Pra Kata
Seiring dengan perkembangan zaman, pendidikan akan terus
mengalami perubahan, penyempurnaan, dan penyesuaian. Mata kuliah
Pengoperasian dan Pemeliharaan Alat sebagai pendukung utama untuk
meningkatkan sumber daya manusia yang berkualitas , tentunya harus
sesuai dengan kondisi yang dibutuhkan.
Penyajian makalah ini manggunakan pendekatan komunikatif dan
mengarah pada keterampilan proses. Selain itu, diperhatikan pula tahap
– tahap perkembangan mahasiswa dan kesesuaiannya dengan
lingkungan, kebutuhan pembangunan nasional, serta perkembangan
ilmu dan teknologi. Penguraian materi menggunakan bahasa yang
mudah dimengerti dan dipahami. Hal tersebut dimaksudkan agar apa
yang telah dipelajari oleh mahasiswa tidak hilang dari ingatan.
Dengan segala kerendahan hati, penulis menerima saran dan
kritik konstruktif dari semua pihak. Penulis mengucapkan terima kasih
kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan makalah
ini. Semoga makalah ini memenuhi harapan kita semua.
Bogor, Desember 2009
Penulis
Bab 1 Teori Singkat
Nama instrumen Asam Amino L-8900 Analyzer, Alat ini berasal dari
Negara Jepang dengan merk Hitachi, model L 8900. Analisis asam amino
lengkap-VWR menawarkan solusi dari instrumen canggih, berbagai dipak
kolom, baik yang dikembangkan sebuah metode gradien dikombinasikan
dengan dioptimalkan siap-di-gunakan buffer, menciptakan jawaban yang
tepat untuk setiap analisis laboratorium yang berhubungan dengan
analisis asam amino. Sistem ini sepenuhnya dikendalikan oleh FDA
compliant terbukti dan Elite ™ Kromatografi EZChrom sistem data.
Fleksibel baru otomatis Asam Amino L-8900 Analyzer
mengkombinasikan keuntungan pertukaran ion klasik metode
pemisahan dengan teknik HPLC modern. Batas deteksi tak tertandingi
dapat dicapai - 3 pmol dari asam aspartat dengan menggunakan metode
reaksi ninhydrin. Penentuan asam amino standar membutuhkan waktu
hanya 30 menit (bersih) dan penentuan cairan fisiologis dapat
dilaksanakan sepenuhnya secara otomatis hanya dalam 110 menit.
Asam Amino L-8900 Analyzer yang mampu menganalisis fisiologis
cairan dan protein hydrolysates. L-8900 dikendalikan oleh Elite untuk
Hitachi EZChrom AAA (dikembangkan oleh Hitachi berdasarkan data
kromatografi EZChrom EliteTM sistem) dan mendukung sistem
kromatografi dari berbagai produsen.
Bab 2 Bagian-Bagian Alat dan Spesifikasi
Bagian-bagian dari alat meliputi :
Gambar 1 Instrumen Analisis Asam Amino
a f
e
g
b
c
d h
Gambar 2 Komponen Instrumen Analisis Asam Amino
Keterangan :
a Autosempel
Dua contoh rak disediakan selama 2 x 60 sampel botol (1.5 ml
standar). Rak sampel dengan sampel termasuk didinginkan
dengan suhu konstan 10 ° C. Ekstraksi sampel akan dilakukan
melalui pompa suntik diprogram bebas 1 μL langkah-langkah
dalam kisaran 1-50 μL. Contoh ekstraksi dan injeksi bebas dari
kerugian. Seluruh volume sampel dipindahkan ke bagian atas
kolom pemisahan melalui katup injeksi motor. Setelah pembilasan
injeksi otomatis memastikan langkah pencegahan kontaminasi
silang. Ini didedikasikan xzy-drived autosampler menyuntikkan
hingga 120 sampel dengan variabel volume injeksi antara 1 dan
40 μL. Reproduktifitas tinggi dan integrasi sistem penuh menjamin
kinerja yang sangat bagus.
