Translate Enny Evluation

7/26/2019 Translate Enny Evluation

1/21

Evaluasi Sistem Deteksi viabilitas-qPCR padaSalmonellaSerovar Enteritidis

yang Hidup dan Mati

Abstrak

Propidium monoazide (PMA) ditambah dengan PCR (viabilitas PCR) digunakan

dalam deteksi patogen yang dibawa oleh makanan hanya untuk mendeteksi

bakteri yang hidup. Awalnya muncul untuk sepenuhnya menghapus sinyal dari

bakteri yang mati keterbatasan viabilitas PCR cepat muncul dalam literatur.

!alam penelitian ini penggunaan PMA dalam viabilitas"#PCR (v"#PCR) dinilai

pada sel"sel $almonella enterica subsp. enterica serovar %nteritidis yang hidup dan

mati. Protokol penanganan PMA telah dimodi&ikasi (durasi inkubasi dalam gelap

konsentrasi PMA) untuk mengevaluasi apakah sinyal negati& lengkap dari

$almonella mati adalah mungkin. 'amun tak satu pun dari modi&ikasi ini

ditemukan dapat meningkatkan penghapusan sinyal #PCR yang diamati yang

masih tersisa pada bakteri mati. Penelitian ini uga menggaris bawahi bahwa PMA

mungkin tiba"tiba menurunkan sinyal #PCR yang diamati pada $. enteritidis

hidup pada konsentrasi rendah. Akhirnya penggunaan sel $. enteritidis yag

dibunuh melalui proses yang mengubah dindingmembran sel atau tidak memberi

kita petunuk untuk menawab pertanyaan tentang non-total extinctiondari sinyal

dari sampel sel"sel yang mati dalam v-qPCR assay. Memang data yang kuat

mengindikasikan bahwa sinyal #PCR sisa diamati pada sel yang tidak dapat di

kultur tidak hanya tergantung pada integritas dindingmembran sel dari bakteri.

Menurut hasil ini penulis menyarankan bahwa untuk sistem deteksi bakteri


2/21

bawaan makanan yang cepat dan handal sebuah pengayaan setelah analisis #PCR

harus disiapkan untuk v"#PCR.

1 Perkenalan

Patogen bawaan makanan merupakan sebuah masalah yang penting seperti

yang teradi di %ropa pada tahun *+,* telah dilaporkan sebanyak -,.+/ kasus

pada manusia yang mengakibatkan 0, kematian (%1$A dan %C!C *+,/). 2ntuk

dapat mencegah teradinya wabah tersebut bahan makanan dipantau sesuai

dengan Peraturan 3omisi %ropa *+4*++5 di mana kriteria mikrobiologi

diberikan untuk setiap kategori makanan (3omisi 2ni %ropa *++5). !alam

peraturan ini metode re&erensi yang digunakan untuk mencari keberadaan

patogen bawaan makanan sebagian besar berbasis kultur (misalnya 6$7 ,--0a

,--0b *++, *++* *++0a *++0b). Metode"metode konvensional ini cukup

e&isien dan hanya mendeteksi bakteri yang hidup tetapi memakan waktu dan

tenaga. 7leh karena itu mereka tidak cocok dalam kasus wabah dimana awaban

yang cepat sangat diperlukan.

Metode molekuler secara progresi& diakui sebagai alternati& yang berharga

karena mereka cepat sensiti& dan spesi&ik. 'amun polymerase chain reaction

(PCR) atau real"time PCR (#PCR) memperkuat !'A baik pada bakteri mati

ataupun hidup sebagai !'A tetap stabil setelah kematian bakteri (8i dkk *+,9.

Masters dkk ,--/9. :ol&&s dkk. *++5). !ua teknik potensial dapat digunakan

hanya untuk mendeteksi bakteri hidup. ;ang pertama berdasarkan pada deteksi

mR'A dengan menggunakan reverse"transcriptase (R


3/21

teknik deteksi ini membutuhkan ekspresi gen yang ditargetkan yang dapat

bervariasi dalam kondisi stres. $elanutnya R'A sangat sensiti& terhadap

degradasi dalam matriks kompleks seperti makanan. $ecara keseluruhan

penggunaan teknologi R


4/21

menyebabkan berkurangnya kemampuan untuk mengekstrak atau memperkuat

!'A masing"masing ($oeima dkk *++4.). 3arena PMA tidak mampu

menembus bakteri dengan dinsing membran sel yang intak hanya !'A dari

bakteri dengan dinding membran sel yang lemah berikatan dan dengan demikian

tidak diperkuat oleh (#) PCR ('ocker dkk *++09. $hapiro *++).

