Laporan PraktikumHari/Tanggal: Sabtu, 18 Oktober 2014MikrobiologiWaktu : 09.00 13.00 WIB.PJP : 1. Ivone Wulandari, Ssi, Msi 2. Muhammad Arif S. PiAsisten : 1. Ade Setiawan A. Md 2. Embun Novita A. Md

TEKNIK ASEPTIK DAN ISOLASI BAKTERI DARI POPULASI CAMPURANKelompok 4Frizka Syaidatu Dhinar J3L213106

PROGRAM KEAHLIAN ANALISIS KIMIAPROGRAM DIPLOMAINSTITUT PERTANIAN BOGOR2014I Pendahuluan1.1 Latar Belakang

1.2 TujuanPercobaan ini bertujuan mempelajari cara melakukan pengenceran serial dan menentukan jumlah bakteri dalam suatu sampel dengan metode hitungan cawan.II Alat dan BahanAlat-alat yang digunakan ialah tabung reaksi, rak tabung reaksi, batang penyebar, pipet, cawan petri, dan pembakar spirtus. Bahan-bahan yang digunakan ialah PCA (Plate Count Agar), larutan fisiologis, suspense bakteri, dan akuades.

III Prosedur KerjaTeknik aseptik dilakukan di dekat api pembakar spirtus dan harus secara aseptik. Kemudian dua tabung berisi masing-masing dH2O steril dan media NB (Nutrient Broth), dipegang dengan salah satu tangan yang dipisahkan dengan ibu jari. Kawat ose dipanaskan dari ujung sampai pangkal hingga memijar dan di tunggu hingga dingin. Kedua tutup tabung dibuka. Mulut tabung dibakar supaya kontaminan mati. Kawat ose diceluplan ke dalam tabung yang berisi dH2O steril. Setelah itu, Kawat ose dicelupkan ke dalam media cair. Tutup tabung tidak boleh diletakkan sembarangan karena dikhawatirkan akan terkontaminasi oleh mikroorganisme. Sebelum kedua tabung ditutup, tabung dibakar lagi pada ujung mulutnya agar kontaminan dari proses transfer hilang. Setelah itu, kawat ose dibakar untuk membunuh bakteri sisa.Isolasi bakteri dari populasi camouran dilakukan dengan cara media PCA (Plate Count Agar) yang baru dibagi menjadi sempat bagian dengan menggunakan spidol dibelakang cawan petri untuk menandakan goresan kuadran, setelah itu kawat ose dibakar hingga memijar kemudian dibiarkan agar agak dingin, setelah itu bakteri diambil pada hasil screeningbakteriyangtelahdilakukan, lalu sekeliling cawan petri dibakar untuk mengurangi kontaminan, setelah itu goreskan pada cawan petri yang baru dengan menggores padakuadran pertama lalu kawat ose dibakar dan didinginkan lalu lanjutkan goresan padakuadran dua, kemudian dibakar kembali untuk goresan ke tiga dan dibakar kembaliuntuk goresan pada kuadran empat, setelah itu sekeliling cawan petri dibakar danhasil dari teknik aseptik dan isolasi bakteri dimasukan ke dalam inkubator untukdiinkubasikan selama 24-48 jam, setelah ituhasilnya diidentifikasi.

IV Hasil Pengamatan dan Data4.1 Hasil PengamatanBerikut ini data dan hasil pengamatan yang dilakukan pada teknik aseptik dan isolasi bakteri dari populasi campuran.

Gambar 1 Hasil percobaan teknik aseptik dengan media Nutrient BrothTabel 1 Hasil percobaan teknik isolasiAsal sampelDua macam koloni yang tumbuh terbanyak

Gambar Ciri-ciri koloni

Kantin 4Cawan 1

Warna: putihUkuran: besarBentuk: FilamentousElevasi: Flat Permukaan: Tidak mengkilatMargins: Filamentous

