Laporan Analisis Mikrobiologi

8/19/2019 Laporan Analisis Mikrobiologi

1/26

Laporan Analisis Mikrobiologi

BAB 1. PENDAHULUAN1.1 Latar Belakang

Mikroorganisme adalah makhluk yang sangat kecil dan hanya dapat dilihat di bawah

mikroskop. Perhitungan jumlah sel mikroba dapat dinyatakan dengan dua cara, yaitu perhitungan

jumlah sel dan massa sel. Untuk hitungan jumlah sel diantaranya secara mikroskopik, metode

cawan dan MPN (Most Probable Number). Sedangkan untuk hitungan massa sel meliputi caea

olumetrik, graimetri, dan turbidimetri.

!itungan secara mikroskopik menggunakan alat pembesar untuk menghitung jumlah sel.

Sedangkan hitungan cawan dan MPN memerlukan media tumbuh tertentu untuk sejumlahcuplikan suspensi mikroba yang ditumbuhkan dalam " sampai # hari pada suhu ruang kemudian

baru dihitung jumlah selnya.Untuk mementukan jumlah mikroba golongan tertentu dengan menggunkan media khusus,

misalnya untuk penentuan jumlah kapang dengan P$%, total mikroba dengan P&%, dan untuk

khamir'yeast dengan M%. Perlu diperhatikan dalam penentuan jumlah mikroba yang

menggunakan media tumbuh adalah kondisi steril media, peralaan ukur, dan peralatan bantu.

Perhitungan massa sel menggunakan neraca analitik untuk menimbang massa sel kering dari

sejumlah cuplikan suspensi sel mikroba yang telah dikeringkan, maka dalam hal ini jugamenggunakan alat ukur olumetrik. Untuk metode pengukuran massa sel tidak diperlukan media

tumbuh, kecuali dengan menggunakan metode spektro*otometer yaitu digunakan untuk

menumbuhkan sel mikroba yang dipakai untuk pembuatan kura standart. Untuk itu, perlu

dilakukan praktikum untuk mengetahui dan menganalisis secara kulitati* maupun kuantitati* sel

mikroba.

1.2 Tujuan

". Untuk mengetahui caramenyiapkan peralatan dan media tumbuh yang steril untuk digunakan

pada penentuan jumlah sel mikroba

#. Untuk mengetahui cara menghitung jumlah atau massa sel mikroba dari berbagai golongan

+. Untuk mengetahui cara menentukan jenis sel mikroba, misalnya bakteri pembentuk asam

organik (asam asetat'laktat)


2/26

BAB 2. TINAUAN PU!TA"A

2.1 Ma#a$%$a#a$ Meto&e Per'itungan Mikroba

Mikroba ialah jasad renik yang mempunyai kemampuan sangat baik untuk bertahan

hidup. asad tersebut dapat hidup hamper di semua tempat di permukaan bumi. Mikroba mampu

beradaptasi dengan lingkungan yang sangat dingin hingga lingkungan yang relatie panas, dari

ligkungan yang asam hingga basa. -erdasarkan peranannya, mikroba dapat dikelompokkan

menjadi dua, yaitu mikroba menguntungkan dan mikroba merugikan (%*riyanto #/).

Penentuan jumlah angka mikroorganisme sangat penting dilakukan untuk menetapkan

keamanan suatu sediaan *armasi dan makanan. -erbagai metode telah dikembangkan untuk

menghitung jumlah mikroorganisme. Metode tersebut menghitung jumlah sel, massa sel, atau isi

sel yang sesuai dengan jumlah sel (!armita #0). Perhitungan mikroba dapat dilakukan dengan

dua cara yaitu perhitungan secara langsung dan perhitungan secara tidak langsung.

Perhitungan secara langsung dapat dilakukan dengan beberapa cara yaitu1

a. Metode Petro**2!auser

Penghitungan secara langsung dapat dilakukan secara mikroskopis yaitu dengan

menghitung jumlah bakteri dalam satuan isi yang sangat kecil. %lat yang digunakan adalah

Petroff-Hauser Chamber atau Haemocytometer . umlah cairan yang terdapat antara cover glass

dan alat ini mempunyai olume tertentu sehingga satuan isi yang terdapat dalam satu bujur

sangkar juga tertentu. 3uang hitung terdiri dari 4 kotak besar dengan luas " mm5. Satu kotak

besar di tengah, dibagi menjadi #/ kotak sedang dengan panjang ,# mm. Satu kotak sedang

dibagi lagi menjadi "0 kotak kecil. $engan demikian satu kotak besar tersebut berisi 6 kotak

kecil. 7ebal dari ruang hitung ini adalah ," mm. 7inggi contoh yang terletak antara gelas objek

dengan gelas penutup adalah ,# mm (8ardia9, "44#).