!e&inisi viabilitas bakteri masih menadi subyek kontroversi. ;ang

paling umum adalah> ketika sampel dikeluaran pada media padat yang sesuai

bakteri mati tidak dapat menghasilkan colony &orming unit (C12) sedangkan

bakteri hidup mampu membentuk C12 (


5/21

?ach *+,9. %liza#uivel dkk *+,*a *+,*b9 Dose&sen dkk . *+,+9 3im dan 3o

*+,*9 8iang dkk *+,,9. Mamlouk dkk *+,*9. $ingh dkk *+,9. $oeima dkk

*+,*9. van 1rankenhuyzen dkk *+,,) hanya untuk mendeteksi bakteri hidup.

PMA awalnya dilaporkan sepenuhnya menghapus sinyal dari bakteri mati di v"

PCR ('ocker dkk. *++0) dan analisis v"#PCR (Dose&sen dkk. *+,+) tetapi

kemudian beberapa kelemahan dari teknik ini dilaporkan. Memang penanganan

PMA tidak selalu menyebabkan penghapusan lengkap dari sinyal #PCR bakteri

mati (lihat di (1ittipaldi dkk. *+,+)). $ecara khusus penelitian terbaru

menunukkan bahwa penanganan PMA tidak sepenuhnya menghapus sinyal dari

bakteri mati) ukuran amplikon dari #PCR assay adalah pendek (8i dan Chen

*+,9 8uo dkk *+,+9.. Martin dkk *+,9. $chnetzinger dkk *+,) ii) bakteri

target pada konsentrasi tinggi (%liza#uivel dkk *+,*c9. 8i dan Chen *+,9

Pacholewicz dkk *+,9.. Ehu dkk *+,*) iii) konsentrasi Mg*Fdalam reaksi PCR

tidak disesuaikan ('ocker dkk. *++0) atau iv) kandungan lemak dari sampel

makanan adalah tinggi (;ang dkk. *+,,) dan mungkin uga bervariasi sesuai

dengan penanganan pembunuhan (3obayashi dkk *+,+9. 8iang dan 3eeley

*+,*9. 'ocker dkk *++49. ;ang dkk *+,,).

!alam penelitian ini optimalisasi protokol PMA (dengan variasi inkubasi

dan durasi gelap dan konsentrasi PMA) pertama kali dinilai untuk mencapai full

extinctionbakteri mati sinyal #PCR. $etelah itu untuk mengevaluasi angkauan

dinamis dari v-qPCR assay diperiksa umlah yang berbeda dari $almonella

%nteritidis hidup dan salmonella yang dibunuh dengan isopropanol. Akhirnya

untuk lebih memahami mode dari aksi PMA sel"sel $. enteritidis dibunuh oleh


6/21

proses yang berbeda yang mempengaruhi atau tidak integritas membrandinding

sel yang bersamaan dianalisis dengan v"#PCR berdasarkan pengamatan kultur

dan mikroskopis. Penerapan umum v"#PCR untuk sistem deteksi $. enteritidis

uga dibahas.

! "a#an dan metode

!1 "akteri strain dan kondisi pertumbu#an

$almonella enterica enteritidis ( B6 0* dari ?elgia salmonella 'RC)

digunakan sebagai bakteri model untuk patogen bawaan makanan =ram"negati&.

$atu koloni tunggal yang khas diinokulasi dalam ,+ ml steril ?rain eart 6n&usion

(?6) di vorteG dan diinkubasi pada 4HC selama sekitar ,0 am. 3ultur sepuluh

mikroliter semalaman (7') ini diinokulasi ke dalam ,+ ml ?6 broth steril yang

baru dan diinkubasi tanpa mengocok selama 5 sampai / am pada 4HC untuk

mendapatkan kultur pada &ase pertumbuhan eksponensial (7! 0++ nm antara +

dan +0) .

!! Pen$a$a#an S enteritidis

3onsentrasi awal $. enteritidis ditentukan dengan melakukan pengenceran

sepuluh kali lipat ,++ Il dari pengenceran "/ sampai "4 diletakkan pada plate

pada 'utrient Agar ('A) dan diinkubasi pada suhu 4 H C semalam. Plate dengan

kurang dari ++ C12 dipertahankan untuk enumerasi dan perhitungan umlah

bakteri awal dinyatakan sebagai colony &orming units ml (C12 ml).


