LAPORAN MIKROBIOLOGI 5

7/21/2019 LAPORAN MIKROBIOLOGI 5

1/13

NAMA

NIM

KEL. PRAKTIKUM

JUDUL

DOSEN PEMBIMBING

:

:

:

:

:

FITRIA EKA NURAINI

08121006010

GANJIL

PENETAPAN POTENSI ANTIBIOTIK

Dr. BUDI UNTARI, M.Si, Apt

Dr. MUNAWAR, M.Si.

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU

PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SRIWIJAYA

2013

LAPORAN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI


2/13

LAPORAN MIKROBIOLOGI

I.

JUDUL PRAKTIKUM : PENETAPAN POTENSI ANTIBIOTIK

II. TUJUAN PRAKTIKUM

Menentukan besarnya respon mikroba uji terhadap sampel antibiotika.

III. PRINSIP KERJA

Melihat dan mengetahui besarnya respon mikroba uji terhadap sampel

antibiotika.

IV. TINJAUAN PUSTAKA

Zat antimikroba adalah senyawa yang dapat membunuh atau menghambat

pertumbuhan mikroorganisme. Zat antimikroba dapat bersifat membunuh

mikroorganisme (microbicidal) atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme

(microbiostatic). Disinfektan yaitu suatu senyawa kimia yang dapat menekan

pertumbuhan mikroorganisme pada permukaan benda mati seperti meja, lantai

dan pisau bedah. Adapun antiseptik adalah senyawa kimia yang digunakan untuk

menekan pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan tubuh, misalnya kulit.

Efisiensi dan efektivitas disinfektan dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu:

Konsentrasi, Waktu terpapar, Jenis mikroba, Kondisi lingkungan: temperatur, dan

pH dan jenis tempat hidup.

Pada awalnya antibiotika diisolasi dari mikroorganisme, tetapi sekarang

beberapa antibiotika telah didapatkan dari tanaman tinggi atau binatang. Suatu zat

antibiotik kemoterapeutik yang idealnya hendaknya memiliki sifat-sifat sebagai

berikut: harus mempunyai kemampuan untuk merusak atau menghambat

mikroorganisme patogen spesifik. Makin besar jumlah dan macammikroorganisme yang dipengaruhi makin baik. Tidak mengakibatkan

berkembangnya bentuk-bentuk resiten parasit. Sehingga memungkinkan mikroba

yang biasanya nonpatogenik atau bentuk-bentuk patogenik yang

semuladikendalikan oleh flora normal, untuk menimbulkan infeksi baru (Pelczar

1988).

Antibiotika pertama kali ditemukan oleh Alexander Fleming pada tahun

1929, yangsecara kebetulan menemukan suatu zat antibakteri yang sangat efektif

yaitu penisilin. Penisilin ini pertama kali dipakai dalam ilmu kedokteran tahun

1939 oleh Chain dan Florey. antbiotik ialah suatu bahan kiia yang dikeluarkan


3/13

oleh jasadrenik/hasil sintetis semi-sintetis yang mempunyai struktur yang sama

dan zat ini dapatmerintangi/memusnahkan jasad renik lainnya. Antibiotik yang

efektif bagi banyak spesies bakteri, baik kokus, basil maupun spiril,dikatakan

mempunyai spektrum luas. Sebaliknya, suatu antibotik yang hanya efektif untuk

spesies tertentu, disebut antibiotik yang spektrumnya sempit. Penisilin hanya

efektif untuk memberantas terutama jenis kokus, oleh karena itu penisilin

dikatakan mempunyai spektrum yang sempit. Tetrasiclin efektif bagi kokus, basil

dan jenis spiril tertentu. Oleh karena itutetrasiclin dikatakan mempunyai spectrum

luas (Dwidjoseputro, 2003).

Sebagianbesar dari antibiotika rumus kimianya telah diketahui dan beberapa

di antaranya dapat dibuatsecara sintesis. Definisi dari senyawa antimikroba adalah

senyawa kimia yang dapat menghambatpertumbuhan atau membunuh mikroba.

Antimikroba dapat dikelompokkan menjadi antiseptikdan desinfektan. Antiseptikadalah pembunuh mikroba dengan daya rendah dan biasa digunakanpada kulit,

misalnya alkohol dan deterjen. Desinfektan adalah senyawa kimia yang

dapatmembunuh mikroba dan biasa digunakan untuk membersihkan meja, lantai,

dan peralatan.Contoh desinfektan yang digunakan adalah senyawa klorin,

hipoklorit, dan tembaga sulfat. Bahan kimia yang umum digunakan sebagai

pembersih atau sanitiser dalam industrypangan biasanya mengandung klorin

sebagai bahan aktifnya. Bahan kimia yang dapat digunakanuntuk menghambat

pertumbuhan mikroba disebut bahan pengawet (preservatif) (Afrianto, 2008).

