Post on 09-Oct-2015
description
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
1/14
Laporan Praktikum Hari/Tanggal : Jumat/ 29 November 2013
Struktur an !ung"i #iomolekul $aktu : 0%&00'11&00 $(#
PJP : (na Set)a*ati+ S&TP+ ,&Si
-"i"ten : Syahrul Mustofa
-nie"ti .*i !auia
Salmi
ASAM NUKLEAT
Penentuan Konsentrasi RNA dan DNA dalam Homogenat
Hati Tikus
elompok #
Lulu Atul !itriyah "#$%%&&''
ma Lina*ati 4%110010
.*i Nugraa !& 4%110056
-mellia 4%1100%7
DEPARTEMEN ()*K)M)A
!AKULTAS MATEMAT)KA DAN )LMU PEN"ETAHUAN ALAM
)NST)TUT PERTAN)AN (*"*R
(*"*R
+&%'
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
2/14
Pendahuluan
-"am nukleat aala makromolekul biokimia )ang komplek"+ berbobot
molekul tinggi+ an ter"u"un ata" rantai nukleotia )ang menganung in8orma"i
genetik& -"am nukleat )ang paling umum aala a"am eok"iribonukleat .N-
an a"am ribonukleat;N-& -"am nukleat itemukan paa "emua "eliup an
viru"& -"am nukleat beraa i alam inti nukleu" "elNgili 2009& -"am nukleat
merupakanbiopolimerengan monomerpen)u"unn)a aala nukleotia& Setiap
nukleotia teriri ata" tiga komponen )aitu "ebua ba"a nitrogen+ gulapento"a+
an gugu"8o"8at& #a"a nitrogen bera"al ari kolompok purin an pirimiin& Purin
utama a"am nukleat aala aenin an guanin+ "eangkan pirimiinn)a aala
"ito"in+ timin+ an ura"il& Nukleotia merupakan nukleo"ia )ang gugu" gula paa
po"i"i 5'n)a mengikat gugu" 8o"8at engan ikatan e"ter& Nukleo"ia teriri ata"
pento"a eok"iribo"a atau ribo"a )ang mengikat "uatu ba"a erivat purin atau
pirimiin melalui ikatan gliko"ia& Nukleo"ia merupakan nukleotia )ang tiak
ter8o"8orila"i tiak berikatan engan 8o"8at Ngili 2009&
-"am nukleat alam "el aa ua
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
3/14
t;N-& ,a"ing'ma"ing teriri ata" "atu untai ribonukleotia an mempun)ai
molekul urutan nukleotia "erta 8ung"i biologi" )ang ka" Poe
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
4/14
praktikum )aitu paa ari Jumat+ tanggal 22 an 29 November 2013 pukul 0%&00'
11&00 $(#&
#eberapa alat an baan igunakan alam praktikum ini& -lat'alat )ang
igunakan alam praktikum aala bak e"+ gela" piala+ tabung "entri8u"+
"entri8ugator+ pipet ,or+ bulb+ penanga" air+stopwatch+ lemari peningin+ pipet
tete"+ vorteA+ tabung mikro8u"+ mikro8ugator an "pektro8otometer+ "eangkan
baan'baan )ang igunakan alam praktikum meliputi omogenat ati+ e" batu+
larutan H?l@0&7 ,+ larutan @H 0&3 ,+ larutan H?l@ 1&2 ,+ akuae"+ larutan
H?l@ 0&2 ,+ pereak"i or"inol+ larutan "tanar ;N- 125 Bg/mL alam T?- 10C+
pereak"i i8enilamin+ larutan T?- 10C+ an larutan "tanar 500 Bg/mL&
Penentuan konsentrasi RNA dalam homogenat hati,Seban)ak 2&5 mL
omogenat ati "api ipipet an ima"ukkan ke alam tabung "entri8u" )ang tela
iinginkan+ kemuian itambakan 2&5 mL larutan H?l@0&7 , ingin& Setela
iko=ok "ampai rata+ i"impan i alam bak beri"i e" batu "elama 10 menit lalu
i"entri8u" paa ke=epatan 5000 rpm "elama 10 menit& Supernatan )ang terbentuk
ibuang+ lalu pelet )ang terbentuk i"u"pen"ikan engan mL @H 0&3 ,
kemuian ima"ukkan ke alam penanga" air paa "uu 0 o? "elama 0 menit&
Selan
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
5/14
larutan "tanar ;N-+ 3 mL pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "uu 100 o?