7/21

!% &ontrol kematian

Proses pembunuhan digunakan pada $. enteritidis yang hidup dievaluasi

dengan meng"enumerasi sel yang sedang tumbuh dengan meletakkan ,++ ml

sampelpadai plate 'A dan di inkubasi selama */ am pada suhu 4 H C.

!' Penanganan PMA

$ampel seratus mikroliter yang diui dipindahkan pada tabung %ppendor&

,.5ml. !i ruangan gelap (PMA sensiti& terhadap cahaya) 45 IM atau ,5+ IM dari

PMA *+ mM (?iotium> ?


8/21


9/21

analisis pencairan suhu produk ampli&ikasi dilakukan secara bertahap dengan

meningkatkan suhu dari 0+ H C hingga -5 H C selama *+ menit ( +0 H C *+

detik). 3ontrol positi& menggunakan g!'A dari $. enteritidis pada ,+/kopi dan

kontrol negati& menggunakan !'Ase dan R'ase &ree water (Acros =eel ?elgia)

yang termasuk dalam setiap reaksi #PCR.

!* Analisis data

!*1 S+"R,reen qPCR assay

2ntuk interpretasi $;?RO=reen #PCR assay dua kriteria yang

dipertimbangkan> nilai siklus kuanti&ikasi (C#) dan suhu leleh dari amplikon

(


10/21

antara kondisi yang dihitung dan sesuai dengan P"value mereka dikoreksi untuk

hipotesis simultan yang mengui kesesuaian dengan koreksi $idak. Perbedaan

dengan P value S ++5 dianggap berbeda secara statistik.

!/ Alat analisis 0iabilitas bakteriLive / Dead BacLight

!alam rangka untuk membedakan bakteri mikroskop dengan

dindingmembran sel yang lemah (mati) dari orang"orang dengan

dindingmembran sel non"lemah (hidup) alat analisis viabilitas bakteri 86B%

!%A!O ?ac8ight (84++4 probe Molekuler) digunakan sesuai dengan

rekomendasi pabrikan. alat ini menyediakan ui &luoresensi dua warna> $ytoO-

pewarnaan asam nukleat &luorescent hiau (/@+5++ nm) dan propidium yodium

(P6) pewarnaan asam nukleat &luorescent merah (/-+05 nm). $ytoO- dapat

mewarnai semua bakteri dalam suatu populasi sedangkan P6 hanya menembus

dinding membran sel bakteri yang lemah dan menyebabkan pengurangan pada

pewarnaan &luoresensi $;


11/21

secara menyeluruh dan diinkubasi pada suhu kamar selama ,5 menit dalam gelap.

$eratus mikroliter agarose *K dalam air &isiologis ditambahkan ke setiap sampel

(akhir konsentrasi ,K agarose).


12/21

positi& dan negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang

diharapkan. 2ntuk sampel mati salah satu proses pembunuhan yang paling

umum isopropanol 4+K digunakan untuk menghilangkan bakteri. 3ematian

diperiksa di plate dan sekitar 4 C12 ml (pengulangan pertama) dan + C12 ml

(pengulangan kedua) $. enteritidis ditemukan setelah pemberian isopropanol.

$eperti yang ditunukkan pada =ambar. ,A tidak ada e&ek pemberian

PMA yang diamati pada $. enteritidis yang hidup untuk kedua kali inkubasi gelap

karena pengurangan sinyal rata"rata mereka (QC#) tidak berbeda secara

signi&ikan. Duga seperti yang diharapkan pemberian PMA meginduksi penurunan

sinyal #PCR yang signi&ikan (P ++++,) pada $. enteritidis yang dibunuh dengan

isopropanol. 'amun tidak ada perbedaan signi&ikan yang diamati antara menit ke

5 dan 0+ menit inkubasi gelap (P +@5). Penurunan C# rata adalah ca. / untuk

kedua periode inkubasi. 7leh karena itu peningkatan waktu inkubasi 5 sampai 0+

menit tidak memiliki e&ek yang signi&ikan pada QC# $. enteritidis mati yang

diberikan PMA dan dengan demikian tidak dapat digunakan untuk memperbaiki

protokol.