b. Metode Plate &ount

%da dua Metode plate count yang sering digunakan, yaitu metode sebaran dan metode

tuang. %sumsi digunakannya metode ini adalah bahwa setiap satu sel mikroba dapat tumbuh dan

akhirnya membentuk satu koloni yang dapat dilihat dengan kasat mata. Pada metode sebaran,

olume yang dibutuhkan adalah ." ml agar sampel tersebut sapat tersebar, terendam, dan

teresap. :arena jika lebih, maka sampel akan mengendap dan mengumpul sehingga menyulitkan

dalam perhitungan (%limuddin, #;)


3/26

Sedangkan perhitungan secara tidak langsung dapat dilakukan dengan beberapa cara

yaitu1

a. Penentuan olume total

&ara ini adalah semacam modi*ikasi penentuan hematokrit pada pengukuran olume total butir2butir darah, misalnya " ml biakan dimasukkan ke dalam tabung reaksi khusus (tabung

hopklins) yang bagian bawahnya berupa silinder dan bergaris ukuran (!adietomo, "44).

b. Metode turbidometri

7eknik ini sudah dipakai sebagai cara mengukur keker han suspensi atas dasar

penyerapan dan pemencaran cahaya yang dilintaskan, sehingga yang mengandung lebih dari "


4/26

jumlah semua koloni diamati untuk memenuhi persyaratan statistik. &awan yang dipilih untuk

menghitung koloni adalah cawan yang mengandung antara + sampai + koloni. rganisme

yang terdapat dalam sampel asal ditentukan dengan mengalikan jumlah koloni yang terbentuk

dengan *aktor pengenceran pada cawan yang bersangkutan (>aluyo, #


5/26

P&% (Plate &ount %gar) adalah suatu medium yang mengandung ,/A tripton, ,#/A

ekstrak khamir, dan ," A glukosa sehingga semua mikroba termasuk bakteri, kapang, dan

khamir dapat tumbuh dengan baik pada medium tersebut (8ardia9, "44+).

Media plate count agar (P&%) dapat ber*ungsi sebagai media untuk menumbuhkan

mikroorganisme. Untuk penggunaannya, digunakan P&% instant sebanyak ##,/ gram untuk "

=iter aBuades. -erdasakan komposisinya, P&% termasuk ke dalam medium semisintetik, yaitu

medium yang komponen dan takarannya sebagian diketahui dan sebagian lagi tidak diketahui

secara pasti. P&% berwarna putih keabuan, berbentuk granula dan merek yang digunakan adalah

Merck. Sebelum dipanaskan tidak larut sepenuhnya dalam air, tetapi masih terlihat serbuk2

serbuknya, berwarna kuning dan terlihat keruh. Setelah dipanaskan serbuk media larut

seluruhnya dalam air, berwarna kuning. (8ardia9, S. "44#).

#.#.+ M% ( Malt Extract Agar )

:arakteristik *isik dari media ini antara lain yaitu memiliki warna coklat pucat saat

sebelum dilakukan pemanasan dan berwarna coklat tua setelah mengalami pemanasan. Media ini

mengandung aBuades / ml, malt ekstrak + g'l, pepton + g'l dan agar "/ g'l. M% pada

umumnya digunakan sebagai media pertumbuhan khamir. $idalam media tersebut mengandung

unsur yang merupakan salah satu mineral yang dapat menunjang pertumbuhan khamir.

#.#./ N%2&a ( Nutrient Agar 2Calcium)

Nutrien agar adalah medium umum untuk uji air dan produk pangan. N% juga digunakan

untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selekti*, dalam artian

mikroorganisme heterotro*.Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak bee*,

pepton, dan agar. Medium N% sebelum pemanasanadalah berbentuk larutan berwarna kuning

keruh sebelum dipanaskan, dan berwarna kuning bening saat setelah dipanaskan. Namun, setelah

pemanasan didapatkan warna dari medium N% lebih jernih bila dibandingkan dengan sebelum

pemanasan. N% merupakan salah satu media yang digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti

uji biasa dari air, produk pangan, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk

mengisolasi organisme dalam kultur murni. :omposisi kimia nutrien agar adalah eksrak bee* "

g, pepton " g, Na&l / g, air desitilat ". ml dan "/ g agar'=. %gar dilarutkan dengan

komposisi lain dan disterilisasi dengan autokla* pada "#"C& selama "/ menit (8athir, #4).