"elama 20 menit an itambakan akuae" "eban)ak 3&5 mL& emuian
iinginkan i alam e" "ebentar+ lalu iukur ab"orban"in)a engan menggunakan
"pektro8otometer paa pan
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
6/14
nukleatn)a+ 2memi"akan a"am nukleat ari komponen "el )ang lain+ an
3pemurnian a"am nukleat& ("ola"i 8ragmen .N- atau ;N- "pe"i8ik ari genom
"uatu organi"me apat igunakan untuk menentukan "ekuen" ba"a an mengetaui
8ung"in)a& Taapan pertama )ang aru" ilakukan untuk mengi"ola"i .N- aala
engan meru"ak "el terlebi aulu& Peru"akan "el ter"ebut apat ilakukan
engan =ara mekanik )aitu iblener atau menggunakan baan kimia untuk
menegraa"i an melarutkan komponen ining "el& .N- akan terpi"a menE #intang 2010&
Homogenat ati igunakan alam per=obaan a"am nukleat ini karena "el
ati menganung berbagai ma=am organel+ terutama inti "el& (inti "el ban)ak
menganung a"am nukleat )ang akan igunakan alm per=obaan "eingga akan
lebi mua untuk menapatkan i"olatn)a& Selain itu+ ati mempun)ai 8ung"i
penting alam pro"e" metaboli"me tubu )aitu ati memiliki peranan alam
men"inte"i" protein& Paa organ ati+ "inte"i" proteinn)a tinggi "eingga tingkat
;N-n)a
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
7/14
ber8ung"i untuk pengenapan a"am nukleat )ang merupakan makromolekul alam
per=obaan&
Per=obaan penentuan kon"entra"i ;N- illakukan pula penambaan
reagen or"inol )ang bertu
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
8/14
4ambar 1 urva "tanar kon"entra"i ;N-
Tabel 2 on"entra"i ;N- ati a)am
Eolume "ampelmL
- terukur - terkorek"i
G;N- Bg/mL
Penggunaan kurva"tanar
Penggunaan "tanartunggal
0&2 0&1%6 0&1%5 &0070 76&02%00&3 0&276 0&275 &036 97&015
?onto peritungan paa "ampel 0&2 mL:
a& on"entra"i ;N- engan penggunaan kurva "tanar
) I a bA
- terkorek"iI a bA
0&1%5 I ' 10&751 5&111 A
A I 0&2003
!P I I 20
G;N- I A &!P
G;N- I 0&2003&20 I &0070 Bg/mL
G;N- rata'rata I Bg/mLI &020 Bg/mL
b& on"entra"i ;N- engan penggunaan "tanar tunggal
I
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
9/14
I
G"ampelI I 3&351 Bg/mL
G;N- I on"entra"i "ampel A !P
I 3&351 A 20
I 76&02%0 Bg/mL
G;N- rata'rata I Bg/mLI %1&5213 Bg/mL
#era"arkan per=obaan+ kaar ;N- iitung engan per"amaan kurva
"tanar ) I 5&111A ' 10&751 engan nilai ;K "ebe"ar 0&%5% "eingga iperole
kaar ;N- ati paa "ampel 2 an "ampel 3 berturut'turut )aitu &0070 Bg/mL
an &036 Bg/mL "erta G;N-rata'ratan)a aala &020 Bg/mL "eangkan
a"il peritungan engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&015
Bg/mL engan G;N-rata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& Ha"il kurva "tanar
menun
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
10/14
0&% 0&129 0&12% 100&00
1&0 0&167 0&165 125&00
?onto peritungan:E1 A ,1 I E2A ,2
0&2 mL A 250 Bg/mL I mL A ,2
,2 I
,2 I 12&50 Bg/mL
Tabel on"entra"i .N- ati a)am
Eolume "ampel
mL
-terukur -terkorek"i
G.N- Bg/mL
Penggunaan kurva"tanar