Asam benzoat adalah zat pengawet yang sering dipergunakan dalam saosdan sambal. Asambenzoat disebut juga senyawa antimikroba karena tujuan

penggunaan zat pengawet ini dalamkedua makanan tersebut untuk mencegah

pertumbuhan khamir dan bakteri terutama untuk makanan yang telah dibuka dari

kemasannya (Lutfi, 2004).

Sensitifitas menyatakan bahwa uji sentifitas bakteri merupakan suatu

metode untuk menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan

untuk mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Metode Uji

sensitivitas bakteri adalah metode cara bagaimana mengetahui dan mendapatkan

produk alam yang berpotensi sebagai bahan anti bakteri serta mempunyai

kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau mematikan bakteri pada

konsentrasi yang rendah. uji sentivitas bakteri merupakan suatu metode untuk

menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri dan untuk

mengetahui senyawa murni yang memiliki aktivitas antibakteri. Seorang ilmuan

dari perancis menyatakan bahwa metode difusi agar dari prosedur Kirby-Bauer,

sering digunakan untuk mengetahui sensitivitas bakteri. Prinsip dari metode ini

adalah penghambatan terhadap pertumbuhan mikroorganisme, yaitu zona

hambatan akan terlihat sebagai daerah jernih di sekitar cakram kertas yang

mengandung zat antibakteri. Diameter zona hambatan pertumbuhan bakteri


4/13

menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap zat antibakteri. Selanjutnya dikatakan

bahwa semakin lebar diameter zona hambatan yang terbentuk bakteri tersebut

semakin sensitif (Gaman, dkk. 1992).

Pada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas bakteriadalah metode Difusi Agar yaitu dengan cara mengamati daya hambat

pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitar

kertas cakram (paper disk) yang tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme. Zona

hambatan pertumbuhan inilah yang menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap

bahan anti bakteri (Jawelz, 1995).

Tujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk mengetahui obat-obat

yang paling cocok (paling poten) untuk kuman penyebab penyakit terutama pada

kasus-kasus penyakit yang kronis dan untuk mengetahui adanya resistensi

terhadap berbagai macam antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap antibiotik

yakni memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang diberikan, akibat

pemberian dosis dibawah dosis pengobatan dan akibat penghentian obat sebelum

kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh antibiotic (Dwidjoseputro, 1998).

Antibiotik adalah zat-zat kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri yang

memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman-kuman

sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil. Para peneliti diseluruh dunia

memperoleh banyak zat lain dengan khasiat antibiotik namun berhubung dengan

adanya sifat toksis bagi manusia, hanya sebagian kecil saja yang dapat digunakansebagai obat diantaranya adalah streptomycin vial injeksi, Tetrasiklin kapsul,

Kanamicin kapsul, Erytromicin kapsul, Colistin tablet, Cefadroxil tablet dan

Rifampisin kapsul (Djide, 2003).

Kegiatan antibiotika untuk pertama kalinya ditemukan oleh sarjana Inggris

dr. Alexander Flemming pada tahun 1928 (penisilin). Penemuan ini baru

dikembangkan dan dipergunakan dalam terapi di tahun 1941 oleh dr.Florey

(Oxford) yang kemudian banyak zat lain dengan khasiat antibiotik diisolir oleh

penyelidik-penyelidik di seluruh dunia, akan tetapi berhubung dengan sifat

toksisnya hanya beberapa saja yang dapat digunakan sebagai obat (Djide, 2003).

Antibiotik digunakan untuk membasmi mikroba penyebab terjadinya

infeksi. Gejala infeksi terjadi akibat gangguan langsung oleh mikroba dan

berbagai zat toksik yang dihasilkan mikroba. Pada dasarnya suatu infeksi dapat

ditangani oleh sistem pertahanan tubuh, namun adakalanya sistem ini perlu

ditunjang oleh penggunaan antibiotik. Antibiotik yang digunakan untuk membasni

mikroba penyebab infeksi pada manusia, harus memiliki sifat toksisitas selektif.