Gambar 3 Autosempler
b Pompa
Double-piston. Pompa menjamin rasio pencampuran reagen dan
buffer. Reaksi kinetik konstan untuk proses derivatization. Pompa
bekerja sampai dengan maksimum tekanan balik dari 400 bar.
Laju aliran programmable bebas 0,01-9,9 ml / menit. Laju aliran
standar adalah 0,2 ml / minwith sebuah reproduktifitas sebesar
0,1% (RSD).
c Degasser
Degassing dari semua diperlukan buffer dan reagen.
d Pembuangan Limbah
Tampungan dari limbah atau sisa-sisa hasil produk yang tidak
terpakai.
e Oven kolom
Menstabilkan dan memperoleh respon yang cepat karena adanya
efek pemanasan.
f Fotometer
Kolom sebagai pengiriman campuran. Fotometer mikro bekerja
sama dengan panjang gelombang 440nm dan 570 nm. Sistem
optik langsung terintegrasi ke dalam cara cairan. Sensitivitas
adalah empat kali lebih baik daripada fotometer lainnya. Volume
aliran melalui sel adalah 10 μL. Analog output dari kurang lebih 5
volts. Mengukur jarak dapat dipilih dalam dua tingkat, tinggi dan
rendah. dua atau lebih reagen ninhydrin tepat sebelum
derivatization asam amino.
g Reaktor
Tempat terjadinya reaksi kolom dengan berlian khusus
pengepakan.
h Botol buffer dan eluen
Buffer telah diisi dalam botol steril 500 mL. Sebuah flowthrough
steril untuk mencegah kontaminasi, yang dijamin melalui steril-
filter. Setiap botol dikendalikan melalui sistem elektro-optik dan
memperingatkan jika volume buffer habis.
Spesifikasi
Tabel 1 Spesifikasi Instrumen
Kinerja( Hasil pengukuran 5 sampel oleh hydrolyzate protein assay (standar) method)
Waktu analisis Approx. 30 menit (bersih)Reproduktifitas puncak waktu retensi
CV 0.3% (Arg), 0.5% (Ala)
Reproduktifitas dari daerah puncak
CV 1.0% (Gly, His)
Batas deteksi 3 pmol (S/N = 2, Asp)Analyzer
Kolom4.6 mm ID ' 60 mm L * ,dilengkapi dengan resin penukar ion
Pompapengiriman tekanan : 0-30 Mpa (0-3006 kgf/cm2), Rentang arus 0.000-0.999 mL/menit
Autusempler
Injeksi : langsung metode injeksi, Kapasitas botol sampel 1500 mL, Jumlah yang ditampung : 200 (200 ketika opsional pendingin diinstal), Volume injeksi sampel : 1-100 mL
Oven kolomSistem : Peltier, Rentang pengaturan suhu 20-85 (dalam 1 langkah)
Unit reaksiSistem pemanas elektronik (reaksi kolom), Pengaturan suhu : 50-140(dalam 1 langkah)
Fotometer Spektrofotometer : Aplantic cekung kisi difraksiElite untuk HITACHI EZChrom Amino Acid Analyzer
CPU 32 bit OS, Windows XP ®*CRT Layar warna 43.2 cmDimensi (termasuk PC) 900 (W) '650 (D)' 1050 (H) mmBerat (termasuk PC) Approx. 250 kgOperating temperatur range 15-35
Listrik115 V AC/220 240 V AC, 800 V A dan di atas, w/dalam 50/60, 0.5 Hz
Gas N2 N2 sumber gas harus siap
Bab 3 Standar Prosedur Pengoperasian dan Pemeliharaan
Cara pengoperasian
1. Hubungkan alat, computer dan printer ke sumber arus 220 V
2. Nyalakna computer dan printer terlebih dahulu setelah itu
nyalakan alat dengan menekan tombol on/off pada main unit
spektrofotometer.