Penggunaan "tanartunggal
0&5 0&195 0&192 37%0 1030&0291&0 0&323 0&320 720 1617&63%2
?onto peritungan paa "ampel 0&5 mL:
a& on"entra"i .N- engan penggunaan kurva "tanar
) I a bA
- terkorek"i I 0&00% 0&001 A
0&192 I 0&00% 0&001 A
A I 1%
!P I I 20
G.N- I A &!P
G.N- I 1% &20 I 37%0 Bg/mL
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
11/14
G.N- rata'rata I Bg/mLI 970 Bg/mL
b& on"entra"i .N- engan penggunaan "tanar tunggal
I
I
on"entra"i "ampel I I 51&5021
G.N- I on"entra"i "ampel A !P
I 51&5021 Bg/mL A 20
I 1030&029 Bg/mL
G.N- rata'rata I Bg/mLI 1363&3907 Bg/mL
;atio ;N-/.N- kurva "tanarI ;ata'rata ;N-/rata'rata .N- A 100C
I &020/970 g/mL A 100C
I 0&0%11 C
;atio ;N-/.N- "tanar tunggalI ;ata'rata ;N-/rata'rata .N- A 100C
I %1&5213/1363&3907 g/mL A 100C
I 5&935% C
#era"arkan per=obaan+ per"amaan kurva "tanar .N- aala ) I 0&001A
0&00% engan nilai ;K "ebe"ar 0&950 "eingga iperole kaar .N- ati paa
"ampel 0&5 mL an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala 37%0 Bg/mL an 720
Bg/mL sertaG.N-rata'ratan)a aala 970 Bg/mL "eangkan a"il peritungan
engan "tanar tunggal "ebe"ar 1030&029 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL serta
G.N-rata'ratan)a aala 1363&3907 Bg/mL& aar .N- alam ati lebi be"ar
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
12/14
aripaa kaar ;N-& on"entra"i .N- lebi be"ar aripaa ;N- karena i
alam "el kuran pori
agaro"e "e"uai untuk pemi"aan polimer a"am nukleat )ang ter"u"un ari ratu"an
nukleotia& Selain itu+ apat engan menggunakan pereak"i #ra8or& Si8at reagen
ini lebi prakti" an "en"iti8+ "elain itu
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
13/14
"erta G;N-rata'ratan)a aala &020 Bg/mL "eangkan a"il peritungan
engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&015 Bg/mL engan
G;N-rata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& aar .N- ati paa "ampel 0&5 mL
an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala 37%0 Bg/mL an 720 Bg/mL "erta
G.N-rata'ratan)a aala 970 Bg/mL "eangkan a"il peritungan engan
"tanar tunggal "ebe"ar 1030&029 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL "erta G.N-rata'
ratan)a aala 1363&3907 Bg/mL "eingga kaar .N- lebi be"ar aripaa kaar
;N-& #era"arkan peritungan+ iketaui pula ra"io ;N- engan .N- alam
ati "ebe"ar 0&0%11 C paa peritungan kurva "tanar an 5&935% C engan
"tanar tunggal&
Daftar Pustaka
#intang& 2010&Biokimia: Teknik Penelitian& Jakarta: rlangga&
#ra8or ,,& 1967& - ;api an Sen"itive ,eto 8or te Muanti8i=ation o8
,i=rogram Muantitie" o8 Protein >tiliing te Prin=iple o8 Protein')e
#ining&Journalof Analytical Biochemistry 62: 2%'25&
?ampbell N-+ ;ee=e',it=ell&2002& Biologi disi !elima"Jilid #& Penerbit:
rlangga
oolman J an ;oem H& 2005& Colour Atlas of Biochemistry $nd
d& Ne* Dork:Tieme&
Leninger -L& 200& %asar"%asar Biokimia Jilid #& ,agg) Tena*i
5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc
14/14