6/26

Mineral merupakan bagian dari sel, unsur penyusun sel yaitu &, , N, ! dan P. Unsur

mineral lain yang diperlukan oleh sel yaitu :, &a, Mg, Ma, S, dan &l. Unsur mineral yang

digunakan dalam jumlah yang sangat sedikit yaitu 8e, Mn, &o, &u, -o, ?n, Mo, %l, Ni, Da, Sc,

Si, 7u dan sebagainya yang tidak dipoerlukan jasad. Unsur yang digunakan dalam jumlah besar

dapat disebut dengan unsur makro, dalam jumlah sedang disebut dengan unsur oligo, dan jumlah

sedikit disebut unsur mikro. Unsur mikro tersebut sering terdapat sebgai ikutan pada garam unsur

makro, dan dapat masuk dalam medium lewat kontaminan gelas tempatnya, atau partikel debu.

Unsur mineral yang digunakan untuk menunjang pertumbuhan bakteri, khususnya -%= maka

digunakan mineral dengan unsur &a dalam media N% sehingga ber*ungsi untuk membantu

menyusun sel, selain itu juga untuk mengatur osmose, kadar ion !E (keasaman, Ph) dan

potensial oksidasi reduksi (redoks potensial) medium.

2.+ "arakteristik Mor,ologi( )isiologi &an "i$ia !e$ua enis Mikroba

#.+." -akteri

Menurut Pelc9ar dan &han ("4;;), bakteri adalah protista yang bersi*at prokariot yang khas

dan bersel tunggal (uniseluler). Sel2selnya secara khas membentuk bola (kokus), batang

(bacillus) atau spiral (spirullum). $iameternya sekitar ,/2", µm dan panjangnya ",/2#,0 µm.

Semua bakteri bersel tunggal walaupun dalam beberapa keadaan dapat dijumpai gumpalan yang

kelihatan bersel banyak. -akteri dibagi menjadi tiga bentuk yang utama 1". :okus F bulat

#. -asil F berbentuk silinder atau batang

+. Spiral F batang melengkung atau melingkar2lingkar. (8ardia9, "44#).

-erdasarkan komposisi dinding selnya, bakteri dibedakan menjadi dua yaitu bakteri Gram

positi* dan bakteri Gram negati*. -akteri Gram positi* adalah bakteri yang memiliki lapisan

peptidoglikan (molekul yang terdiri dari asam amino dan gula) yang tebal (#2; nm) dan terdiri

atas 02" persen peptidoglikan. =apisan peptidoglikan pada bakteri Gram negati* lebih

tipis dibandingkan dengan bakteri Gram positi* dan mengandung lebih sedikit peptidoglikan ("2

# persen), tetapi mempunyai membran luar yang tebal yang tersusun dari protein, *os*olipida,

dan lipopolisakarida sehingga bersama2sama dengan lapisan peptidoglikan, keduanya

membentuk mantel pelindung yang kuat untuk sel (Pelc9ar, "4;;).


7/26

Sebagian besar bakteri mempunyai suhu pertumbuhan antara 6/ F //o& dan disebut

golongan bakteri thermo*ilik. -eberapa bakteri mempunyai suhu pertumbuhannya antara # F

6/o& disebut golongan bakteri meso*ilik, dan lainnya mempunyai suhu pertumbuhan dibawah

#o& disebut bakteri psikro*ilik (Muchtadi, "4;4).

Umumnya bakteri membutuhkan air (%ailable >ater) yang lebih banyak dari kapang dan

ragi. Sebagian besar daribakteri dapat tumbuh dengan baik pada aw mendekati ",. Hni berarti

bakteri dapat tumbuh dengan baik dalam konsentrasi gula dan garam yang rendah kecuali bakteri

F bakteri yang memiliki toleransi terhadap konsentrasi gula dan garam yang tinggi. Media untuk

sebagian besar bakteri mengandung gula tidak lebih dari "A dan garam tidak lebih dari ,;/A

(larutan garam *isiologis). :onsentrasi gula +A 2 6A dan garam " F #A dapat menghambat

pertumbuhan beberapa jenis bakteri (Muchtadi,"4;4).

#.+.# :apang

:apang adalah *ungi multiseluler yang mempunyai *ilamen, dan pertumbuhannya pada

makanan mudah dilihat karena penampakannya yang berserabut seperti kapas. Pertumbuhannya

mula2mula akan berwarna putih, tetapi jika spora telah timbul akan terbentuk berbagai warna

tergantung dari jenis kapang. :apang terdiri dari suatu thallus (jamak I thalli) yang tersusun dari

*ilamen yang bercabang yang disebut hi*a (tunggal I hypha, jamak I hyphae). :umpulan dari

hi*a disebut miselium (tunggal I mycelium, amak I mycelia) (Pelc9ar,#/).

Si*at *isiologi kapang antara lain adalah sebagai berikut 1

". :ebutuhan air

Pada umumnya kebanyakan kapang membutuhkan %w minimal untuk pertumbuhan lebih

rendah dibandingkan dengan khamir dan bakteri.:adar air bahan pangan kurang dari "62"/A,

misalnya pada beras dan serealia, dapat menghambat ataumemperlambat pertumbuhan

kebanyakan khamir.