%1! Pengaru# konsentrasi PMA pada pengurangan sinyal qPCR

2ntuk menyelidiki apakah konsentrasi PMA memiliki e&ek pada

pengurangan sinyal #PCR terkait dengan $. enteritidis mati + 45 dan ,5+ IM

PMA dibandingkan (5 menit inkubasi gelap digunakan untuk semua konsentrasi

PMA). $ebuah rentang dinamis kultur $. enteritidis dari digunakan sepuluh kali

lipat pengenceran 4- sampai - log C12 ml (40 J ,+4 C12 ml menadi 40 J

,+ C12 ml). Pembunuhan dilakukan dengan isopropanol 4+K. %&isiensi


13/21

prosedur pembunuhan telah diveri&ikasi untuk setiap pengenceran $. enteritidis

oleh tidak adanya pertumbuhan pada agar nutrien. C#"value sampel mati yang

tidak ditangani dengan PMA (+ IM) dibandingkan dengan 45 dan ,5+ IM

(=ambar. ,?). kontrol #PCR positi& dan negati& masing"masing memberi hasil

positi& dan negati& yang diharapkan.

$eperti yang diharapkan C#"value yang lebih tinggi diamati dengan

perlakuan PMA (QC# ca. 4) dibandingkan tanpa perlakuan PMA (+ M). 'amun

untuk semua pengenceran yang diui C#"value" yang didapatkan dengan 45 dan

,5+ TM PMA tidak berbeda secara signi&ikan. Menariknya pengamatan ini

menunukkan bahwa peningkatan konsentrasi PMA tidak mengurangi sinyal

#PCR sampel $. enteritidis mati.

ambar 1. Pengaruh waktu inkubasi gelap dan konsentrasi PMA pada kultur

yang $. enteritidis hidup dan mati. A. ?oGplot dari periode PMA inkubasi yang

berbeda (5 dan 0+ menit) pada bakteri hidup (n 0) dan mati (n 0) pada @4 log

C12 ml. !elta C#> pengurangan sinyal #PCR antara sampel yang diperlakukan

dan tidak diperlukan dengan PMA 45 pM huru& yang berbeda menunukkan nilai

yang berbeda secara signi&ikan pada P U ++5. ?. Pengaruh tiga konsentrasi PMA

(+ 45 dan ,5+ IM) pada lima suspensi yang berbeda dari sel"sel mati> 4.- 0.-

5.- /.- dan .- C12 ml (n ,).

%! E.ek PMA pada konsentrasi S enteritidis yang berbeda

2ntuk menilai apakah umlah bakteri dalam sampel dapat berdampak pada

pengurangan sinyal v"#PCR bakteri mati empat konsentrasi $. enteritidis

digunakan> 4 /@ 0@ dan @@ log C12 ml. $etiap sampel diui dalam rangkap


14/21

tiga dan #PCR dilakukan dua kali pada setiap ulangan. 3ontrol #PCR positi& dan

negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang diharapkan. $.

%nteritidis hidup dan dibunuh dengan isopropanol 4+K diui. %&isiensi prosedur

pembunuhan telah diveri&ikasi oleh tidak adanya koloni di plate untuk semua

konsentrasi $. enteritidis yang diui. C#"value yang diperoleh dengan masing"

masing enis sampel dicatat (=br. *).

Percobaan ini memberikan tiga hasil yang berbeda. Pertama C#"value

yang diperoleh dengan sampel hidup dan mati yang tidak diperlakukan dengan

PMA menyaikan pergeseran signi&ikan tak terduga antara , dan / C# untuk

empat konsentrasi sel yang diui. al ini menggambarkan bahwa kematian itu

sendiri sudah menginduksi penurunan sinyal #PCR yang mungkin disebabkan

oleh hilangnya !'A yang teradi pada langkah panen sel dari sel"sel mati

dengan dinding membran sel yang sangat rusak. 3edua untuk $. enteritidis mati

seperti yang diharapkan C#"value yang diamati dengan sampel PMA treatment

secara signi&ikan lebih tinggi dibandingkan dengan sampel non PMA treatment

untuk semua konsentrasi yang diteliti (=ambar *>. @.@! 0.@! /.@! dan .4! ).