Artinya antibiotik harus bersifat toksik untuk mikroba, tetapi relatif tidak toksik

untuk hospes. Toksisitas selektif tergantung kepada struktur yang dimiliki sel

bakteri dan manusia misalnya dinding sel bakteri yang tidak dimiliki oleh sel


5/13

manusia, sehingga antibiotik dengan mekanisme kegiatan pada dinding sel bakteri

mempunyai toksisitas selektif relatif tinggi (Ganiswarna, 1995).

Sensitivitas bakteri terhadap antibiotik tergantung kapada kemampuan

antibiotik tersebut untuk menembus dinding sel bakteri. Antibiotik lebih banyakyang efektif bekerja terhadap bakteri Gram positif karena permeabilitas dinding

selnya lebih tinggi dibandingkan bakteri Gram negatif. Jadi suatu antibiotik

dikatakan mempunyai spektrum sempit apabila mampu menghambat pertumbuhan

bakteri Gram positif, sedangkan antibiotik berspektrum luas jika pertumbuhan

bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif dapat dihambat oleh antibiotik

tersebut (Sumadio, dkk. 1994).

Berdasarkan sasaran tindakan antibiotik terhadap mikroba maka antibiotik

dapat dikelompokkan menjadi lima golongan yaitu antibiotik penghambat sintesis

dinding sel mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah penisilin,

sefalosporin, basitrasin, dan vankomisin. Yang kedua yaitu antibiotik penghambat

sintesis protein sel mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah

golongan aminoglikosida, makrolida, kloramfenikol, linkomisin dan tetrasilin.

Yang ketiga yaitu antibiotik penghambat sintesis asam nukleat sel mikroba,

antibiotik yang termasuk kelompok ini ialah rifampisin dan golongan kuinolon.

Keempat yaitu antibiotik pengganggu fungsi membran sel mikroba, antibiotik

yang termasuk kelompok ini ialah golongan polien. Dan yang kelima yaitu

antibiotik penghambat metabolisme mikroba, antibiotik yang termasuk kelompok

ini ialah sulfonamida, trimetoprin dan asam p-amino salisilat (Ganiswarna, 1995).

Zona Hambat merupakan tempat dimana bakteri terhamabat

pertumbuhannya akibat antibakteri atau antimikroba. Zona hambat adalah daerah

untuk menghambat pertumbuhan mikroorrganisme pada media agar oleh

antibiotik. Contohnya: tetracycline, erytromycin, dan streptomycin. Tetracycline

merupakan antibiotik yang memiliki spektrum yang luas sehingga dapat

menghambat pertumbuhan bakteri secara luas (Pelczar, 1986).


6/13

V. PROSEDUR KERJA

Alat :

Pipet agar, pipet ukur, pipet tetes Erlenmeyer

Ose bundar

Tabung reaksi dan raknya

Cawan petri

Pinset

Pecadang logam

Incubator

Jangka sorong

Bunsen

Bahan :

Nutrient agar

Aquadest steril

Suspense bakteri dengan transmitan 25%

Sampel uji

Ampisilin standart

PROSEDUR

1. Nutrient agar

Nutrient agar

diberi

Inokula bakteri uji dengan setiap 100 ml agar + 2 ml suspense mikroba

dihomogenkan, dituang

Ke cawan petri 20 ml dan dibiarkan memadat

2. Persiapan ampisilin standart

Larutan ampiilin

dibuat


7/13

Dalam aquadest steril dengan konsentrasi 100 g / ml

diencerkan

Dengan larutan dapar pH 8 dan didapat dosis S1-S5

3. Persiapan larutan uji

Larutan uji

dibuat

Dengan dosis sama seperti S3 / R

4.

Setelah agar

diinokula

Memadat, letakkan pecadang logam

diatas

Agar

ditetesi

Larutan standart dan larutan uji, masing-masing 0,01 ml pada tiap pecadang

yang bertanda sama dengan larutan yang diteteskan

5. Pre-inkubasi pada suhu kamar

2030 menit

diinkubasi

Pada suhu 370C selama 2 x 24 jam

6. Pengamatan

Pengamatan

dilakukan

Terhadap diameter hambat. Hitung menggunakan regresi.