#. Suhu pertumbuhan

:ebanyakan kapang bersi*at meso*ilik yaitu tumbuh baik pada suhu kamar.Suhu

optimum pertumbuhan untuk kebanyakan kapang adalah sekitar #/2+& tetapi beberapa dapat

tumbuh pada suhu +/2+


8/26

Semua kapang bersi*at aerobic, yaitu membutuhkan oksigen untuk pertumbuhannya.

:ebanyakan kapang dapat tumbuh pada kisaran p! yang luas, yaitu#2; ,/ tetapi biasanya

per tumbuhannya akan lebih baik pada kondi si asam atau p! rendah.

6. Makanan

Pada umumnya kapang dapat menggunakan berbagai komponen makanan, dariyang

sederhana hingga kompleks.:ebanyakan kapang memproduksi en9im hidrolitik, missal amylase,

pectinase, proteinase dan lipase, oleh karena itu dapat tumbuh pada makanan2makanan yang

mengandung pati, pektin, protein atau lipid.

/. :omponen penghambat

-eberapa kapang mengeluarkan komponen yang dapat menghambat organisme

lainnya.:omponen itu disebut antibiotic, misalnya penisilin yang diproduksi oleh Penicillium

chrysogenu dan claasin yang diprosukdi oleh %spergillus claatus.Pertumbuhan kapang

biasanya berjalan lambat bila dibandingkan dengan pertumbuhan khamir dan bakteri.leh karena

itu jika kondisi pertumbuhanmemungkinkan semua mikroorganisme untuk tumbuh, kapang

biasanya kalah dalam kompetisi dengan khamir dan bakteri.7etapi sekali kapanh dapat mulai

tumbuh, pertumbuhan yang ditandai dengan pembentukan miselium dapat berlangsung dengan

cepat (8ardia9, "4;4).

:apang mempunyai cirri2ciri mor*ologi yang spesi*ik secara makroskopis dan

mikroskopis. &iri2ciri tersebut dapat digunakan sebagai identi*ikasi dan determinasi.Pengamatan

secara mikroskopis dapat berupa bersekat atau tidaknya hi*a, bentuk percabangan hi*a, stolon,

ri9oid , sel kaki badan buah, dasar badan buah,pendukung badan buah, dan bentuk spora

(Sutariningsih dkk, "44ebster dan >eber, #


9/26

Menurut Pelc9ar (#/), khamir hidupnya sebagian ada yang sapro*it dan ada beberapa yang

parasitik. Sel khamir mempunyai ukuran yang berariasi, yaitu dengan panjang "2/ Km sampai

#2/ Km, dan lebar "2" Km. :hamir termasuk *ungi tetapi dibedakan dari kapang karena

bentuknya yang bersi*at uniseluler. 3eproduksi khamir terutama dengan cara pertunasan. Sebagai

sel tunggal khamir tumbuh dan berkembang biak lebih cepat jika dibandingkan dengan kapang

karena mempunyai perbandingan luas permukaan dengan olume yang lebih besar.

:hamir pada umumnya diklasi*ikasikan berdasarkan si*at2si*at *isiologinya dan tidak atas

perbedaan mor*ologinya seperti pada kapang.Yeast dapat dibedakan atas dua kelompok

berdasarkan si*at metabolismenya yaitu bersi*at *ermentati* dan oksidati*. enis *ermentati* dapat

melakukan *ermentasi alkohol yaitu memecah gula (glukosa) menjadi alkohol dan gas contohnya

pada produk roti.Sedangkan oksidati* (respirasi) maka akan menghasilkan &# dan !#.

:eduanya bagi yeast adalah dipergunakan untuk energi walaupun energi yang dihasilkan melalui

respirasi lebih tinggi dari yang melalui *ermentasi (Natsir, #+).

2.- Meto&e !terilisasi

Sterilisasi yang umum dilakukan dapat berupa1

a. Sterilisasi secara *isik (pemanasan, penggunaan sinar gelombang pendek yang dapat dilakukan

selama senyawa kimia yang akan disterilkan tidak akan berubah atau terurai akibat temperatur

atau tekanan tinggi). $engan udara panas, dipergunakan alat Lbejana'ruang panas (oen dengan

temperatur "


10/26

jangan diletakkan sembarangan dan dibuka2buka karena isi botol atau tempat medium akan

meluap dan hanya boleh dibuka ketika manometer menunjukkan angka serta dilakukan

pendinginan sedikit demi sedikit. Medium yang mengandung itamin, gelatin atau gula, maka

setelah sterilisasi medium harus segera didinginkan.&ara ini untuk menghindari 9at tersebut

terurai.Medium dapat langsung disimpan di lemasi es jika medium sudah dapat dipastikan steril

($widjoseputro, "446).

