yang maksimal atau posisi noda yang terlalu ke atas

atau ke bawah maka perbandingan eluen yang digunakan dapat dimodifikasikan

kembali.


51/56

ilakukan identifikasi 4LT dengan sampel hasil partisi cair Ž padat.

imana sampel larut heksan dilarutkan dengan kloroform, sampel larut metanol

dilarutkan dengan metanol, sampel tidak larut heksan juga dilarutkan dengan n Ž

butanol. Setelah dilarutkan, ditotolkan sampel pada # lempeng silika gel yang

berbeda, yang telah diberi tanda berdasarkan kepolarannya. ielusi lempeng silika

gel yang telah ditotol sampel pada chamber yang telah dijenuhkan dan berisi

eluen. 5pabila eluen telah mencapai batas atas maka lempeng tersebut dikeluarkan

dari chamber. Setelah itu diamati penampakan noda yang terbentuk pada Š* #‹‡dan Š* ‰++, difoto hasil noda yang tampak pada Š* #‹‡ dan ‰++ nm..

ekanisme penampakan noda pada Š* yaitu suatu metode yang

mengabsorbsi cahaya ultra„iolet akan mencapai suatu keadaan tereksitasi dan

kemudian memancarkan cahaya ultra„iolet atau cahaya tampak pada waktu

kembali ke tingkat dasar !emisi&, emisi inilah yang digambarkan sebagai

fluoresensi. 'ada Š* #‹‡ nm, lempeng 6#‹‡ yang mengalami flouresensi, dimanalempeng 6#‹‡ mengabsorbsi cahaya ultra„iolet mencapai suatu keadaan tereksitasi

dan kemudian memancarkan cahaya ultra„iolet atau cahaya tampak sebagai

fluoresensi, sedangkan noda akan terlihat gelap, tidak dapat tampak bila

mengandung gugus kromofor.

'enampakan noda pada lampu Š* ‰++ nm adalah karena adanya daya

interaksi antara sinar Š* dengan gugus kromofor yang terikat oleh auksokrom

yang ada pada noda tersebut. 6luoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi

cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi

dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke

keadaan semula sambil melepaskan energi. …nergi inilah yang menyebabkan

perbedaan fluoresensi warna yang dihasilkan oleh tiap noda.


52/56

rine Shrimp Lethality Test !ST& adalah suatu metode pengujian dengan

menggunakan hewan uji yaitu &rtemia salina Leach, yang dapat digunakan

sebagai bioassay yang sederhana untuk meneliti toksisitas akut suatu senyawa,

dengan cara menentukan nilai L ‹$ yang dinyatakan dari komponen aktif suatu

simplisia maupun bentuk sediaan ekstrak dari suatu tanaman. 5pabila suatu

ekstrak tanaman bersifat toksik menurut harga L ‹$ dengan metode ST, maka

tanaman tersebut dapat dikembangkan sebagai obat anti kanker. Namun, bila tidak

bersifat toksik maka tanaman tersebut dapat diteliti kembali untuk mengetahuikhasiat lainnya dengan menggunakan hewan coba lain yang lebih besar dari lar„a

&rtemia salina Leach seperti mencit dan tikus secara in „i„o. Suatu senyawa

dinyatakan mempunyai potensi toksisitas akut jika mempunyai harga L ‹$

kurang dari 2$$$ ›gml. L ‹$ ! Lethal Concentration ‹$& merupakan konsentrasi

(at yang menyebabkan terjadinya kematian pada ‹$ �

Laporan Flengkap Fito

Documents

Transcript of Laporan Flengkap Fito