Pergeseran diamati secara signi&ikan lebih tinggi untuk @@ log C12 ml dengan

ca. QC# /5 sedangkan pergeseran sama untuk konsentrasi lainnya dengan QC#

antara *4 dan -. asil ini mengkon&irmasi e&ek PMA pada sampel mati tetapi

uga menunukkan lagi bahwa PMA tidak dapat benar"benar menghapus sinyal

dari sel"sel mati pada semua konsentrasi yang diteliti. 3etiga seperti yang

ditunukkan sebelumnya pada sampel hidup (@.@A dan 0.@A) pada konsentrasi

tinggi (@@ dan 0@ log C12 ml) PMA treatment tidak berpengaruh pada


15/21

pengurangan sinyal karena tidak ada perbedaan signi&ikan yang diamati antara

C#"value yang diperoleh pada sel hidup (=ambar *>. @.@A dan 0.@A) dengan PMA

treatment atau tidak. $ebaliknya pada konsentrasi rendah (4 dan /@ log C12

ml) PMA memiliki e&ek yang signi&ikan pada sel yang hidup. Memang C#"value

yang diperoleh dengan sampel hidup dengan PMA treatment secara signi&ikan

lebih tinggi dengan pergeseran antara , dan *0 C# dibandingkan sampel hidup

non PMA treatment (=ambar *>. /.@a dan .4A). Penurunan sinyal dari sel"sel

hidup pada konsentrasi rendah dapat menyebabkan underestimasi bakteri hidup

dan dalam skenario kasus terburuk dapat menyebabkan negati& palsu dengan

umlah yang sangat rendah bakteri hidup. Penurunan sinyal sel yang hidup ini

sebelumnya diamati padaLegionellaspp. (;anez dkk. *+,,) danEscherichia coli

(8iu dan Mustapha *+,/).

ambar *. Pengaruh PMA pada C#"value konsentrasi yang berbeda dari

$.%nteritidis hidup dan mati (n ) .:> tanpa PMA P> dengan PMA 45 IM B>

hidup !> mati. Angka @@ 0@ /@ dan 4 menunukkan konsentrasi sel dalam

log C12 ml. huru& yang berbeda menunukkan nilai yang berbeda secara

signi&ikan pada P U ++5

%% Pengaru# proses pembunu#an yang berbeda ter#adap respon v-qPCR

2ntuk lebih memahami mengapa PMA treatment tidak benar"benar

menghapus sinyal #PCR $. enteritidis mati (antara 4- dan ,, log C12 ml)

empat proses pembunuhan atau stres proses yang berbeda (panas isopropanol

antibiotik atau pembekuan) dianalisis menggunakan tiga protokol evaluai


16/21

viabilitas yang berbeda > i) sampel yang di letakan pada plate agar nutrien (teknik

mikrobiologi konvensional) ii) sampel dianalisis dengan v"#PCR (teknik

molekuler) dengan 45 pM PMA dan 0+ menit inkubasi gelap dan iii) sampel

dicelup dengan 8ive !eadO ?ac8ight bakterial Biability kit dan diamati

dengan mikroskop (teknik mikroskopis). %mpat proses pembunuhan atau stres

yang berbeda dipilih untuk bertindak berbeda pada integritas dinding membran

sel. Alkohol (seperti isopropanol) membuat bakteri dehidrasi mengganggu

dindingmembran sel dan menyebabkan koagulasi protein. Panas membuat

denaturasi protein dari dinding dan membran sel &os&olipid menadi lebih cair

menyebabkan gangguan integritas dinding dan membran sel. ?entuk beku kristal

es di dalam bakteri yang dapat membuat ruptur dindingmembran sel. $ampel

yang dibunuh dengan isopropanol panas dan beku dapat menyebabkan persentase

yang tinggi dari bakteri mati dengan dindingmembran sel yang terganggu.

3anamisin memiliki mode aksi yang berbeda. !engan berinteraksi dengan subunit

+$ dari ribosom ini akan menginduksi mistranslasi dan secara tidak langsung

menghambat sintesis protein (Misumi dan 'ocker dan Camper *++-).

!ibandingkan dengan eksperimen kontrol menggunakan bakteri hidup v"

#PCR penurunan sinyal signi&ikan bakteri mati (antara *5 sampai /5 C#) pada

sampel bakteri (n -) yang dibunuh dengan empat proses yang berbeda (=ambar.

).


17/21

positi& dan negati& masing"masing memberi hasil positi& dan negati& yang

diharapkan.

2ntuk menyelidiki lebih lanut data ini dalam kaitannya dengan integritas

membran dinding sel hasil v"#PCR dibandingkan dengan umlah plate dan 8ive

dead alat pengamatan mikroskopis (


18/21

.). Pengamatan ini menunukkan bahwa hasil v"#PCR tidak ketat berkorelasi

dengan status &isik dari dindingmembran sel bakteri.