8/13

VI. HASIL PENGAMATAN

Penetapan Potensi Antibiotik

Bakteri

Panjang Diameter

K1 K2 K3 K4 K5

E. coli 1,5 cm 2 cm 2,4 cm 3,3 cm -

Salmonella 2,6 cm 2,2 cm 1,8 cm 1,6 cm -

Keterangan :

K1 : larutan antibiotic 500 ppm




K5 : etanol 95%


9/13

VII. PEMBAHASAN

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan tentang pengujian antibiotik,

maka dapat diketahui bahwa antibiotik adalah bahan yang dihasilkan oleh

mikroorganisme atau sintetis yang dalam jumlah kecil mampu menekanmenghambat atau membunuh mikroorganisme lainnya. Antibiotik memiliki

spektrum aktivitas antibiosis yang beragam. Sensitivitas suatu bakteri terhadap

antibiotik ditentukan oleh diameter zona hambat yang terbentuk. Semakin besar

diameternya maka semakin terhambat pertumbuhannya, sehingga diperlukan

standar acuan untuk menentukan apakah bakteri itu resisten atau peka terhadap

suatu antibiotik.

Pada pengujian yang telah dilakukan, terbentuk zona bening disekitar

piper disk. Ini menunjukan bahwa antibiotik yang digunakan berpotensi

menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella thypii. Bakteri Grampositif meliputi bakteri koken (streptokokus, stafilokokus), basilus (saprofit),

spiral (treponema dan leptospira), batang (korinebakteria) dan lain-lain.

Antibiotik ialah zat yang dihasilkan oleh suatu mikroba, terutama fungi,

yang dapat menghambat atau dapat membasmi mikroba jenis lain. Banyak

antibiotik dewasa ini dibuat secara semisintetik atau sintetik penuh. Namun

dalam praktek sehari - hari AM sintetik yang tidak diturunkan dari produk

mikroba (misalnya sulfonamida dan kuinolon) juga sering digolongkan sebagai

antibiotik. Resisten adalah dalam konsentrasi antimikroba yang sangat besar atau

dalam konsentrasi berapa pun,ia tidak dapat menghambat ataupun membunuh

mikroorganisme. Sensitivitas adalah suatu keadaan dimana mikroba sangat peka

terhadap antibiotik. Atau sensitivitas adalah kepekaan suatu antibiotik yang masih

baik untuk memberikan daya hambat terhadap mikroba. Uji sensitivitas terhadap

suatu antimikroba untuk dapat menunjukkan pada kondisi yang sesuai dengan

efek daya hambatnya terhadap mikroba. Suatu penurunan aktivitas antimikroba

akan dapat menunjukkan perubahan kecil yang tidak dapat ditunjukkan oleh

metode kimia, sehingga pengujian secara mikrobiologis dan biologi dilakukan.

Biasanya metode merupakan standar untuk mengatasi keraguan tentang

kemungkinan hilangnya aktivitas antimikroba.

Intermediat adalah suatu keadaan dimana terjadi pergeseran dari keadaan

sensitive ke keadaan yang resisten tetapi tidak resisten sepenuhnya. Sedangkan

resisten adalah suatu keadaan dimana mikroba sudah peka atau sudah kebal

terhadap antibiotik. Uji sensitivitas antibiotik terhadap berbagai macam mikroba

dilakukan untuk mengetahui apakah suatu antibiotik dapat membunuh beberapa

jenis mikroba atau berspektrum luas atau hanya dapat membunuh satu jenis

mikroba saja yang disebut berspektrum sempit. Karena adanya beberapa penyakit

yang tidak cocok dengan antibiotik terhadap penyakit yang fatal, serta

berhubungan dengan waktu inkubasi untuk melihat antibiotik mana yang kerjanya


10/13

lebih cepat menghambat atau membunuh mikroba. Ada tiga metode utama tes

sensitivitas antimikroba atau antibiotic yaitu Broth Dilution (pengenceran

medium), Agar Dilution (pengenceran agar), Agar diffusion (difusi agar/disc

difusion). Dan dalam percobaan ini yang dilakukan adalah menggunakan metode

agar difusion dimana metode ini didasarkan pada difusi antibiotic dari paper disk

yang dipasang tegak lurus pada lapisan agar padat dalam cawan petri sehingga

mikroba yang ditambahkan dihambat pertumbuhannya pada daerah berupa

lingkaran atau zona yang disekeliling peper disk yang berisi larutan antibniotik.