2. "arakteristik Ba'an &an Mikroba /ang Ter&apat Dala$ Ba'an

#./." 7ape singkong

7ape adalah hasil *ermentasi dengan accharomyces !astorianus" accaharomyces

heterogenicus" En#omyco!sis s!" Chlamy#omucor s!" $hi%o!us s! #an &acillus s!' Semua

mikroorganisme tersebut diinokulasi dengan ragi. 7ape singkong terbuat dari ketela pohon

(singkong). Sumber karbohidrat tersebut dimasak sepenuhnya sebelum diinokulasikan. Setelah

*ermentasi # F + hari, karbohidrat tersebut menjadi cairan semi padat atau kental yang

merupakan campuran dari gula, alkohol, aldehid dan asam, dimana akan memberikan rasa dan

aroma yang berbeda pada produk (%saihl, "4;/).

7ape dihasilkan dengan cara *ermentasi ragi yang merupakan inokulum biakan dari

khamir, kapang dan bakteri. Mikroorganisme tersebut akan menghasilkan panas dalam keadaan

anaerob sehingga akan menghasilkan en9im yang dapat merombak karbohidrat menjadi

komponen yang lebih sederhana sehingga akan lebih mudah untuk dicerna. Selama proses

*ermentasi akan terjadi perubahan *isik, kimia dan mikrobiologi. Perubahan *isik terjadi ubi kayu

yang tadinya keras menjadi lembek.Perubahan kimia terjadi disebabkan oleh akti*itas

mikroorganisme yang terdapat pada starter (ragi), dimana aktiitas2aktiitas mikroorganisme

tersebut sangat dibutuhkan untuk dapat memproduksi gula, asam serta pembentukan alkohol dan

aroma dari substrat karbohidrat (>inarno, dkk, "4;0).Sedangkan perubahan mikrobiologi yang

terjadi adalah adanya perubahan warna, pembentukan lendir, pembentukan gas, bau asam, bau

alkohol, bau busuk dan berbagai perubahan lainnya. ika tape dikonsumsi dalam jumlah yang

banyak akan menimbulkan rasa panas dalam perut karena kadar alkohol tinggi (!idayat, et al .,

#0).Proses *ermentasi tape mengubah rasa, aroma, nilai gi9i dan palabilitas yang

mempengaruhi perubahan substrat menjadi komponen lain (8ardia9, "44#). Menurut :o Swan

$jien ("4;#) perubahan tersebut disebabkan oleh aktiitas en9im, komposisi substrat, kondisi


11/26

lingkungan, tipe dan jumlah mikroba pada awal atau selama *ermentasi. !al itu juga

meningkatkan aseptibilitas, digestabilitas dan menurunkan kandungan !&N sekitar ;+,6A

(Suliantari dan >iniati, "4;4).

Mikroorganisme yang la9im terdapat dalam ragi tape dan sangat berperan dalam

*ermentasi tape biasanya didominasi oleh kapang dari genus Amylomyces" $hi%o!us dan Mucor

serta khamir dari genus En#omyco!sis" accharomyces" Hansenula dan Can#i#a. Setiap

mikroorganisme tersebut mempunyai peranan masing2masing, terutama khamir dari genus

accharomyces berperan dalam pembentukan alkohol (Suliantari dan >iniati, "4;4).

#./.# 7empe

7empe adalah produk olahan kedelai hasil *ermentasi jamur 3hi9opus sp.(3usmin dan :o,

"4


12/26

*ermentasi yaitu *ermentasi kapang dan *ermentasi dalam larutan garam sehingga terdapat lebih

dari satu jenis mikroba yang berperan selama proses *ermentasinya. $' oligos!orus" A' ory%ae

dan $' ory%ae berperan pada awal *ermentasi (dikenal sebagai *ermentasi kapang), selanjutnya

jika kedelai yang telah berkapang kemudian direndam dalam larutan garam, maka yang dominan

tumbuh adalah bakteri asam laktat dan khamir halo*ilik. -eberapa jenis mikroba yang tumbuh

selama *ermentasi garam dalam pembuatan tauco adalah (' #elbruecii" Hansenula s!, dan

*ygosaccharomyces (Nurwitri et al #


13/26

+. :arbohidrat +,/ gr

6. Mineral #+, gr

/. :alsium ", mg

0. 8os*or #/, mg


14/26

#./.0 :ecap

:ecap adalah ekstrak dari *ermentasi kedelai yang dicampurkan dengan bahan2bahan lain

yang digunakan untuk meningkatkan *laor dari makanan. :arakteristik pembentukan *laor dan

aroma pada kecap tergantung pada cara produksi kecap dan juga bahan baku serta strain

mikroorganisme yang digunakan. 7ahap2tahap utama dari produksi kecap yang melibatkan

pembentukan *laor antara lain perlakuan panas terhadap bahan baku, pembentukan koji

(*ermentasi kapang), *ermentasi moromi (*ermentasi bakteri asam laktat dan khamir), aging , dan

pasteurisasi (Nunomura dan Sasaki, "44#).