Cawan 2

Bakteri tidak tumbuh

4.2 PembahasanTeknik aseptik merupakan teknik dasar yangharus dikuasai oleh seorang analisis mikrobiologi dalam menangani suatu mikroba. Teknik aseptikdilakukan dengan penyediaan alat-alat kerja yang steril danbekerja di dekat api bunsen agar terhindar dari kontaminan udara.pada waktu inokulasi jarum yang digunakanuntuk meindahkan mikroba harus dipijarkan diatas api segera sebelum dan sesudah melakukan pemindahan. Pemanasan ini menghjancurkan semua bentuk kehidupan yang ada pada permukaan jarum atau alat pemindahan, setelahdi inokulasi biakan bakteri disimpan dan diinkubasi dalam lingkungan yang sesuai untuk petumbuhan, (Dwidjoseputro2005). Media yang dipakai dalam teknik aseptik adalah akuades dan media yang dibuat dari (NB) Natrium broth. Percobaan ini menggunakan dH2O steril untuk menguji seberapa aseptik pekerjaan yang dilakukan karena di dalam dH2O steril tidak terdapat bakteri sehingga jika pekerjaan tidak aseptik maka media NB akan keruh. Hasil percobaan menunjukkan bahwa media NB tidak keruh yang menandakan tidak adanya kontaminasi pada saat melakukan percobaan.Teknik pemegangan tabung media cair dan tabung dH2O steril yaitu berbentuk pola V dan dipisahkan dengan ibu jari. Hal ini bertujuan untuk mempermudah dalam melakukan pemindahan mikroorganisme ke tempat media yang baru dan tidak ada mikroorganisme yang terbuang. Selain itu bertujuan untuk meminimalkan terjadinya kontaminasi mikroorganisme yang tidak diinginkan dari udara ketika tabung terbuka, sehingga dapat diperoleh hasil yang lebih akurat.Metode isolasi bakteri dapat dilakukan dengan beberapa cara. Salah satunya yang digunakan dalam percobaan adalah metode cawan gores. Metode ini mempunyai dua keuntungan yaitu menghemat waktu dan bahan namun terdapat pula kelemahannya yaitubakteri anaerob tidak dapat tumbuh.Media PCA yang digunakan tidak boleh terlalu panas karena akan menimbulkan uap pada kaca cawan petri. Jika terdapat uap pada cawan petri, harus dibersihkan denga tisu yang sudah dibasahi dengan alkohol 70%. Uap harus dibersihkan karena jika tidak dibersihkan dapat membasahi media PCA yang ada di dalam cawan.Berdasarkan percobaan diperoleh data seperti pada tabel 1 cawan 1 bakteri yang digoreskan pada jalur zigzag semuanya tumbuh subur sehingga tidak ada yang terpisahkan.Hal ini kemungkinan disebabkan oleh beberapa faktor diantaranya bakteri yang dipindahkan sudah terkontaminasi oleh jamur sehingga media baru tersebut terpenuhi bakteri subur yang tak dapat dipisahkan,teknik penggoresan yang buruk sehingga media tersobek. Bakteri pada cawan 2 tidak tumbuh. Hal ini dapat disebabkan setelah kawat ose dipijarkan dengan api spirtus dalam teknik sterilisasi, langsung ditempelkan ke media yang penuh dengan koloni bakteri dan tidak ditunggu hingga kawat ose dingin. Kawat ose dalam keadaan panas, dapat menyebabkan mikroorganisme mati, sehingga tak ada mikroorganisme yang tumbuh pada media agar yang baru.

V SimpulanBerdasarkan percobaan yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa teknik aseptik yang dilakukan oleh praktikan telah berhasil karena tidak ada mikroorganisme yang tidak diinginkan (kontaminan) yang tumbuh. Isolasi bakteri pada sampel kantin 4 yang praktikan lakukan, cawan pertama terbentuk koloni-koloni yang tidak terpisah yang kemungkinan sudah terkontaminasi dengan jamur, akan tetapi pada cawan kedua, tidak terbentuk koloni mikroorganisme.

Daftar PustakaAfrianto L. 2004.Menghitung Mikroba pada Bahan Makanan. Bandung: ITB Press.Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Gramedia.Fardiaz, Sriakandi. 1992. Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.Hardioetomo, RS. 1983.Mikrobiologi dalam Praktek. Bogor:IPB-Press.Pelczar, Michael J. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI Press.Sunatmo, Tedja Imas. 2007. Eksperimen Mikrobiologi dalam Laboratorium. Jakarta: Ardy Agency.Suriawiria, Unus. 2008. Mikrobiologi Air. Bandung: Penerbit PT Alumni.