Pada percobaan ini, uji sensitivitas antimikroba dilakukan dengan metode

difusi agar. Karena selain pengerjaan di laboratorium mudah,tidak rumit,peralatan

yang di gunakan juga lebih sederhana. Selain itu pengerjaan dengan metode difusi

agar sudah sering dilakukan dan mudah untuk mengamati daya hambat

pertumbuahan mikroba oleh suatu antibiotic. Digunakan medium agar karena agarmerupakan medium yang baik untuk semua jenis mikroba karena di dalamnya

mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam

amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast mensuplai

vitamin B kompleks. Semakin rendah konsentrasi antibiotik yang digunakan maka

semakin kecil zona bening yang akan terbentuk dan semakin tinggi konsentrasi

yang digunakan maka zona bening yang terbentuk semakin besar. Bakteri yang

digunakan adalah Escherichia coli (gram negatif) dan Salmonella thypii (gram

positif).

Setelah diinkubasi selama 24 jam, nilai diameter zona hambatan rata-ratapada kontrol dan konsentrasi 500 ppm, 1.000 ppm serta 1.500 ppm, dan 2000 ppm

dari bakteri Escherichia coliberturut-turut adalah 1,5 cm, 2 cm, 2,4 cm dan 3,3

cm, sedangkan pada bakteri Salmonella thypii berturut-turut adalah 2,6 cm, 2,2

cm, 1,8 cm dan 1,6 cm. Berdasarkan data yang diperoleh, dapat disimpulkan

bahwa hasil pengamatan telah sesuai dengan pustaka yang menyebutkan bahwa

semakin tinggi konsentrasi antibiotika maka semakin besar zona bening yang

dihasilkan untuk Escherichia colidan untuk Salmonella thypiimalah sebaliknya

(Dwidjoseputro, 2003).

Amoxicilin yang merupakan turunan dari penisilin adalah antibiotika yang

memiliki aktivitas kuat terhadap bakteri gram positif. Mekanisme kerja dari

Amoxicilin adalah menghambat sintesis dinding sel dengan cara mencegah ikatan

silang peptidoglikan pada tahap akhir sintesis dinding sel sehingga protein

pengikat penisilin (penicillin binding protein) terhambat. Protein ini merupakan

enzim dalam membran plasma sel bakteri yang secara normal terlibat dalam

penambahan asam amino yang berikatan silang dengan peptidoglikan dinding sel

bakteri dan mengeblok aktivitas enzim transpeptidase yang membungkus ikatan

silang polimer-polimer gula panjang yang membentuk dinding sel bakteri

sehingga dinding sel menjadi rapuh dan mudah lisis (Pratiwi, 2008).


11/13

VIII. KESIMPULAN

1. Terbentuknya zona bening atau zona hambat yang menandakan adanya

potensi dari antibiotik yang digunakan dalam menghambat dan membunuh

bakteri gram positif yaitu Salmonella thypii.

2. Pengaruh konsentrasi antibiotika terhadap pertumbuhan bakteri adalah

semakin besar konsentrasi dari antibiotika maka kemampuan antibiotika

untuk menghambat atau membunuh bakteri akan semakin besar (efektifitas

kerja antibiotia meningkat).

3. Metode yang dapat digunakan dalam assei mikrobiologi antara lain metode

kertas saring (Kirby dan Bauer) dan metode d`Aubert.


12/13

DAFTAR PUSTAKA

Afrianto, Eddy. 2008. Pengawasan Mutu Bahan/Produk Pangan. Jakarta:

Departemen Pendidikan Nasional.

Djide, M.N. 2003.Mikrobiologi Farmasi. Jurusan Farmasi Unhas, Makassar.

Dwidjoseputro, 2003.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Gaman, P. M., dan Sherrington, K. B. 1992. Ilmu Pangan : Pengantar Ilmu

Pangan, Nutrisi, dan Mikrobiologi, Edisi Kedua. Yogyakarta:

UGMPress.

Ganiswarna, S.G. 1995. Farmakologi dan Terapi Edisi 4. Bagian Farmakologi

Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.

Jawetz, G., Melnick, J. L., dan Adelberg, E. A. 1991.Mikrobiologi untuk Profesi

Kesehatan. Jakarta, EGC.

Lutfi, Ahmad. 2004. Kimia Lingkungan. Jakarta: Departemen Pendidikan

Nasional.

Pelczar. 1988.Dasar-Dasar Mikrobiologi 2. Jakarta: Universitas Indonesia Press.

Pratiwi, Silvia T. 2008.Mikrobiologi Farmasi. Erlangga. Jakarta.

Sumadio, H., dan Harahap. 1994. Biokimia dan Farmakologi Antibiotika. Jakarta

: Airlangga University Press.


13/13

LAMPIRAN

Salmonella thypii Escherichia coli

LAPORAN MIKROBIOLOGI 5

Documents

Transcript of LAPORAN MIKROBIOLOGI 5