3. Klik tombol start dan pilih program “EZ Chrom EliteTM”
4. Tampilan program akan muncul dan memberitahukan bahwa
proses inisialisasi sedang berlangsung. Pada proses ini terjadi
pemeriksaan secara self diagnostic dan apabila terjadi kesalahan
aka nada pesan yang muncul.
5. Tunggu hingga proses inisialisasi selesai ditandai dengan
munculnya tulisan ready
6. Masukkan sempel pada auto sempler
7. Setelah itu, keluarkan kuvet dan bersihkan dari pelarutnya
kemudian keringkan.
Klik tanda silang pada bagian kanan atas kemudian tekan tombol on/off
pada main menu alat
Pemeliharaan
1. Sumber arus yang digunakan harus sesuai, standarnya memiliki
tegangan
220 volt.
2. Usahakan memekai stabilizer agar arus yang mengalir pada alat
stabil dan
mengantisipasi akan kerusakan yang cepat apabila arus turun
naik.
3. Kuvet atau botol sempel yang digunakan harus kering dan bersih.
4. Penyimpanan kuvet yang benar (dengan alkohol).
5. Satu perangkat alat satu computer dan printer dalam
pengoperasiannya.
6. Buffer dan reagen yang digunakan harus murni, tanpa pengotor
karena dapat
merusak kolom ataupun alat.
Bab 4 Cara Preparasi Sampel, Pengolahan Data, dan
Aplikasi
Analisis asam amino adalah suatu proses untuk menentukan
jumlah asam amino yang masing-masing individu dalam suatu protein
atau peptida. Ada empat langkah dalam analisis asam amino:
1. Hidrolisis
2. Derivatisation
3. Pemisahan asam amino derivatised
4. Interpretasi data dan perhitungan
1. Hidrolisis
Sebuah jumlah yang dikenal (2nmols) standar internal
(norleucine) ditambahkan ke sampel. Norleucine karena tidak
secara alami terjadi dalam protein, stabil terhadap hidrolisis asam
dan dapat dipisahkan dari asam amino protein lain, itu membuat
standar internal yang sangat baik. Sampel, mengandung paling
sedikit 1 nmoles dari masing-masing asam amino (yaitu 2 ug
protein) kemudian ditransfer ke khusus hidrolisis furnaced
dibersihkan dan tabung dan dikeringkan dibawah vakum. Tabung
ditempatkan dalam sebuah botol berisi 5,7 N HCl dan sejumlah
kecil fenol dan protein dihidrolisis oleh uap HCl di bawah kondisi
vakum. Hidrolisis dilakukan selama 22-24 jam pada 110 deg. C.
Setelah hidrolisis, sampel ini dilarutkan dalam air suling yang
mengandung EDTA (untuk chelate ion logam) dan 20-40% dari
setiap sampel diletakkan di atas kaca asam amino analisa sampel
slide. Hidrolisis dapat memiliki berbagai efek pada asam amino
yang berbeda.
2. Derivatisation
Asam amino bebas tidak dapat dihidrolisis dpt dideteksi oleh HPLC
kecuali jika mereka telah derivatised. Proses ini memakan waktu
sekitar 30 menit per sampel. Larutan standar yang mengandung
jumlah yang diketahui (100 pmol) dari 17 Common asam amino
bebas juga dimuat di 3 atau 6 terpisah analisa asam amino bintik-
bintik dan derivatised sampel. Ini digunakan untuk menghasilkan
file kalibrasi yang dapat digunakan untuk menentukan kandungan
asam amino sampel. Setelah derivatisation, suatu larutan yang
mengandung metanol-asam amino PTC ditransfer ke sistem HPLC
bosan sempit untuk pemisahan.
3. Pemisahan
Asam amino dipisahkan pada fase terbalik C18 dan kolom silika
Kromofor PTC terdeteksi pada 254 nm. Semua asam amino akan
elute kira-kira 25 menit. Sistem buffer yang digunakan untuk
pemisahan adalah 120 mM sodium asetat pH 5.50 sebagai
penyangga A dan 70% asetonitril sebagai penyangga B. Program
ini dilaksanakan dengan menggunakan gradient buffer A dan B.