Proses pembuatan kecap terdiri dari lima tahapan utama yaitu perlakuan panas terhadap

bahan baku kedelai, *ermentasi koji oleh As!ergillus ory%ae atau A' soyae, *ermentasi moromi

oleh Pe#iococcus halo!hilus dan *ygosaccharomyces rouxii, ekstraksi moromi dan pasteurisasi

(Nunomura dan Sasaki, "44#)..

BAB +. MET0D0L0I PA"TI"UM

+.1 Alat &an Ba'an

+."." %lat

a. 7abung 3eaksi

b. 3ak 7abung 3eaksi

c. -unsen

d. Gelas Ukur " ml

e. Pipet 7etes

*. arum se

g. :eranjang Plastik

h. =abu 7akar / ml

i. Penangas =istrik j. 7abung 8ilm

k. Spektro*otometer

l. %utokla*

m. en

n. ksikator


15/26

o. Pipet Dolum

p. -ulb Pipet

B. rlenmeyer

r. Pi Pump

s. Pengaduk Spatula

t. &awan Petri

u. :uet

. Hnkubator

w. -eakker Glass / ml dan " ml

@. -otol 7imbang

y. Neraca %nalitik

+.".# -ahan

a. -iakkan :hamir

b. %Buades

c. :apas

d. Spritus

e. Media P&%

*. =abel

g. 7issue

h. %lkohol

i. :ertas :oran

j. M-

k. Media P$%

l. 7ape Singkong

m. 7empe

n. 7auco

o. 7erasi

p. 7ape :etan

B. :ecap


16/26

BAB -. HA!ILPENAMATAN DAN PEHITUNAN

-.1 Hasil Penga$atan

6."." Pengukuran %bsorbansi untuk :ura Standar

umlah

&uplikan (ml)

Pengukuran %bsorbansi

U" U#

" ,"/" 2

# ,#;# 2

+ .6# 26 ,6;0 2

/ ,0/4 2

0 ,046 2

< ,


17/26

P&% 2 2 / " < / 0 # 2

M% 2 2 2

Na2&a 2 2 2 2 2 2 2 "

/'7%P

:7%N

P$% 2 2 2

P&% 2 2 ; " ; 6 + + 2

M% ++ +0 # " 2 2 2 Na2&a 2 2 2 2 2 2 2

0':&%P

P$% 0 + " "/ ; 6 2 2 2

P&% 2 2 "+0 "/6 ";# 04 "+< #+6 2

M% 2 2 2

Na2&a 2 2 2 2 2 2 2

6.".6 Pengukuran %bsorbansi Mikroba dalam Media M-

:elompok'SampelPengukuran %bsorbansi

" #

" ,06" ,/6# ,/


18/26

0 ,0 mg'ml

< ,< mg'ml

6.#.+ Perhitungan umlah Mikroba

:el'sampelMedia

Pengenceranumlah

mikroba

"'7%PSHNG:N

G

"20 "2< "2; "24 "2"

P$% ",/ ,/ 2 ",/ @ "0

P&% ; 0,/ "0,/ 2 ; @ ";

M% +4 / " 2 2 +,4 @ "<

Na2&a 2 2 2

#'7MP

P$% 6,/ ",/ ,/ 2 2 6,/ @ "0

P&% 2 /6 "6# / 2 ",6# @ ""

M% "6 "6,/ ,/ 2 2 ",6 @ "< Na2&a 2 2 2

+'7%U&

P$% #,/ ",/ " 2 2 #,/ @ "0

P&% 2 ##/ 6,/ " 2 #,+ @ ";

M% ",/ ,/ 2 2 ",/ @ "0

Na2&a 2 2 2

6'73%SH

P$% ,/ " 2 2 ,/ @ "0

P&% 2 + 0 6 2 + @ "<

M% 2 2

Na2&a 2 2 2 " " @ "4

/'7%P:7%N

P$% 2 2

P&% 2 4 0 + 2 4 @ "<

M% +6,/ " ,/ 2 2 +,/ @ "<

Na2&a 2 2 2

0':&%P

P$% 6,/ "#,/ 0 2 2 6,/ @ "0

P&% 2 "/6 "#/,/ ";+,/ 2 ",/6 @ "4

M% 2 2

Na2&a 2 2 2

6.#.6 Pengukuran %bsorbansi Mikroba dalam Media M-


19/26

:elompok :onsentrasi (@)

mg'mlumlah sel (mg)

:onsentrasi sel pada

cairan *ermentasi M-(mg'ml)

" .66


20/26

/.".+ Pembuatan bioetanol

/ ml M- dalam labu takar yang telah disiapkan ditambahkan gula /A (#,/ g'/ ml).