' &esimpulan

3arena deteksi cepat patogen bawaan makanan masih menadi tantangan

perbaikan metode yang tersedia saat ini dan yang diterima secara internasional

masih diperlukan. 6$7


19/21

dalam percobaan yang berbeda dilaporkan dalam penelitian ini. 6nkubasi gelap

yang lebih panang atau konsentrasi yang lebih tinggi dari PMA mengakibatkan

peningkatan yang signi&ikan dari penurunan sinyal. Penelitian lain menelaskan

kemungkinan perbaikan dari v"#PCR dengan mengganggu lebih lanut dari

dindingmembran sel S enterica! LmonocytogenesdanE colimati sebelum PMA

treatment ('kuipou"3en&ack dkk *+,9. :ang dkk . *+,/a *+,/b9. ;ang dkk

*+,, *+,/). !alam makalah ini bahkan ika pengurangan sinyal lebih baik

sinyal masih diamati pada bakteri mati. al ini dapat menyebabkan overestimasi

dari keberadaan bakteri hidup dalam sampel dan sinyal positi& palsu dengan

bakteri mati. 6ni bukan masalah besar untuk tuuan deteksi karena bakteri yang

terdeteksi harus selalu dikon&irmasi oleh isolasi bakteri.

Penelitian kami uga menggaris bawahi bahwa PMA dapat mengurangi

sinyal bakteri hidup pada konsentrasi rendah dan mengkon&irmasi penelitian

terakhir lainnya (8iu dan Mustapha *+,/9. ;anez dkk *+,,). 6ni

merepresentasikan risiko dari hasil negati& palsu ika sinyal turun di bawah 87!

dari #PCR assay. 'egati& palsu ini tidak dapat diterima dalam sistem deteksi

patogen bawaan makanan di mana toleransi kosong adalah aturan seperti halnya

untuk $. enteritidis (3omisi 2ni %ropa *++5 *+,).

Percobaan terakhir yang dilakukan pada $. enteritidis yang dibunuh oleh

proses yang mengubah atau tidak dindingmembran sel memberi beberapa

petunuk untuk pertanyaan tentang non-total extinctionsinyal sampel mati di v"

#PCR assay. Memang sebagian dari bakteri yang tidak dapat di kultur

(diharapkan akan mati) memiliki membran dinding sel yang utuh. 3arena PMA


20/21

mampu menembus hanya bakteri dengan dindingmembran sel yang lemah di v"

#PCR assay bakteri mati dengan membran dinding sel utuh harus memberikan

sinyal yang mirip dengan bakteri hidup. 'amun sampel yang diberikan kanamisin

mengangkat inkoherensi tentang modus tindakan dari v"#PCR. Memang enis

sampel yang dilemahkan ini menampilkan persentase yang tinggi dari bakteri

yang tidak dapat di kultur dengan dindingmembran sel yang utuh meskipun

mereka tiba"tiba memberi salah satu QC# terbaik di v"#PCR. asil ini

menggambarkan bahwa hasil v"#PCR tidak hanya berdasarkan pada integritas

dinding membran sel bakteri.

2ntuk menyimpulkan menurut hasil penelitian ini dan dari tinauan yang

terbaru (1ittipaldi dkk. *+,*) untuk sistem deteksi patogen bawaan makanan

#PCR tidak dianurkan untuk mengganti langkah pengayaan dengan PMA

treatment dalam bentuk yang sekarang . Pada tahap ini pengetahuan saat ini pada

sistem deteksi bakteri patogen bawaan makanan penggunaan pengayaan sebelum

analisis #PCR diikuti oleh kon&irmasi hasil positi& dengan metode berbasis kultur

masih menadi pendekatan yang paling tepat.

ambar. . ?oGplot dari pengaruh PMA 45 pM pada pengurangan sinyal #PCR

sel $. enteritidis yang diberikan dengan isopropanol panas kanamisin atau

pembekuan (n -). V


21/21

3$apan 4erima &asi#

Penelitian ini didanai oleh hibah ;lie&& dari 8ayanan 2mum 1ederal ?elgia>

Rantai Makanan 3eselamatan dan 8ingkungan 3esehatan Masyarakat.

Translate Enny Evluation

Documents

Transcript of Translate Enny Evluation