4. Interpretasi data dan perhitungan
Daerah puncak kromatografi diidentifikas menggunakan
Chromeleon ® Dionex analisis data sistem yang melekat pada
sistem analyzer asam amino. Sebuah file kalibrasi yang disediakan
digunakan dari nilai-nilai rata-rata retensi kali (dalam menit) dan
daerah (di (Au) dari asam amino pada standar 3-6 berjalan. Jumlah
masing-masing asam amino karena diketahui di-load ke analyzer,
faktor respons ((Au / pmol) dapat dihitung. faktor respons ini
digunakan untuk menghitung jumlah asam amino (dalam pmols)
dalam sampel. Jumlah setiap asam amino dalam sampel dihitung
dengan membagi puncak daerah masing-masing (dikoreksi untuk
absorptivitas molar yang berbeda dari berbagai asam amino)
dengan standar internal dalam kromatogram dan mengalikannya
dengan jumlah total standar internal ditambah kesampel asli.
Perangkat lunak yang kromatografi meramalkan kemungkinan
akan kembali ke Internal 2nmoles Standar (Nor Leu) dan dengan
demikian memberikan hasil untuk total jumlah yang Anda telah
pipetted ke tabung hidrolisis awalnya.
5. Mol persen mewakili jumlah masing-masing asam amino hadir
sebagai persentase dari total asam amino ditemukan dalam
sampel. Mol persen dapat bermanfaat untuk contoh dimana tidak
ada diketahui komposisi atau berat molekul, tidak spesifik berat
molekul, atau sampel mengandung campuran dari protein, asam
amino bebas da komponen lainnya.
[pmol individu asam amino] / [total pmol dari semua asam amino
dalam sampel] x 100 = mol persen dari masing-masing asam
amino.
Gambar 4 Langkah analis
Gambar 5 Diagram Kerja Alat
Gambar 6 Contoh Hydrolysate Analisis Protein - 50 Komponen Analisis
Asam amino dalam urin
Gambar 7 Contoh Hydrolisate Analisis Protein - 50 Asam Amino dalam Urine
Kondisi analisis Kolom : Transgenomic Lithium Amino Acid Column (for 63/7300
Systems) Flow Rate : 0.333 mL/min
Suhu : 32.5-63-80°C
Tekanan : 1200 PSIG
Detektor : Fluorescence
Injeksi : 20 µL
Contoh sampel yang terkandung meliputi PER, TAU, PETN, THR, GLU, GLY, LYS, HIS, LEU, TYR, PHE, NH3,BALA, BABA dan ALA.
Status analyzer screen (L-8900 Tab)
Mementau dan mengendalikan performmanual saat melihat status data.
Status analyzer screen (Option Tab)
Memonitor dan melakukan kontrol manual sementara status viewingthe
data.
Daftar Pustaka
Hitachi. 2009. Hitachi High Tech.[terhubung berkala].http://www.hitachi-hitec.com/global/science/lc/l8900.html. [ 26 Desember 2009]
Uci Davis Proteomics Core. Analisis Asam Amino. 2009. [terhubung berkala]. http://proteomics.ucdavis.edu/index.php?option=com_k2&id=58:aaa&view=item&Itemid=3. [ 26 Desember 2009]
VWR International Gmbh. 2009. Amino Acid Analyzer L-8900.[ terhubung berkala ]. http://www.linklab.gr/Uploads/VWR_AAA.Altar_GBfinal.pdf. [ 24 Desember 2009]
Anonim. 2009. Amino Acid Analyzer L-8900 [terhubung berkal]. http://www.hitachi-hhta.com/products/life-sciences-chemical-
analysis/amino-acid-analyzer/l-8900-dedicated-amino-acid-analyzer.[23 Desember 2009]