Penambahan gula digunakan sebagai substrat untuk pertumbuhan mikroba (khamir). Selain itu,

juga ditambahkan isolat ' cerevisiae (+ F 6 ose). Selanjutnya, dishaker pada suhu ruang selama

O 6; jam untuk menghomogenkan. :emudian, disentri*uge selama / F " menit untuk

memisahkan antara cairan M- dengan mikroba (' cerevisiae). ndapan dicuci dengan aBuades

" ml, diorte@ untuk menghomogenkan dan disentri*uge kembali / F " menit untuk

memisahkan antara aBuades dengan mikroba (' cerevisiae). Setelah itu, dicuci kembali dengan

aBuades " ml, diorte@ untuk menghomogenkan. =alu diencerkan ke / ml dan diukur

absorbansinya dengan panjang gelombang 0 nm.

/.".6 Pengenceran

Produk *ermentasi (tempe, tauco, tape ketan, tape singkong, kecap dan terasi) masing2

masing diambil " gram dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi aBuades 4 ml dengan

konsentrasi "2". :emudian diambil ," ml dan dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi aBuades

4,4 ml sehingga konsentrasinya menjadi "2+. $ilakukan proses pengenceran yang sama sampai

mencapai konsentrasi "24. Pada setiap seri pengenceran digunakan pipet yang berbeda agar tidak

terkontaminasi atau tetap steril dan pengencerannya akurat. Pada konsentrasi " 2/ diambil " ml

dan dimasukkan ke dalam 6 cawan petri steril (# cawan untuk P$% dan # cawan untuk M%)

sehingga konsentrasinya menjadi "20, pada konsentrasi "2


21/26

Pada pembuatan kura standar menggunakan tujuh macm olume cuplikan yang

dijadikan sebagai titik bantu yaitu " ml, # ml, + ml, 6 ml, / ml, 0 ml dan < ml. -erdasarkan

penimbangan massa sel didapatkan hasil " mg'ml. Sehingga diperoleh konsentrasi dari masing2

masing tabung. :onsentrasi ini diperoleh dengan cara mengalikan jumlah olume cuplikan

dengan massa sel'" ml. $ari hasil pengukuran nilai absorbansi menggunakan spektro*otomer,

diperoleh nilai masing2masing konsentrasi secara berurutan yaitu ,"/" ,#;# ,6# ,6;0

,0/4 ,046 dan ,


22/26

@ "


23/26

menunjukkan adanya penyimpangan. Penyimpangan kemungkinan terjadi karena adanya

kontaminasi saat perlakuan. Sedangkan jumlah mikroba pada media P$% lebih banyak daripada

media M%. !al ini sesuai dengan literatur bahwa pada tauco mikroba yang dominan tumbuh

adalah kapang karena mempunyai pengaruh besar terhadap proses *ermentasi dengan spesies

As!ergillus dan $hi%o!us. Namun dapat diketahui adanya penyimpangan penyimpangan karena

pada media N%2&a tidak ditumbuhi bakteri pembentuk asam. Seharusnya pada sampel tauco

terdapat bakteri pembentuk asam, karena ada bakteri asam yang berperan dalam *ermentasi

tauco. !al ini kemungkinan terjadi karena perlakuan yang terlalu dekat dengan bunsen saat

pemipetan sehingga pipet menjadi terlalu panas yang menyebabkan mikroba mati sebelum

ditumbuhkan. Selain itu mungkin juga disebabkan karena tingkat pengenceran yang terlalu

tinggi.

Pada kelompok empat dengan sampel terasi, jumlah kapang pada media P$% adalah

sebesar ",/ @ "0, pada media P&% sebesar ; @ ";, pada media M% +,4 @ "


24/26

&a karena tidak ada bakteri pembentuk asam yang tumbuh. Menurut literatur seharusnya pada

sampel tape ketan terdapat bakteri pembentuk asam, karena si*at tape sendiri yang memiliki rasa

asam. 7idak adanya bakteri asam yang tumbuh kemungkinan terjadi karena perlakuan yang

terlalu aseptis sehingga pipet menjadi terlalu panas yang menyebabkan mikroba mati sebelum

ditumbuhkan.

Pada kelompok enam dengan sampel kecap, didapatkan jumlah kapang pada media P$%

adalah sebesar 6,/ @ "0, pada media P&% terdapat jumlah mikroba sebesar ",/6 @ "4, dan pada

media M% dan N%2&a tidak ditumbuhi miroba. Pada produk kecap, mikroba yang berperan

selama *ermentasi adalah kapang, bakteri asam laktat dan khamir. Namun yang paling tinggi

jumlahnya adalah pada media P&%, dengan jumlah yang dominan adalah bakteri. !al ini

menunjukkan terjadinya penyimpangan karena adanya kontaminasi. Selain itu juga terjadi

penyimpangan karena pada media M% dan N%2&a tidak ditumbuhi bakteri pembentuk asam.

Menurut literatur pada sampel kecap diperkirakan terdapat bakteri asam laktat seperti

(euconostoc mesenteroi#es, Pe#iococcus cerevisiae, dan (acobacillus !lantarum' 7idak

tumbuhnya bakteri ini kemungkinan terjadi karena perlakuan yang terlalu aseptis sehingga pipet

menjadi terlalu panas yang menyebabkan mikroba mati sebelum ditumbuhkan.

BAB 4. PENUTUP

4.1 "esi$pulan

-erdasarkan pembahasan di atas, dapat disimpulkan bahwa1

a) 7ujuh olume cuplikan pada pembuatan kura standar digunakan sebagai titik bantu.

b) Pada pembuatan kura standar diperoleh persamaan regresi yaitu y I ",#0/@ E ,#/ dan nilai 3 #

sebesar ,444;.

c) Perbedaan konsentrasi M- yang dihasilkan tidak signi*ikan, nilai konsentrasi tertinggi adalah

pada kelompok " dan # yaitu #,# mg'ml sedangkan nilai konsentrasi terendah yaitu pada

kelompok + yaitu ",/ mg'ml.

d) Nilai konsentrasi M- pada kelompok + yang paling menyimpang, hal ini dimungkinkan karena

pencucian yang kurang bersih.

e) Mikroba yang tidak tumbuh'mati kemungkinan karena perlakuan yang terlalu aseptis sehingga

pipet yang digunaka terlalu panas.


25/26

4.2 !aran

a) Sebaiknya praktikum dilakukan # shi*t agar hasilnya lebih maksimal.

b) Selama praktikum berlangsung, sebaiknya para praktikan lebih menjaga ketenangan agar tidak

terjadi kontaminasi.

c) 7erima kasih kepada asisten yang telah membantu jalannya praktikum.

DA)TA PU!TA"A

-SNQ -adan Standarisasi Nasional Hndonesia.#4. N. 3411-/005 tentang 6em!e 7e#elai. akarta1-adan Standarisasi Nasional Hndonesia.

%*rianto, dan . =iiawaty, #/. Penga8etan #an Pengolahan .an. :anisius.

Jogyakarta.!adiwiyoto, S, "4;+. !asil2!asil olahan Susu, Hkan, $aging dan 7elur. Jokyakarta1=iberty.

%*riyanto ddy. #/. Paan .an #an Perembangannya. akarta 1 Penerbit :anisius (halaman 1 "6)

%limuddin, %li. #;. Mirobiologi Dasar . . Makassar 1 8MHP% UNM.

%saihl. "4;/. 9oo# 6echnology an# Nutrition. Jogyakarta1 UGM2Press.%stawan. #6' 6enologi Pengolahan Pangan Nabati 6e!at :una. akarta1 %kademi Presindo.

-uckle, :.%., dwards, G.!. 8leet, dan !. >ooton. "4;/. .lmu Pangan 6er;emahan). akarta1

Uniersitas Hndonesia.$widjoseputro, $. "446. Dasar-Dasar Mirobiologi. akarta1 $jambatan.

$widjoseputro, $. "44;. Dasar-Dasar Mirobiologi. Malang 1 $jambatan.

skin dalam 7ensiska et al. #


26/26

Nunomura, N. dan Sasaki, M. "44#. iniati P.3. "4;4. 6enologi 9ermentasi =mbi-umbian #an &i;i-bi;ian. -ogor1 P%U

Pangan dan Gi9i2HP-.

Suparno dan .7 Martini. "44#. 6erasi &ubu . :umpulan2kumpulan hasil2hasil Penelitian Pasca PanenPerikanan. akarta1 -adan Penelitian dan Pengembangan Pertanian dan Perikanan.

Suprapti., M.=, ##. Membuat 6erasi. Jogyakarta1 :anisius.Suriawiria, U. #/. Mirobiologi Dasar . akarta1 Papas Sinar Sinanti.

>aluyo, =ud. #inarno.8.g, "4;0. Air untu .n#ustri Pangan. akarta1 Gramedia.

Laporan Analisis Mikrobiologi

Documents

Transcript of Laporan Analisis Mikrobiologi